Twist-2在宮頸癌中的表達及意義

魏 巖，吳 強

(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院婦瘤外科，江蘇南京 210000;2.安徽省馬鞍山市婦幼保健醫(yī)院婦科，安徽馬鞍山 243011)

宮頸癌是臨床上最常見的婦性惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高居女性惡性腫瘤第二位，次于乳腺癌。我國每年宮頸癌的發(fā)病人數(shù)約占世界總發(fā)病人數(shù)的1/5，尤為高發(fā)。子宮頸癌的主要病因與高危型人乳頭瘤病毒(HPV)的存在癌基因表達有密切關(guān)系［1］。據(jù)報道，早期宮頸癌行手術(shù)治療患者的5年生存率可高達90%，而中晚期患者的生存預(yù)后均不理想。隨著診療手段的不斷發(fā)展，新柏氏液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)的廣泛運用為宮頸癌的早期診斷提供了有力支持，但中晚期患者腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)目前還沒有有效治療手段。最新研究證實，上皮細(xì)胞間質(zhì)化(EMT)與腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)密切相關(guān)，其中Twist-2作為EMT的主要轉(zhuǎn)錄因子均被證實與很多惡性腫瘤密切相關(guān)［2－4］，但在宮頸癌領(lǐng)域的研究國內(nèi)報道尚不多見。本次試驗旨在研究Twist-2在宮頸癌中的表達情況，并為評估宮頸癌患者的生存預(yù)后提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機選取馬鞍山市婦幼保健院及馬鞍山市中心醫(yī)院2006年1月—2008年5月的60例宮頸癌手術(shù)患者，平均年齡(50.7±4.6)歲，基本資料完整，術(shù)前均未行化療治療。同期選取45例CIN病變行宮頸錐切術(shù)或子宮全切術(shù)患者以及20例因子宮肌瘤行全切術(shù)患者作為對照組。

1.2 方法 應(yīng)用石蠟處理標(biāo)本后切成厚約為3～4 μm，60℃溫箱烤片2 h作為備用。主要試劑:Twist-2抗體為上海群已生物公司的兔抗人單克隆抗體，二抗為美國Epitomics公司的濃縮羊抗兔IgG多克隆抗體，SP免疫組織化學(xué)試劑盒來自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組化染色所有操作步驟均按試劑盒說明書，抗原修復(fù)方式為熱修復(fù)。PBS代替一抗為陰性對照。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) 兩位病理醫(yī)師獨立看片，根據(jù)片中陽性細(xì)胞染色占所觀察細(xì)胞數(shù)總數(shù)的百分比及陽性細(xì)胞或胞漿的染色強度對切片進行評分。染色強度:無色計為0分，淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計為1分、2分、3分。陽性細(xì)胞所占百分比:小于5%計為0分;5% ～10%計為1分;11%～50%計2分;51% ～75%計3分;大于75%計4分。根據(jù)兩項指標(biāo)乘積分成4級:1～3分示陰性(－);4～5分示弱陽性(﹢)，6～7分示中陽性(﹢﹢)，8分及以上示強陽性(﹢﹢﹢)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進行檢驗，計數(shù)數(shù)據(jù)采用卡方檢驗，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Twist-2在不同宮頸組織中的表達 按照免疫組化SP法對組織進行染色，Twist-2主要定位于細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中，陽性成淡黃色或深褐色表達。20例正常宮頸組織中僅有1例的Twist-2呈弱陽性表達(1/20)，同期45例CIN組織中Twist-2也類似于正常宮頸組織(7/45)，而60例宮頸癌組織中Twist-2表達明顯強于以上兩種組織(46/60)，差異有高度統(tǒng)計學(xué)差異(P ＜0.001，圖1、表1)。

2.2 Twist-2表達與臨床資料的關(guān)系 表2可得出Twist-2的表達與患者的年齡和淋巴轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，而與患者的臨床分期、分化程度及5年生存存在相關(guān)性(P ＜0.05)。

圖1 Twist-2在不同類型宮頸組織的表達

表1 Twist-2在不同類型宮頸組織的表達

3 討論

宮頸癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一，其中鱗癌占到整個宮頸癌發(fā)病的80%。以往的研究表明，HPV病毒的感染是宮頸癌發(fā)病的最主要因素，尤其以HPV16、HPV18兩種亞型為著［5］。隨著現(xiàn)代TCT技術(shù)的不斷普及，使得宮頸癌的發(fā)病率得到了有效控制，早期診斷早期治療的宮頸癌患者5年生存率明顯上升，宮頸癌患者主要死于腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)，而浸潤及轉(zhuǎn)移也是所有腫瘤細(xì)胞共同的生物學(xué)特性。因此尋找出一種可能在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起決定行作用的因子對宮頸癌患者的診斷及治療都將起著決定性作用。

表2 Twist-2的表達與宮頸癌患者臨床資料的關(guān)系

上皮細(xì)胞間質(zhì)化(EMT)是指上皮細(xì)胞在特定生理病理情況下向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過程［6］。最新研究進展表面，發(fā)生EMT的上皮細(xì)胞經(jīng)過結(jié)構(gòu)性的改變，極性喪失，細(xì)胞遷移能力和運動能力加強，同時細(xì)胞表型由上皮表型發(fā)展呈間質(zhì)表型，因此EMT是惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的最重要因素［7］。EMT的致癌信號通路可以促進上皮性腫瘤細(xì)胞的侵襲能力，并增強惡性腫瘤原先生物學(xué)特性如抗凋亡，逃避免疫監(jiān)視，化療耐藥等［8－10］。EMT的過程主要由轉(zhuǎn)錄因子Twist家族(Twist-1、Twist-2)、snail家族(ANAL1/snail、ANAL2/snail)以及 ZEB 家族(ZEB1、ZEB2)所控制調(diào)控［11－12］。隨著人們對EMT分子機制的了解深入，發(fā)現(xiàn)EMT過程在很多實體惡性腫瘤中都存在惡性表達，如乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、腺樣囊性癌，舌鱗癌等［2－4、13－14］。相關(guān)研究表明，作為 Twist家族的重要成員，Twist-2可誘導(dǎo)EMT過程的發(fā)生。但目前對于Twist-2的研究還處于初步階段，國內(nèi)外關(guān)于該因子在宮頸癌細(xì)胞中表達的報道也很少見［15］。本組試驗中我們以Twist-2為研究對象，測定其在宮頸癌組織中高表達(76.6%)，明顯高于宮頸CIN組織(15.6%)及正常宮頸組織(10%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。Twist-2的表達與宮頸癌患者的年齡和淋巴轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P＞0.05)，而與患者的臨床分期、分化程度及5年生存存在相關(guān)性(P ＜0.05)。

腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)是臨床上治療的難點，也是導(dǎo)致患者死亡的最重要原因。本次研究我們發(fā)現(xiàn)Twist-2在宮頸癌細(xì)胞中存在高表達情況，并與患者的臨床分期、腫瘤的分化程度及5年生存直接相關(guān)。Twist-2作為EMT的關(guān)鍵因子在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程中均起到的重要作用，為評估宮頸癌患者的生存預(yù)后提供理論依據(jù)。

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