notch-1、p16在宮頸癌中的表達及臨床意義

李 宇 李文娟 宋慧勝 劉 祺

廣東省清遠市人民醫院放療科，廣東清遠 511500

宮頸癌是婦女最為常見的一種惡性腫瘤，全球每年約有25萬人死于宮頸癌，其發病率呈上升及年輕化趨勢。宮頸癌的發病機制目前尚未被完全闡明，但感染人乳頭瘤病毒（HPV）被廣泛證實為該病發生過程中重要的危險因子[1-2]。研究表明，notch-1受體異常表達會導致細胞過度增殖，繼而促進腫瘤的形成；p16基因是重要的抑癌因子，參與了腫瘤細胞的周期調節，其表達的強弱可間接反映HPV 病毒量。故該文應用免疫組化（SP）技術檢測notch-1、p16 在該院2010年1月—2014年6月收治的56 例宮頸癌及40 例正常宮頸組織中的表達情況及核異位情況，闡明其活化表達與宮頸癌發生發展的關系，提高宮頸癌診斷的靈敏度，為腫瘤的防治提供新的方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的宮頸癌患者56 例作為研究對象，年齡27～73歲，平均（45.1±9.7 歲）。宮頸癌的診斷標準及分級標準以國際婦產科聯盟（FIGO，2000年）為準[3]。其中宮頸鱗癌30 例、腺癌26 例，病例分級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級者分別為13、19、24 例；另取40 例因子宮肌瘤行全子宮切除、且經病理證實無宮頸病變的宮頸組織標本作為對照，年齡26～75 歲，平均（44.8±8.2 歲）。兩組對象一般資料的差異不具有統計學意義，具有可比性。兩組的組織標本均保存于液氮中，且無放化療或局部治療史。

1.2 方法

標本經常規10%福爾馬林固定，脫水后經石蠟包埋，切片，厚度為4 μm，并將切片敷貼于載玻片上，按試劑盒說明書進行免疫組化操作。注意將兔多克隆notch-1 抗體稀釋至1:80，鼠單克隆p16 抗體稀釋至1:100，并設置PBS 作為著色對照標準。

1.3 判斷標準

在光鏡高倍視野下觀察，陽性的判斷可根據胞核或胞漿中是否呈現粗細不一棕黃至棕褐色顆粒，核著色時代表存在核異位或活化表達。無著色則為陰性。

1.4 統計方法

應用SPSS16.0 統計軟件進行數據統計分析，計數資料用采用χ2檢驗，以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

宮頸鱗癌及宮頸腺癌組織中的核異位比率均顯著高于正常宮頸組織，差異具有統計學意義(P<0.05)；3 種組織中p16 的陽性率分別為75%、83.3%和92.3%，相互比較差異無統計學意義(P>0.05)。具體見表1。

表1 notch-1、p16 在不同類型宮頸組織中陽性表達情況及分布情況

3 討論

3.1 notch-1 在宮頸癌中表達及臨床意義

notch 是位于細胞膜上的一個單次跨膜的異二聚體受體，參與血細胞分化、胚胎發育等重要生理過程。研究發現，notch 在血液系統腫瘤等多種實體瘤中存在表達異常，在腫瘤細胞的增殖、分化、發育及凋亡過程中發揮重要作用[4-5]：notch 表達異常，細胞無法正常分化而過度繁殖，增加了腫瘤發生率。已有的研究表明，notch-1 受體與宮頸癌細胞的增殖密切相關。該研究利用SP技術發現，notch-1 核異位在正常宮頸組織中的發生率僅為5%，而在宮頸腺癌、鱗癌中的發生率達到了43.3%和57.7%，差異有統計學意義。提示notch-1 核異位可能是宮頸腫瘤病變因素。

3.2 p16 在宮頸癌中表達及臨床意義

p16 基因是細胞周期調節的重要因子，可抑制細胞周期，進而抑制細胞的異常增殖。p16 可特定性競爭性結合CDK4 進而導致CDK4 的活性被抑制，抑制了細胞由G1 期向S 期的轉變同時阻止了DNA 合成的啟動[6]。CDK4 激酶的活性被抑制也將導Rb不能磷酸化，未磷酸化的Rb 增多而抑制細胞增殖。故p16 基因的變異或其蛋白的失活會導致cyclinD→CDK4/6→Rb→EF 細胞周期調節途徑失控，而使細胞過度增殖，導致腫瘤發生。研究表明，p16 在具有HPV 感染的宮頸癌中表達異常，且其表達與宮頸癌病情嚴重程度存在正相關的關系。因此，可認為HPV 感染可能導致腫瘤細胞中p16 的表達增高，而HPV 通過E6、E7 蛋白介導而導致宮頸癌發生，即HPV 感染是導致宮頸癌發生的主要病因。研究表明，p16 表達的強弱可作為檢測是否感染了HPV 的一種簡單可靠的方法，且其靈敏度和特異度分別為95%，96%，通過檢測p16 可提高宮頸癌診斷的靈敏度，具有一定的臨床意義。該組研究3 種組織中p16 的表達分別為75%、83.3%和92.3%，三者相互比較差異無統計學意義(P>0.05)。該結果和許多文獻[7-8]中報道不一致，對此的理解是HPV 感染導致了p16 的表達增大，且并不是所有HPV 感染都發展為宮頸癌，且該組實驗所選的樣本數較少。

通過聯合檢測notch-1、p16 的表達可提高宮頸癌診斷的靈敏度，為其防治提供新的方向，具有一定的臨床意義。

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