乳腺癌血流動力學(xué)的超聲表現(xiàn)與微血管密度及血管內(nèi)皮生長因子的研究

夏玉光，鄧 莉，張成雙，丁寶維

(中國人民解放軍第425醫(yī)院超聲科，海南三亞 572000)

乳腺癌是一種常見的惡性腫瘤，僅次于宮頸癌，隨著近幾年人們對生育觀念的改變及工作壓力的增大，乳腺癌有逐年升高的趨勢，嚴(yán)重威脅著婦女的生命健康。有研究報道［1－2］，2008年女性乳腺癌的發(fā)病率為 60/10 萬，病死率為70%～80%。眾所周知，彩色多普勒超聲主要檢測腫瘤內(nèi)血管生成、血流動力學(xué)特點及血管的形態(tài)［3］。微血管密度(Microvessel Density，MVD)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是采用免疫組化方法檢測微血管生成的定量指標(biāo)，主要是檢測新生血管的數(shù)量，是目前公認(rèn)的評價腫瘤生成的可靠指標(biāo)［4－5］。因此本研究應(yīng)用彩色多普勒超聲觀察乳腺癌患者的血流動力學(xué)特點、免疫組化方法檢測MVD及VEGF評價乳腺癌的血管生成情況，為臨床治療提供具有價值的決策，盡最大努力減少乳腺癌的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集本院普外科2011年至2013年10月術(shù)前經(jīng)彩色多普勒超聲診斷為乳腺腫塊，并在術(shù)后可由病理科獲得病理切片的56例患者，年齡在35～62歲，并經(jīng)病理證實為乳腺癌。

1.2 彩色多普勒超聲檢查 采用阿洛卡F75彩色超聲診斷儀，探頭頻率3～9 Hz。患者采取仰臥位，充分暴露乳房，對乳房腫塊的部位、形態(tài)、邊緣是否整齊、回聲是否均勻等情況進(jìn)行探查。并獲取穩(wěn)定的血流頻譜圖像，根據(jù)Adler的判斷標(biāo)準(zhǔn)將血流分級:0級:病灶內(nèi)無血流顯示;Ⅰ級:少量血流，1～2個點狀或細(xì)短棒狀血流信號;Ⅱ級:中量血流，3～4個點狀或1條主要的較長血流信號;Ⅲ級:豐富血流，5個以上的點狀或是2條較長的血流信號。

1.3 免疫組化方法測量 MVD及 VEGF 購買鼠抗人CD34單克隆抗體、鼠抗人VEGF單克隆抗體、S-P試劑盒和陽性切片。采用S-P法，步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.1 MVD計數(shù) 參照Weidner血管計數(shù)法，首先選擇在低倍鏡(100)，先選取染色最明顯且較清楚的區(qū)域，再高倍鏡下觀察被染成棕色的細(xì)胞及細(xì)胞叢(作為1個血管)。以5個高倍鏡的均數(shù)表示血管數(shù)。

1.3.2 VEGF染色結(jié)果 在癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)VEGF蛋白陽性呈棕色，根據(jù)染色情況將程度進(jìn)行分級:未被染色的腫瘤細(xì)胞為VEGF陰性;6%～10%的腫瘤細(xì)胞著色(+);11%～50%的腫瘤細(xì)胞著色(++);＞50%的腫瘤細(xì)胞著色(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計數(shù)據(jù)的處理，首先對研究對象的一般特征進(jìn)行統(tǒng)計描述，然后對乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織MVD和VEGF的關(guān)系，以及采用χ2檢驗進(jìn)行分析，最后分別計算三者及三者聯(lián)合的敏感性和特異性。所有檢驗均為雙側(cè)檢驗，P ＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌患者一般特征的描述 本研究共納入56例患者，其中術(shù)前經(jīng)超聲發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者24例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。腫瘤血流情況為:0級9個，Ⅰ級18個，Ⅱ級16個，Ⅲ級13個。術(shù)后病理發(fā)現(xiàn)浸潤性導(dǎo)管癌26例，浸潤性小葉癌14例，導(dǎo)管內(nèi)癌9例，黏液癌7例。年齡均在35～62歲，平均年齡為(44.32±2.85)歲。腫瘤位于左側(cè)30例，右側(cè)26例。根據(jù)免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MVD≤20的患者為22例，≥21的為34例;VEGF陽性患者44例，VEGF陰性患者12例，見表1。

表1 乳腺癌患者術(shù)前血流動力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織MVD的比較

2.2 乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織MVD的比較 乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動力學(xué)與術(shù)后組織MVD的比較發(fā)現(xiàn)，血流動力學(xué)與MVD之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.700，P=0.013)。血流動力學(xué)分級 0 級及Ⅰ級時，MVD≤20的患者顯著多于MVD≥21的患者;而血流動力學(xué)分級為Ⅱ級和Ⅲ級時，MVD≤20的患者顯著小于MVD≥21的患者。

2.3 乳腺癌患者術(shù)前血流動力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織VEGF的比較 乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動力學(xué)與術(shù)后組織VEGF的比較發(fā)現(xiàn)，血流動力學(xué)與VEGF之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.993，P=0.046)。血流動力學(xué)分級 0 級時，VEGF陽性的患者顯著多于VEGF陰性的患者;而血流動力學(xué)分級為Ⅰ級、Ⅱ級和Ⅲ級，VEGF陽性的患者也占較大的比例，見表2。

表2 乳腺癌患者術(shù)前血流動力學(xué)表現(xiàn)與術(shù)后組織VEGF的比較

2.4 三種指標(biāo)以及三者聯(lián)合診斷乳腺癌的比較 術(shù)前超聲表現(xiàn)、術(shù)后組織MVD及VEGF三者聯(lián)合診斷乳腺癌的敏感性比單一方法診斷顯著增高，但特異度低于單一指標(biāo)，其中超聲檢查的特異度最高。聯(lián)合診斷的準(zhǔn)確性(90.34%)也較高，見表3。

表3 三種診斷方法以及三者聯(lián)合診斷乳腺癌的比較(%)

3 討論

本研究資料表明，乳腺癌患者術(shù)前超聲血流動力學(xué)與術(shù)后組織MVD和VEGF之間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。血流動力學(xué)分級為Ⅱ級和Ⅲ級時，MVD≥21和VEGF陽性的患者均占較大的比例。這就說明血流動力學(xué)分級越大，MVD計數(shù)和VEGF陽性的患者就越多。

如其他實體腫瘤一樣，乳腺癌的生長也需要新生血管的生成，而血管生成是指在血管生成因子的刺激下，微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞增殖周期，通過芽生方式形成新生毛細(xì)血管的過程［6－7］，生成程度可由MVD計數(shù)來進(jìn)行評價。而VEGF是一種細(xì)胞因子，由腫瘤細(xì)胞分泌，并作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，以增加血管的通透性，使血管內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)外滲，進(jìn)一步促進(jìn)了腫瘤的生長［8－9］。本研究的結(jié)果就可以表明，VEGF誘發(fā)腫瘤新生血管生長，使腫瘤MVD個數(shù)增加，血流供應(yīng)豐富，血流速度增加。

彩色多普勒超聲是評價腫瘤患者血流動力學(xué)無創(chuàng)便捷的方法，而且也是診斷乳腺癌首選方法。而且隨著近幾年超聲技術(shù)的發(fā)展，可根據(jù)超聲探及多少不等的血流信號，而且敏感性較高。而病灶部位MVD密集且血流豐富的原因可能是［10－11］腫瘤血液循環(huán)的建立主要是在腫瘤細(xì)胞分泌的各種血管生成因子的誘導(dǎo)下，毛細(xì)血管開始朝向腫瘤部位發(fā)展，形成更多的新血管，但是腫瘤血管與正常結(jié)構(gòu)的血管并不一致，最主要的特點是分支較多，并且缺乏彈性，這樣就會使腫瘤出的血流量增大。

但本研究在術(shù)前行超聲發(fā)現(xiàn)有9例患者病灶處無血流信號，但是MVD計數(shù)≥21卻有3例，VEGF陽性者有4例，這就說明超聲檢查的靈敏性不如免疫組化方法，當(dāng)然也可能是由超聲儀器的靈敏度和操作者的熟練程度所致，或者是因為本研究納入的例數(shù)較少，而且進(jìn)行的回顧性研究，對結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)術(shù)前超聲特異度較高，是因為超聲對乳腺組織結(jié)構(gòu)顯示清晰，可以準(zhǔn)確測量腫塊內(nèi)部及周圍的血流信號［12］;三者聯(lián)合診斷乳腺癌的敏感性較高，原因是超聲可以在術(shù)前對腫瘤血管生成情況及血流狀態(tài)進(jìn)行診斷，MVD及VEGF也可以在術(shù)后通過切片可以發(fā)現(xiàn)病灶的血管生成情況，并且MVD密集程度和VEGF染色情況可以說明腫瘤血管生成的情況，這就表明聯(lián)合應(yīng)用這三項指標(biāo)可以為患者的診斷、治療及預(yù)后提供有效的臨床信息，更可以最大程度地降低復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。

綜上所述，超聲及免疫組化分析(MVD及VEGF)在乳腺癌診斷中具有重要價值，三者聯(lián)合應(yīng)用可進(jìn)一步提高診斷可靠性和準(zhǔn)確性，故值得推廣。

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