不同產地桔梗中桔梗皂苷D及總多糖的含量比較

金傳山，張 偉，桂雙英，彭代銀，吳德玲，黃 力，李保明

(1.安徽中醫藥大學藥學院，安徽省現代中藥重點實驗室，安徽合肥 230031;2.亳州職業技術學院藥學院，安徽亳州 236800;3.安徽協和成藥業飲片有限公司，安徽亳州 236800)

桔梗為桔?？浦参锝酃?Platycodon grandiflorum)的干燥根［1］，味苦、辛，性平，歸肺經，可宣肺利咽，祛痰排膿，臨床上主要用于治療咳嗽痰多，胸悶不暢，咽痛聲啞，肺癰吐膿。桔梗作為藥食兩用植物在全國各地廣泛分布，是部分省區的重要經濟植物，在內蒙赤峰，安徽太和、亳州，山東淄博等地廣泛栽培。桔梗的化學成分研究始于20世紀初，主要包括五環三萜類的多糖苷［2］和菊糖型多聚糖類［3］等成分。目前，《中國藥典》2010版中僅以桔梗皂苷D含量高低作為判斷桔梗藥材質量的優劣標準，而中藥的療效是多種成分協同作用的結果，因此選擇一種活性成分進行含量分析不足以全面、客觀、真實地反映藥材質量。本研究參照2010年版《中國藥典》的標準，同時結合桔梗多糖的含量測定［4］，在進行桔梗主產區調查的基礎上，對目前不同主產區的桔梗質量進行分析。

1 儀器、試藥與實驗藥材

1.1 儀器 島津LC-15C型高效液相色譜(LC-15C泵、SPD-15C紫外檢測器、DT-230A型柱溫箱、LC Solution-15C色譜工作站)，WL-100型打粉機(威力制藥機械廠)，UV-757CRT紫外可見分光光度計(上海精科);CP225D型十萬分之一電子天平(德國Sartorius公司);HHS111-2型電熱恒溫水浴鍋(北京長安科學儀器廠);R-205旋轉蒸發器(上海申勝生物科技有限公司)等。

1.2 試藥 甲醇(色譜純，天津四友精細化學品有限公司)、乙腈(色譜純，Fisher公司);水為Milli-Q超純水;濃硫酸(上海蘇懿化學試劑有限公司);鹽酸，香草醛(北京化學試劑有限公司)、磷酸二氫鉀、磷酸(上海市試劑一廠綜合經營公司)等均為分析純。桔梗皂苷D(成都普思生物科技有限公司，批號:20080723)。

1.3 實驗藥材 藥材采集后清洗去除泥沙，用玻璃片刮去根皮后攤曬，晾曬至一定程度后切圓片，曬干，即得桔梗樣品，藥材經安徽中醫藥大學中藥資源與利用教研室劉守金教授鑒定為桔?？浦参锝酃latycodon grandiflorum。樣品信息見表1。

表1 桔梗樣品來源

2 方法與結果

2.1 桔梗皂苷D的含量測定［5］

2.1.1 色譜條件 采用 Alltima C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)色譜柱，流動相為乙腈—0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀緩沖溶液(用磷酸調 pH為3.0，30∶70)，流速 0.7 mL·min－1，檢測波長 210 nm，柱溫35℃，進樣量 20 μL 。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的桔梗皂苷 D對照品2.60 mg，置10 mL量瓶中，用不加緩沖鹽和磷酸的流動相溶解并定容至刻度，以0.22 μm微孔濾膜濾過即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取各桔梗樣品粉末(過80目篩)約0.5 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加入不含緩沖鹽和磷酸的流動相至近刻度，在功率500 W下超聲30 min，放冷，用流動相定容至刻度，搖勻，過微孔濾膜(0.22 μm)，取續濾液，即得。

2.1.4 線性關系考察 精密吸取上述桔梗皂苷D對照品溶液 4、8、12、16、20 μL，按上述色譜條件進樣，以進樣量(X)為橫坐標，峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為:Y=294 001X+160 319，r=0.999 6。結果表明桔梗中桔梗皂苷D在1.44 ～7.20 μg范圍內線性范圍良好。

2.1.5 樣品含量測定 取“2.1.3”項下方法制成的樣品溶液，分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液各20 μL，按上述色譜條件測定，外標一點法，以干燥品計算樣品中的桔梗皂苷 D含量，結果見表2，圖1。

2.2 桔梗多糖的含量測定［6］

2.2.1 對照品溶液的制備 精確稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標準品12.91 mg，置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖 0.129 1 g·L－1的標準溶液。

圖1 桔梗HPLC色譜圖

2.2.2 供試樣品的制備 稱取各樣品約0.5 g，精密稱定，放入置圓底燒瓶中，精密加蒸餾水50 mL，稱定重量，靜置30 min，沸水浴回流1 h，放冷稱定，用水補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液10 mL蒸干，加2 mL水分次溶解，加10 mL無水乙醇放置24 h，抽濾，沉淀用85%乙醇洗滌3次，沉淀用水溶解定容至50 mL量瓶，搖勻，即得各個不同產地的供試品溶液。

2.2.3 線性關系的考察 分別精確移取葡萄糖標準溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL 于具塞試管中，再分別依次加入 0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3 mL蒸餾水，每管加入5%苯酚溶液1 mL，迅速滴加濃硫酸5 mL，立即搖勻，放置5 min，置沸水浴中加熱10 min，迅速冷卻至室溫，同法以1 mL蒸餾水作空白對照，于486 nm處測吸光度。以吸光度(A)對葡萄糖質量濃度(C)作回歸處理，得回歸方程Y=0.079 1C －0.007 7，r=0.999 2。結果表明桔梗中桔梗多糖在0.025 82 ～0.090 37 μg 范圍內線性關系良好。

2.2.4 樣品含量測定 取2.2.2”項下方法法制成的樣品溶液，分別精密吸取樣品溶液和葡萄糖對照品液于10 mL具塞試管中，各補加蒸餾水至1 mL，加5%苯酚1 mL，濃硫酸5 mL，搖勻，放置5 min后水浴加熱10 min，放冷后測定吸光度，計算樣品多糖含量，結果見表2，圖2。

表2 不同產地桔梗桔梗皂苷D和桔梗多糖的含量測定結果

圖2 紫外掃描圖

3 討論與分析

各主產地桔梗藥材中桔梗皂苷D含量均符合藥典標準。山東產桔梗在總皂苷含量上高于內蒙和安徽產桔梗，而內蒙產桔梗在多糖含量上則在整體上優于安徽和山東產桔梗，不同產地桔梗中的分布趨勢顯示出桔梗皂苷D含量高，多糖含量低，而當總皂苷含量低時，多糖含量則升高。

現代藥理研究表明，桔梗皂苷D為桔梗中鎮咳活性成分之一［7］，桔梗多糖對特異性和非特異性免疫都具有一定的調節作用。桔梗中主要成分與其藥效相關性研究并不多，如何用成分來有效控制桔梗藥材及其加工品的質量仍是需待解決的問題，若采用單一指標進行藥材質量評價，則會產生偏頗，而通過多指標評價不同產地的桔梗藥材質量，可以為桔梗藥材的選用提供依據。

不同產區的桔梗外觀形狀差異明顯，在樣品處理過程中發現，內蒙產桔梗主根順直切片干燥后片型美觀，且碎屑較少，而產于安徽和山東的桔梗藥材由于主根分叉較多，切片后細小側根干燥形成大量碎屑，影響藥材品相，因此在商品規格上內蒙產桔梗優于其他產地。

致謝:本研究得到美國許氏基金會的支持。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典［S］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:259－260.

［2］ 李喜鳳，杜云鋒，謝新年，等.不同產地桔梗藥材HPLC指紋圖譜及桔梗皂苷D 含量測定研究［J］.中成藥，2010，32(4):529－532.

［3］ 賈 林，陸金健，盧德趙，等.桔梗多糖的分離純化與含量測定［J］.中國農學通報，2011，27(17):83 －86.

［4］ 金傳山，黃 力，李素亮.桔梗雙飛片產業化生產工藝研究［J］.中藥材，2011，34(6):968 －971.

［5］ 黃 力，金傳山，吳德玲.不同干燥方法對桔梗中桔梗皂苷 D含量的影響［J］.安徽中醫學院學報，2010，29(3):69 －71.

［6］ 黃 力.桔梗雙飛片工藝及質量研究［D］.合肥:安徽中醫學院，2010:30－35.

［7］ 張艷艷，王舉濤，桂雙英.桔梗邊角料中桔?？傇碥仗崛」に囇芯浚跩］.安徽醫藥，2012，16(4):442 －443.