幾種婦科中藥栓劑和洗液的體外抑菌對比研究

楊平榮 楊英 石勇

(1.甘肅省藥品檢驗研究院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅省醫(yī)療器械檢驗所,甘肅蘭州 730101)

幾種婦科中藥栓劑和洗液的體外抑菌對比研究

楊平榮1楊英2石勇2

(1.甘肅省藥品檢驗研究院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅省醫(yī)療器械檢驗所,甘肅蘭州 730101)

目的：觀察中藥栓劑和洗劑的體外抑菌活性。方法：用瓊脂擴散法和微量稀釋法研究中藥栓劑和洗劑體外抑菌活性,以抑菌圈和最小抑菌濃度(MIC)為評價指標。結(jié)果：中藥栓劑和洗劑具有抑制金黃色葡萄球菌、耐藥表皮葡萄球菌、非耐藥金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單孢桿菌、白色念珠菌的生長繁殖的活性。不同制劑以及不同濃度抑菌活性有差異。結(jié)論：苦參霉菌栓和復方黃松洗液具有較強的抗菌活性。尤其對臨床分離菌株白色念珠球菌和耐藥表皮葡萄球菌有較強的抑制作用,具有較高的臨床應用價值。

中藥栓劑和洗劑 抑菌活性 最小抑菌濃度

陰道炎是最為常見的婦科疾病之一，常常困擾著廣大婦女。近年來，由于社會競爭的加劇，生活節(jié)奏的改變，導致一些婦女的免疫力下降，陰道炎的發(fā)病率逐年增加，而且它可引起多種婦產(chǎn)科疾病，如盆腔炎，以及早產(chǎn)、產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎等。

陰道炎因致病菌的不同主要分為細菌性、霉菌性、滴蟲性陰道炎。引起婦科疾病的致病菌有大腸桿菌、淋球菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌等細菌和白色念珠菌等真菌[1]。白色念珠菌屬重要的條件致病菌，白色念珠菌引起的陰道炎發(fā)病率逐年升高，目前臨床上用于治療細菌，霉菌等引起陰道炎的中藥制劑品種較多的，如何選用一種理想的藥物，提高療效.是臨床用藥的一個問題.而且隨著國家對藥品實行處方藥和非處方藥的分類管理，鼓勵消費者在藥店自信判斷，購買和使用非處方藥，隨著醫(yī)藥超市的發(fā)展，很多人選擇自己購藥治病，為此，筆者選擇了目前常用的兩種栓劑和兩種洗劑進行體外抑菌實驗，旨在為臨床合理用藥，指導合理購藥提供依據(jù)。

1 材料

1.1 供試藥品

蒙伊苦參霉菌栓(內(nèi)蒙古天成有限責任公司，批號：20060206)；

治糜靈栓(通化金馬藥業(yè)集團股份有限公司，批號：20060109)；

復方黃松洗液(廣西源安堂藥業(yè)有限公司，批號：200604723)；

紅核婦潔洗液(生產(chǎn)企業(yè)：深圳帝陽藥業(yè)有限公司，批號：20060601)。

1.2 試驗菌種

標準菌株：金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 25923、大腸桿菌(Escherichia coli)ATCC 25922、銅綠假單孢桿菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC2785、臨床分離菌：枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、耐藥表皮葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis)、白色念珠菌(Candida albicans)、非耐藥金黃色葡萄球菌(methicillin-sensitive Staphylococcus aureus)、糞腸球菌(Enterococccus faecalis)、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)。以上菌株由甘肅省臨床檢驗中心提供。

1.3 培養(yǎng)基及試劑

MH瓊脂培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(購于中國藥品生物制品鑒定所)DMSO(細胞級別Sigma分裝)。

2 方法

2.1 供試藥品制備

苦參霉菌栓，治糜栓用DMSO溶解，配制成濃度為0.1g/ml。

紅核婦潔洗液和復方黃松洗液測試濃度為原液及10倍稀釋液，10倍稀釋液也為藥物的臨床使用濃度。

表2. 藥物最小抑菌濃度(MIC)結(jié)果(單位:mg/ml)Table2. Minimum inhibitory concentrations of Ershiwuwei Songshi Pills (mg/ ml)

2.2 菌液制備

平板劃線活化菌種，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h，挑取單菌落，接種于1ml生理鹽水中作為初始菌懸液，吹打均勻；

菌懸液a：吸取初始菌懸液50μl于950μl生理鹽水中混勻，調(diào)節(jié)菌液濃度為106CFU/ml，用于抑菌圈測定；

菌懸液b：吸取初始菌懸液500μl于10ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)菌液濃度為106CFU/ml，用于最小抑菌濃度(MIC)的測定。

2.3 抑菌圈測定

制備MH瓊脂培養(yǎng)基平板和PDA培養(yǎng)基平板，用無菌移液吸取菌懸液a200μl滴加于MH瓊脂培養(yǎng)基平板和PDA培養(yǎng)基平板(用于白色念珠球菌)表面，涂布均勻，放置牛津杯，待菌液浸入且牛津杯吸附后加藥樣于牛津杯中，供試藥物的體積以及濃度分別為：苦參霉菌栓和治糜栓加樣量為100μl，200μl，濃度0.1g/ml配制液， 紅核婦潔洗液和復方黃松洗液加100μl的原液及10倍稀釋液，同時設(shè)立對照，以左氧氟沙星為細菌陽性對照， 氟康唑為白色念珠球菌的陽性對照，溶劑為陰性對照，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h(白色念珠球菌30℃培養(yǎng)48h)，測定抑菌直徑DD。實驗重復兩次，每次三個平行，數(shù)據(jù)取平均值。

2.4 最小抑菌濃度(MIC)的測定

采用微量稀釋法[2-3]，方法加以改進。96孔細胞培養(yǎng)板中每孔加100μl牛肉膏液體培養(yǎng)基，分別加入100μl用100mg/ml的苦參霉菌栓和治糜栓配制液，采用二倍稀釋法，稀釋得到藥液濃度分別為50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.195、0.098、0.049mg/ml。紅核婦潔洗液和復方黃松洗液加入100μl原液對比稀釋，得一系列體積百分濃度。同時設(shè)培養(yǎng)基對照孔、菌液對照孔以及培養(yǎng)基與藥液對照孔，微孔板加蓋并用封口膠密封以減少孵育過程中水分的蒸發(fā)，將微孔板放在鋪有濕紗布的方形搪瓷盤中，細菌于37℃溫箱中孵育24h，白色念珠球菌于28℃溫箱中孵育48h，眼觀無細菌生長孔所含最低藥物濃度即為最小抑菌濃度。

3 結(jié)果

3.1 供試藥物抑菌圈結(jié)果

實驗以金黃色葡萄球菌、耐藥表皮葡萄球菌、非耐藥金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌代表革蘭氏陽性菌，以大腸埃希菌、銅綠假單孢桿菌代表革蘭氏陰性菌，白色念珠菌代表酵母樣真菌對這四種婦科栓劑和洗劑進行體外抑菌活性的初步研究，其抑菌結(jié)果見表1。結(jié)果表明：苦參栓抑菌作用很強，顯著抑制金黃色葡萄球菌、耐藥表皮葡萄球菌、非耐藥金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單孢桿菌、白色念珠菌的生長繁殖，形成抑菌圈直徑范圍為10～24cm；兩種濃度無顯著差異。比較藥品對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的作用活性，已無顯著差異，苦參栓僅對綠膿桿菌作用較弱。治糜栓能夠抑制試驗菌得生長繁殖活性，但作用相對較弱，形成抑菌圈直徑范圍為8～18cm。對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌已沒有顯著差異，兩種濃度下，抑菌活性差異較大，濃度越大，抑菌圈直徑越大，其抑菌活性和濃度呈正相關(guān)。紅核婦潔洗液在原液濃度下抑菌作用較強，抑菌圈直徑為18cm左右，尤其對白色念珠菌作用強大，抑制圈達28cm，而10倍稀釋后，沒出現(xiàn)抑制圈。復方黃松洗液在原液和10倍稀釋濃度下均有抑制圈，形成抑菌圈直徑范圍為12～18cm，同樣對對白色念珠菌作用強大，抑制圈達29cm。兩種洗液對于革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌已沒有顯著差異。

陽性對照：左氧氟沙星濃度為0.04mg/ml，氟康唑濃度為0.2mg/ml，陰性對照分別為DMSO，及無菌水。

3.2 供試藥物最小抑菌濃度(MIC)結(jié)果

采用微量稀釋法測定不同供試藥物的最小抑菌濃度，結(jié)果如表2所示：苦參霉菌栓、治糜靈栓、紅核婦潔洗液和復方黃松洗液其MIC范圍分別為：0.049-50mg/ml，25-50mg/ml，0.195%-5%，0.012%-0.39%。此結(jié)果與抑菌圈測定結(jié)果一致。苦參霉菌栓MIC值很小，其抑菌活性很強。復方黃松洗液比紅核婦潔洗液的MIC值低，其抑菌活性強于紅核婦潔洗液。4種供試藥物對銅綠假單孢桿菌作用較弱。

4 討論

實驗結(jié)果：表明供試藥物對革蘭氏陽性菌如：金黃色葡萄球菌、耐藥表皮葡萄球菌、非耐藥表皮葡萄球菌、枯草桿菌、臘狀芽孢桿菌、以及糞腸球菌。革蘭氏陰性菌如：銅綠假擔胞桿菌、大腸桿菌都的抑制作用。可見婦科常用栓劑和洗劑抗菌作用廣譜，對各種易引起婦科感染的致病菌均有一定的抑制作用。

結(jié)果顯示：在相同的實驗條件下，供試藥物對標準菌株和臨床分離菌株的抑菌作用都有差異，對所有菌株的抑菌作用強弱為：苦參霉菌栓＞治糜栓， 復方黃松洗液＞紅核婦潔洗液(除大腸桿菌外)。苦參霉菌栓主要有苦參、黃柏、五倍子等藥材提純物組成，其抗菌作用強大，與提取物中活性成分密切相關(guān)。這也說明中藥復方制劑要發(fā)揮較強的藥理活性，不再是單純的粗提物，而應運用現(xiàn)代藥學理論，提高技術(shù)工藝，提取精制，提高其藥效。治糜靈栓由黃柏、苦參、兒茶、冰片、枯礬等藥物組成，其直接抑菌作用并不強，推測其發(fā)揮藥效作用也許是通過其他中醫(yī)理論作用，而不是直接抗菌。紅核婦潔洗液(山楂核蒸餾液)和黃松洗液(主要成分由地膚子、千里光、黃柏、崗松油、大葉桉油、滿山香油、蛇床子油組成)在原液濃度下均具有較強的抑菌作用，但在臨床使用濃度下，即10倍稀釋，山楂洗液沒有顯示抑菌活性。黃松洗液稀釋液仍具有抑菌活性，其抑菌作用為各組成成分發(fā)揮作用[4]。因為洗液是外用沖劑，應用原液刺激性大，不適合于臨床，但稀釋后抑菌活性降低，因此，尋找既能降低刺激性又能保持作用較強的婦科外用洗劑，也是產(chǎn)品研發(fā)中需注意的問題和克服的難題。

兩種栓劑雖然均由黃柏、苦參為主要成分，黃柏、苦參的抑菌作用已被報道和證實[5-6]，苦參霉菌栓為提純物，治糜栓為粗提物， 結(jié)果顯示二者差異很大，外用洗液結(jié)果表明中藥復方制劑的作用大于單味組成制劑，其機理因為各組成成分具有協(xié)同作用。

供試藥物具有抗菌譜廣，尤其對白色念珠菌抑制效果很強，臨床感染中，白色念珠菌為婦科感染的嚴重病原菌，80%的霉菌性陰道炎致病菌為白色念珠菌。近幾年來，由于抗生素和免疫抑制劑在臨床上的廣泛應用，白念珠菌感染呈上升趨勢，并以躍居深部真菌感染的第一位。本次實驗顯示苦參栓對白色念珠球有顯著的抑制作用作用，最小抑菌濃度達0.049mg/ml，從對臨床分離淋的白色念珠球菌抑制作用可見，該制劑對因白色念珠球菌引起的疾病有顯著療效。兩種洗液亦具有較強的抑制白色念珠球菌的作用。而且苦參栓對耐藥表皮葡萄球菌的最小抑菌濃度(MIC)達到0.049mg/ml，這為解決長期以來困擾人類的細菌耐藥性問題提供了初步的研究基礎(chǔ)，為這種藥在臨床上的長期使用提供了依據(jù)。因此我們的實驗結(jié)果為臨床治療婦科感染提供了依據(jù)。我們的結(jié)果表明苦參霉菌栓和復方黃松洗液為良好的婦科臨床用藥。

[1]聞玉梅.現(xiàn)代醫(yī)學微生物.上海.上海醫(yī)科大學出版社,2001：677.

[2]Karaman, S., Digrak, M., Ravid, U., et al., Antibacterial and antifungal activity of the essential oils of Thymus revolutus celak from Turkey. Journal of Ethnopharmacology 2001,.76：183：186.

[3]Yu,J.Q.,Lei,J.H., Yu, H.D.,Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of Scutellaria barbata.Phytochemistry,65,881-884.2004.

[4]吳斌,林文輝,高慧媛.麻葉千里光抗菌化學成分的研究(Ⅱ).《中草藥》,2005,36：10.

[5]劉文雅,劉漢清.苦參堿的藥理研究進展.《中華實用中西醫(yī)雜志》,2006,19：4.

[6]陳蕾,邸大琳.黃柏體外抑菌作用研究.《時珍國醫(yī)國藥》,2006,17：5.