HPLC法測(cè)定糠酸莫米松乳膏含量

李 蔚，馬 嘉，吳 靜，阮菁菁

(中國(guó)人民解放軍第105醫(yī)院，安徽合肥 230031)

糠酸莫米松(Mometasone Furoate)是人工合成的糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥，具有療效強(qiáng)、腎上腺皮質(zhì)功能抑制低等特點(diǎn)［1］。其外用制劑常用于對(duì)糖皮質(zhì)激素有效的皮膚病，對(duì)皮炎(接觸性皮炎、脂溢性皮炎、異位性皮炎、神經(jīng)性皮炎)，急性、亞急性、慢性濕疹及皮膚瘙癢癥有顯著療效。本品臨床用于濕疹、神經(jīng)性皮炎、異位性皮炎及皮膚瘙癢癥。外用制劑臨床使用方便、安全，較口服藥起效迅速。此外，乳膏劑為水包油型基質(zhì)，與皮膚親和力強(qiáng)，透皮速度快，性質(zhì)溫和，且易于洗滌。臨床用藥順應(yīng)性良好［2］。本文采用高效液相色譜法測(cè)定糠酸莫米松乳膏有關(guān)物質(zhì)及含量［3－4］，可有效控制該制劑產(chǎn)品質(zhì)量，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(島津LC-10Avp，蘇州島津公司)，C8(5 μm，150 mm × 4.6 mm;Amethyst)，離心機(jī)(江蘇金壇市環(huán)宇科學(xué)儀器廠)，水浴鍋(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)，抽濾裝置，AB135-S電子天平，超聲儀，試管、量瓶等玻璃儀器。

甲醇，乙腈，純化水，糠酸莫米松乳膏(上海仙靈保雅制藥有限公司，批號(hào):121103)，糠酸莫米松乳膏工作對(duì)照品(批號(hào):120305供含量測(cè)定用以99.5%計(jì)算)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Amethyst C8(5 μm，150 mm ×4.6 mm)，流動(dòng)相:甲醇 － 水(72∶28)，定量環(huán):10 μL，運(yùn)行時(shí)間:16 min，UV 檢測(cè)器(檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm);流速:1.0 mL·min－1;積分參數(shù):滿(mǎn)量程設(shè)置為對(duì)照溶液色譜峰高的4～5倍。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取丙酸倍氯米松適量，加乙腈溶解并稀釋制成1 mL中約含0.5 mg的溶液，搖勻，即得。

2.3 對(duì)照品溶液制備 取糠酸莫米松對(duì)照品14 mg，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。搖勻，精密量取15 mL，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液15 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 供試品溶液制備 取本品適量(約相當(dāng)于糠酸莫米松2 mg)，精密稱(chēng)定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液與乙腈各15 mL，置80℃水浴加熱使融化，強(qiáng)力振搖2 min，置冰浴中冷卻10 min，離心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

計(jì)算:含量(%)=供試品溶液主峰面積÷供試品溶液內(nèi)標(biāo)峰面積×對(duì)照品溶液內(nèi)標(biāo)峰面積÷對(duì)照品溶液主峰面積×對(duì)照稱(chēng)重(mg)×對(duì)照純度÷取樣量(g)×15。

2.5 陰性干擾性試驗(yàn) 取糠酸莫米松工作對(duì)照品2 mg、糠酸莫米松乳膏適量(約相當(dāng)于糠酸莫米松2 mg)、處方比例的陰性樣品2 g，照含量測(cè)定方法測(cè)定。結(jié)果表明:在此色譜系統(tǒng)下，處方比例的陰性樣品在糠酸莫米松主峰位置上無(wú)任何色譜峰，糠酸莫米松原料和糠酸莫米松乳膏在糠酸莫米松主峰位置上一致，表明本法檢測(cè)本處方樣品陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 糠酸莫米松乳膏含量方法學(xué)驗(yàn)證——陰性樣品(含內(nèi)標(biāo))

2.6 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別精密稱(chēng)取本品2 g，置具塞試管中，照有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)中的破壞條件進(jìn)行破壞試驗(yàn)后，分別轉(zhuǎn)移至50 mL具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液與乙腈各15 mL，置80℃水浴中加熱使融化，強(qiáng)力振搖2 min，置冰浴中冷卻10 min，離心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取糠酸莫米松對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加乙腈溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.14 mg的溶液，精密量取15 mL，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液15 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，同法測(cè)定。結(jié)果顯示:各降解產(chǎn)物峰與主峰的分離度均符合規(guī)定，表明專(zhuān)屬性良好，見(jiàn)圖2、3。

圖2 糠酸莫米松乳膏含量方法學(xué)驗(yàn)證——未破壞樣品

圖3 糠酸莫米松乳膏含量方法學(xué)驗(yàn)證——強(qiáng)酸破壞樣品

2.7 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)照品取樣量為約相當(dāng)于糠酸莫米松14 mg(定容至100 mL)，因此三個(gè)濃度的稱(chēng)量為 11.2、14、16.8 mg。取糠酸莫米松工作對(duì)照品(純度 99.5%)11.2、14、16.8 mg，各 3份，分別置100 mL量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。精密量取15 mL，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液15 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明系統(tǒng)適用性良好。

2.8 線性及范圍考察 精密稱(chēng)取糠酸莫米松工作對(duì)照品28.52 mg(純度99.5%)，置100 mL 量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度。分別精密量取2、3、4、5、6、7、8 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。精密量取5 mL，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5 mL，搖勻，精密量取5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為各對(duì)照品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下色譜條件與方法注樣，各濃度注樣2針，取校正因子F平均值。以校正因子為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為F=17.603×C－0.002 6(R=0.999 98，n=7)。結(jié)果表明:糠酸莫米松在0.014 2 ～0.056 8 g·L－1的濃度范圍內(nèi)，線性良好，縱截距與標(biāo)示濃度的校正因子的百分比為－0.42%，小于2%，說(shuō)明曲線通過(guò)原點(diǎn)，可采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算。

2.9 回收率試驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)中供試品取樣量為約相當(dāng)于糠酸莫米松2 mg，因此回收率加入量為1.6、2、2.4 mg。取糠酸莫米松工作對(duì)照品(純度99.5%)1.6、2、2.4 mg，各 3 份，分別置 50 mL 具塞錐形瓶中，再分別加入2 g的糠酸莫米松陰性樣品，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液與乙腈各15 mL，置80℃水浴中加熱使融化，強(qiáng)力振搖2 min，置冰浴中冷卻10 min，離心，精密量取上清液5 mL，置10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。照含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。按測(cè)得量與加入量的比值計(jì)算回收率，得平均回收率為100.7%，RSD 為1.26%(n=9)。

2.10 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批均質(zhì)樣品連續(xù)取樣6份，分別照上述含量測(cè)定方法測(cè)定每份樣品含量，計(jì)算RSD為0.24%(n=6)，重復(fù)性良好。結(jié)果表明:本法測(cè)定糠酸莫米松乳膏含量重復(fù)性良好。

2.11 精密度試驗(yàn) 取重復(fù)性項(xiàng)的均質(zhì)樣品，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行測(cè)定。RSD為0.47%(n=6)，兩組測(cè)定結(jié)果含量差異無(wú)顯著性，表明儀器精密度良好。

2.12 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液與對(duì)照品溶液，分別于 0、1、2、4、8、24 h 注樣分析，測(cè)定峰面積，RSD為0.12%(n=6)，表明穩(wěn)定性良好。

2.13 樣品含量測(cè)定 精密量取2.2.2項(xiàng)的樣品溶液和2.2.3項(xiàng)的對(duì)照品溶液各注入液相色譜儀，按上述選定的色譜條件測(cè)定，記錄主峰面積，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算峰面積，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證——含量

由表1可知，糠酸莫米松注射液的含量在98%～102%之間，符合規(guī)定。

3 討論

在糠酸莫米松乳膏含量方法學(xué)驗(yàn)證中，糠酸莫米松乳膏含量專(zhuān)屬性試驗(yàn)是基于強(qiáng)制降解試驗(yàn)結(jié)果所得圖譜進(jìn)行判斷的。含量條件使主成分含量加有關(guān)物質(zhì)總雜質(zhì)達(dá)到90%～110%。實(shí)驗(yàn)可以通過(guò)調(diào)整強(qiáng)制降解試驗(yàn)的破壞條件使有關(guān)物質(zhì)總雜質(zhì)達(dá)到規(guī)定要求。雜質(zhì)峰與主峰間的分離度應(yīng)符合要求。若主成分含量加有關(guān)物質(zhì)總雜質(zhì)達(dá)不到90%～110%，可能是由于實(shí)驗(yàn)的色譜條件不符合要求，可以通過(guò)PAD掃描，重新確定糠酸莫米松的最大吸收波長(zhǎng)。

在糠酸莫米松乳膏含量方法學(xué)驗(yàn)證中，由結(jié)果可知本法的專(zhuān)屬性良好，各降解產(chǎn)物峰與主峰的分離度均符合規(guī)定，表明在含量測(cè)定中，本法的專(zhuān)屬性良好。由糠酸莫米松線性關(guān)系考察可知本法測(cè)定糠酸莫米松含量在 0.014 2 ～0.056 8 g·L－1的濃度范圍內(nèi)，本法的線性良好，回歸方程為F=17.603 ×C －0.002 6(R=0.999 98，n=7)。縱截距與標(biāo)示濃度響應(yīng)值比值(B/Y)為 －0.42%小于2%，可采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行計(jì)算。由糠酸莫米松乳膏6份樣品含量測(cè)定的RSD=0.24%小于1%可知本法的重復(fù)性良好。由測(cè)得量與加入量的比值計(jì)算本法的回收率，RSD=1.26%小于2%表明本法測(cè)定糠酸莫米松乳膏含量方法的回收率良好，方法準(zhǔn)確度高。由中間精密度試驗(yàn)中兩組數(shù)據(jù)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.32%，本法中間精密度良好。由糠酸莫米松峰面積與內(nèi)標(biāo)溶液主峰面積在24 h內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1.0%，其比值小于1.0%以及三柱耐用性結(jié)果可知本色譜系統(tǒng)穩(wěn)定，且供試品溶液與對(duì)照品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。因而本色譜條件可用于糠酸莫米松乳膏含量的測(cè)定。

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