血腫消合劑對腦出血大鼠模型腦組織SOD、MDA的影響*

王愛鳳，張社峰

(1.河南省人民醫院藥學部，河南鄭州450003;2.河南省中醫藥研究院，河南 鄭州450004)

高血壓性腦出血是最常見的非外傷性腦出血，占所有腦出血的60%［1］，是高血壓病在腦部的嚴重并發癥。該病發病急，致死率40% ～70%，即使患者得以生存，大多數也遺留嚴重的神經功能障礙。目前，無論是常規的內科治療，還是外科血腫清除手術治療，均不是十分有效的治療方法［2］。有學者［3］運用活血化瘀法、通腑泄熱法治療高血壓腦出血，取得滿意效果。血腫消合劑是河南省中醫院王松齡主任醫師經驗方，臨床研究［4］顯示，其治療高血壓腦出血效果較好。本研究通過觀察血腫消合劑對腦出血大鼠模型腦組織SOD、MDA的影響，探討其治療高血壓腦出血的可能機制。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

SD大鼠216只，雄性，體質量250～300 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，動物許可證號:SCXK(京)2002－0003。將大鼠分為假手術對照組(30只)，模型對照組(42只)，血腫消合劑大(36只)、中(36只)、小劑量組(36只)和腦血康對照組(36只)。動物進入實驗室后，按每籠放養5只標準放置大鼠，飼養3 d后啟用。動物室光照充足，通風和空調設備良好，實驗室按常規定期消毒。

1.2 藥品、試劑與儀器

血腫消合劑處方組成:三七180 g，大黃100 g，莪術 200 g，川芎 200 g，生蒲黃 100 g， 黃芩120 g，茯苓300 g。由河南省中醫院制劑室提供，批準文號為鄭衛(2001)Вw－10398，每瓶25 mL，含生藥25 g。腦血康口服液，10 mL/支，河南省宛西制藥股份有限公司產品，批號060201。注射用生理鹽水，北京雙鶴藥業有限公司產品;膠原酶Ⅶ型，購自美國Sigma公司;超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供，批號分別為20020905，20020828;水合氯醛等均為國產分析純。SN－2型調整腦立體定位儀，產地日本。

1.3 腦出血大鼠模型的建立

用100 g/L水合氯醛按3.0μL/g體質量的劑量腹腔注射麻醉大鼠;將麻醉后的大鼠俯臥位固定于腦立體定位儀上，剃毛，常規消毒;頭皮下正中切口約0.8 cm，暴露顱骨;以前囟為零點，向右旁開4 mm，向后1 mm，在顱骨表面用牙鉆鉆孔。將固定在立體定向儀上的微量注射器(針頭直徑約0.7 mm)垂直插入腦組織，深度為5 mm(此處為尾狀核部位)，用自動推進器向右側尾狀核推入含0.5 u/μL 膠原酶Ⅶ(生理鹽水配制成 1 u/μL);退針后縫合頭皮。通過破壞尾狀核內的血管基底膜，造成腦實質出血。假手術組采用同樣手術方法，但注入等體積生理鹽水。

1.4 給藥方法

大鼠造模前稱量體質量、編號。給藥劑量按大鼠與人體表面積等效劑量折算，動物造模麻醉清醒后即刻給藥。假手術對照組和模型對照組以生理鹽水4μL/g體質量灌胃，血腫消合劑大、中、小劑量組依次給予血腫消合劑 9，4.5，2.25 μL/g體質量灌胃，腦血康對照組給腦血康口服液2.7 mL/g體質量灌胃，均1 d 2次。連續給藥3 d。

1.5 檢測指標

1.5.1 大鼠死亡數量、死亡率

觀察各組大鼠的死亡數量，計算死亡率。

1.5.2 神經功能缺失評分

于造模24 h，72 h按Longa等的5級評分標準進行評分。0分:無功能障礙。1分:不能伸展右側前肢。2分:向右側旋轉。3分:向右側傾倒。4分:無自主活動伴意識喪失。

1.5.3 腦組織MDA含量、SOD活性

在最后一次神經功能缺失評分后，處死大鼠;取腦組織塊約0.3 g(電子天平稱量)，用冰生理鹽水沖洗，除去血液，濾紙拭干;稱量質量放入勻漿器中，以0.1 g∶0.9 mL比例加入預冷的生理鹽水，制備腦組織勻漿;用低溫低速離心機將勻漿以3 000～4 000 r/min離心15 min;取上清液，即為100 g/L組織勻漿;分裝，放－86℃冰箱保存備用。采用722分光光度計以硫代巴比妥酸法檢測MDA、黃嘌呤氧化酶法檢測SOD活性，并按Folin－酚試劑法標定蛋白含量，所有操作均嚴格按說明書進行。

1.6 統計學方法

采用SPSS10.0統計分析軟件處理。計量資料數據以均數()±標準差(s)表示，組間比較采用t檢驗;計數資料采用χ2檢驗。以P＜0.05為差別有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠死亡數量、死亡率對比

見表1。

2.2 神經功能缺失評分

假手術組大鼠未出現神經功能障礙。造模各組大鼠出現明顯的神經功能障礙。給藥后各藥物組較模型對照組癥狀均有不同程度恢復;除血腫消合劑小劑量組外，其余各組24，72 h神經功能缺失評分均較同時間點模型對照組下降，差別有統計學意義(P ＜0.05或 P ＜0.01)。見表2。

表2 各組大鼠的神經功能缺失評分對比

2.3 各組大鼠腦勻漿MDA含量、SOD活性對比

造模72 h，與模型對照組對比，各藥物組MDA含量下降，但只有血腫消合劑中劑量組較之差別有統計學意義(P＜0.05);各藥物組SOD活性均增高，差別有統計學意義(P＜0.01)。見表3。

3 討論

高血壓性腦出血屬于中醫學“中風”范疇。瘀血、濁邪、熱毒是本病的主要病機。高血壓腦出血的病理檢查可見病變側腦組織腫脹、充血，切面顯示病損區有多發性瘀點、片狀出血或血腫，可見瘀血是高血壓腦出血病理變化的結果。高血壓腦出血后腦水腫、缺血性損害、腦局部血流量下降亦符合血瘀病機。腦局部血流量下降是神經功能惡化的直接因素，提高病灶區腦局部血流量、減少病理產物蓄積、減輕毒性腦損害是治療腦出血的關鍵。血腫消合劑具有破血化瘀、泄濁解毒開竅作用。方中田三七、大黃具有出血者止血、瘀血者活血的雙向調節作用，可有效預防再次出血和出血后的瘀血，活血而不加重腦水腫。大黃通腑瀉熱解毒。茯苓健脾滲濕，瀉濁強腦，有利于顱內壓下降、昏迷病人清醒。莪術、川芎、生蒲黃活血化瘀，莪術偏于破血，但蒲黃又能止血，故三七、莪術、川芎、生蒲黃合用具有化瘀通脈、凝血止血的雙重作用。黃芩清熱解毒。諸藥合用，共奏破血逐瘀、泄濁解毒、醒神通脈之效。現代醫學認為:出血后腦損傷是一個惡性級聯過程，自由基反應和氧化應激效應參與了腦出血損傷機制，其中MDA毒性作用最大。SOD是自由基清除劑，增加SOD可起到神經保護作用［5］。MDA、SOD水平與血腫體積、發病時間、神經功能損傷程度具有密切關系，可作為判定病情和評估預后的參考指標。本研究結果顯示:血腫消合劑大、中、小劑量能顯著提高腦組織中SOD活性(P＜0.05或P＜0.01);血腫消合劑中劑量能明顯降低MDA含量(P＜0.01)，提示血腫消合劑能減輕腦組織的脂質過氧化損傷。

［1］David O Wiebers，Valery L Feigin，Robert D Brown Jr.腦卒中手冊［M］.北京:人民衛生出版社，2008:205.

［2］Naval NS，Nyquist P，Carhuapoma JR.ICH aspiration and thrombolysis［J］.J Neurol Sci，2007，261(1/2):80 －83.

［3］馬云枝，莊志江，張麗紅.活血化瘀法治療急性高血壓性腦出血64例［J］.陜西中醫，2006，27(2):163 －165.

［4］趙彥青，王偉民.血腫消合劑干預高血壓性腦出血后毒性腦損傷的研究［J］.上海中醫藥雜志，2007，41(6):32－33.

［5］程澤沛，蔡志友，劉薇，等.急性自發性腦出血血清SOD、MDA和反應性高血糖的臨床研究［J］.重慶醫學，2008，37(13):1450－1452.