聯合檢測血清 GP73，AFP，AFP-L3及AFU在原發性肝癌診斷中的作用

徐瀚峰，王禮學，朱傳東，朱小方，丁 婕，俞 晨

(東南大學附屬第二醫院腫瘤科，江蘇南京 210003)

目前我國肝癌的發病率仍然較高，且呈不斷上升的趨勢。目前對于肝癌的診治方法較少，最重要的是早期發現，早期手術治療可以取得良好的療效，但是肝癌的早期診斷仍然困難，不少患者發現時已是晚期，目前反應原發性肝癌的早期診斷指標仍以AFP為主，但是有相當部分的患者肝癌早期AFP并不升高，且有30% ～40%的患者始終無AFP的明顯升高，且在多種原因引起的肝細胞損傷時也會出現AFP的升高，從而出現診斷偏差，因此我們需要發現更多的血清學標志物幫助肝癌的早期發現。高爾基體糖蛋白(Golgiprotein-73，GP73)是新近發現的一種肝癌相關蛋白，日益增多的研究表明，GP73在肝癌診斷中具有可能的應用價值，是一種潛在的血清腫瘤標志物［1－2］。AFP異質體(AFP-L3)也是新近發現的肝癌相關指標。本研究探討聯合檢測血清GP73，AFP，AFP-L3 以及 α-L-巖藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)在肝癌診斷中的意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2012年6月—2013年6月在我院住院的原發性肝癌患者81例，其中男性65例，女性16例，平均年齡(56.2±3.7)歲;肝硬化患者72例，男性57例，女性15例，平均年齡(53.8±4.2)歲;慢性乙型肝炎患者28例，男性20例，女性8例，平均年齡(42.1±2.8)歲，另選取我院門診健康體檢者27例做為健康對照組，其中男性19例，女性8例，平均年齡(43.8±1.8)歲。所有肝癌、肝硬化、慢性乙型肝炎患者的診斷均符合《原發性肝癌的臨床診斷與分期標準》及《慢性乙型肝炎防治指南》［3］。

1.2 方法 GP73測定采用德國EVOLIS酶聯免疫定量方法檢測，試劑盒由北京熱景生物技術有限公司提供，肝癌判定值為≥150 μg·L－1;試劑盒均在有效期內，嚴格按照使用說明書操作。血清AFP濃度測定采用化學發光法，使用AXSYM試劑盒(美國ABBOTT公司)，并在全自動生化儀上進行測定;AFP異質體測定經過離心柱兩步清洗去除不結合AFP，再經離心洗脫獲得AFP-L3，該離心柱由北京熱景生物技術有限公司提供，同樣在全自動生化儀上進行測定;AFU在全自動生化儀上進行測定。全自動生化儀為AEROSET(美國ABBOTT公司)產品。

1.3 標本采集 所有標本均在早晨收集空腹血，置于促凝管中3～4 mL，分離后獲得血清置于－20°冰箱中保存待檢。

1.4 統計方法 本數據采用Spss 19.0進行分析，由于高爾基體糖蛋白73、AFP-L3、AFP、AFU數據呈偏態分布，采用中位數(四分位數)表示，計數資料采用卡方檢驗，P＜0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 各組檢驗結果統計 GP73正常值范圍0～150 μg·L－1，AFP-L3正常值范圍0～10%，AFP 正常值范圍0 ～13.4 μg·L－1，AFU 正常值范圍 2～25 U·L－1。各組檢驗結果采用中位數及四分位數表示，統計結果見表1。

2.2 各項檢驗指標的靈敏度、特異度、準確度 從檢驗指標中我們可以發現，在肝癌診斷中，單項檢測中特異度最高的為AFP-L3達到了88.8%，靈敏度最高的為 AFP達到了60.5% ，準確度最高的為AFP達到73.2%，而聯合檢測組中，特異度、靈敏度、準確度分別為 89.2%、60.5% 及77.03%，高于各單項檢查組。見表2。

表1 各組檢驗結果統計

表2 各單項檢測指標及聯合檢測的靈敏度、特異度、準確度

2.3 ROC曲線 GP73、AFP異質體、AFP、AFU以及聯合檢測對肝癌鑒別診斷效果采用ROC曲線分析GP73、AFP-L3、AFP、AFU以及聯合檢測鑒別肝癌與非肝癌的效果，曲線下的面積分別為:0.704、0.704、0.701、0.559、0.765;各自的95%置信區間分別為:0.631 ～0.778、0.628 ～0.779、0.623～0.78、0.476 ～0.642、0.694 ～0.835(圖1)。通過 ROC 曲線分析將聯合檢測臨界值設定在:182.28(根據靈敏度+特異度最大原則)，此時的靈敏度為60.5%，特異度為89.2%。

圖1 ROC曲線圖

2.4 聯合檢測的卡方分析 對 GP73、AFP異質體、AFP及AFU檢測指標與聯合檢測指標進行卡方檢驗，其P值遠小于0.05，因此在a=0.05的檢驗水準下，可以認為聯合檢測與各單項檢測相比有統計學差異。聯合檢測的陽性檢出率更高。見表3。

表3 各單項檢測指標與聯合檢測指標陽性率卡方分析

3 討論

原發性肝癌發病率位居我國前列，病死率居我國第2位，且有不斷上升的趨勢。大部分肝癌患者確診時已至晚期，表明目前常用的血清肝癌診斷標志物不能滿足臨床需求。AFP是常用的肝癌診斷指標，但是其敏感度僅為40%～65%，30%左右的肝癌患者AFP為陰性［4］。因此，需要進一步尋找有效的血清標志物來提高肝癌的早期診斷率。

近幾年報道GP73可能成為一種肝癌診斷的新型血清標志物。高爾基體糖蛋白(GP73)是存在于高爾基體的跨膜蛋白，Kladney等［5］在2000年首次發現該蛋白，該蛋白在肝細胞中表達很少，主要由膽管上皮細胞表達。Hann等［6］發現GP73在肝癌中升高尤為明顯，提示其可能成為肝癌的一個新的血清標志物。

AFP是一種糖蛋白分子，其糖鏈的合成與降解過程是在細胞內進行的，經糖基轉移酶和水解酶協同完成。其糖鏈結構存在異質性。經小扁豆凝集素(LCA)親和電泳，AFP分成3個條帶，根據電泳遷移率大小依次為AFP-L1、AFP-L2和AFP-L3。肝癌發生時AFP糖鏈結構可產生異質性，與非惡性肝病產生的糖鏈結構存在顯著差異，具有特異性，因而可以把AFP異質體作為肝癌標記物，比AFP定量具有更高的特異性［7］。有研究表明，AFP-L3的測定不僅在良惡性肝病的鑒別診斷及原發性肝癌的早期診斷方面比AFP測定更有價值，而且可以作為肝癌的預后指標［8］。

α-L-巖藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)是一種溶酶體酸性水解酶，廣泛分布于人體內各種組織、細胞及體液中，在肝、肺、腦、腎、胰、白細胞以及血清、尿液等中均含此酶，主要作用是催化含巖藻糖基的低聚糖、糖蛋白及糖苷的水解代謝，在免疫反應、信號轉導等多種方面發揮重要作用，多種研究發現，AFU的測定在多種疾病的診斷及治療中都有積極的作用［9］。研究表明，AFU可作為結直腸癌、口腔癌、肝癌等腫瘤早期診斷標志物及抗腫瘤治療效果的指示因子，已引起廣泛的關注［10］。1980年首先發現原發性肝癌患者血清AFU升高，具有較高的特異性和靈敏性，在多項研究中發現AFU可作為原發性肝癌的腫瘤標志物［11－12］。

本研究分別檢測了肝癌、肝硬化、慢性肝炎患者及健康體檢者的GP73、AFP、AFP-L3及AFU，通過聯合各項指標來觀察對于肝癌的診斷。在研究中發現，聯合檢測組中，特異度、靈敏度、準確度分別為 89.2%、60.5% 及 77.03%，均高于各單項檢測組。對高爾基體糖蛋白、AFP異質體、AFP及AFU檢測指標與聯合檢測指標進行卡方檢驗，其P＜0.05，聯合檢驗與各單項檢驗相比有統計學差異。表明聯合檢驗的陽性檢出率更高。通過ROC曲線可以發現，聯合檢測組的線下面積最大為0.765，高于各單項組。因此可以發現聯合檢測有利于提高肝癌的早期檢出率，并有助于肝硬化、慢性肝炎相鑒別。

綜上所述，聯合檢測GP73、AFP-L3、AFP及AFU有利于臨床提高肝癌的診斷率，并有效的減少單項檢測的偏差，由于檢測技術的成熟及便利，值得在臨床工作中推廣。

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