復方花生肽口服液對化學性肝損傷的保護作用

成 靜，袁宏麗，莫朝暉，陳棟梁

(1.武漢天天好生物制品有限公司，湖北武漢430090;2.湖北省肽類物質工程技術研究中心，湖北武漢430090)

花生肽是花生蛋白經降解所得，具有良好的吸收性、溶解性、流動性以及低致敏性。近年來，大量國內外研究顯示花生肽具有抗氧化、抗菌、ACE抑制、抗疲勞等［1-5］生理功能。然而在護肝方面的活性報道較少，我國學者陳貴堂［6］以及彭維兵［7］等研究顯示花生肽對半乳糖以及CCl4所致急性肝損傷具有明顯的保護作用。

蒲公英是我國常見的野生蔬菜和中草藥，具有清熱解毒、消腫散結、利尿通淋的功能。國內外學者研究顯示蒲公英具有抗菌、抗胃損傷、保肝膽、抗腫瘤、抗氧化、降血糖、降血脂、增強機體免疫力等功能［8］。Domitrovi.R 等［9］對蒲公英研究顯示蒲公英根水提物可顯著減少四氫化碳肝纖維化，增強肝臟再生能力。任麗平［10］等研究顯示蒲公英能顯著降低乙醇引起急性肝損傷小鼠血清ALT和AST水平。

本文以花生肽和蒲公英提取物配制復方口服液并對其急性毒理及護肝功能進行研究，探索花生肽與蒲公英提取物復配口服液的安全性及護肝效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

復方花生肽口服液 武漢天天好生物制品有限公司提供，其主要原料為花生肽和蒲公英提取物。口服液蛋白質含量17.92%、多肽含量13.45%、類黃酮含量0.038%;ALT、AST、LDH、MDA、SOD、GSH-PX檢測試劑盒 南京建成生物工程研究所;實驗室常規試劑;CCl4分析純。

AR2140電子天平 奧豪斯公司;TGL-16G離心機 上海安亭科學儀器廠;FAITH-1000全自動生化分析儀 南京勞拉電子有限公司;手術器材。

華中科技大學同濟醫學院動物中心提供KM系小鼠(許可證號 SCXY2004-0007)，104只，雌雄各半，體重20±2g。

表1 小鼠體增重檢測結果(±s)Table 1 The results of weight gain of mice(±s)

表1 小鼠體增重檢測結果(±s)Table 1 The results of weight gain of mice(±s)

時間(d)正常對照組 模型組 低劑量組 中劑量組 高劑量組 蒲公英提取物組 花生肽組0 20.78±1.98 21.25±2.23 21.16±0.89 21±1.14 20.76±1.32 21.06±1.78 20.89±1.12 6 28.06±2.24 25.96±1.94 26.56±1.41 27.94±1.76 27.61±1.47 28.43±3.43 27.84±2.23 12 29.04±3.46 27.02±2.69 27.96±2.67 28.26±3.43 29.64±2.32 30.02±2.04 28.41±2.79 18 31.39±1.74 28.89±3.33 29.04±5.64 31.54±4.27 31.78±2.79 29.94±1.98 30.46±3.44 24 33.18±4.27 31.12±3.47 30.64±4.23 32.79±5.12 32.37±3.81 31.04±5.67 31.87±5.16 30 34.49±5.08 32.18±6.02 32.76±4.78 34.47±4.73 33.87±3.34 32.23±4.91 33.64±4.98

1.2 實驗方法

1.2.1 急性毒理實驗 按照《保健食品功能學評價程序與檢驗方法規范》，KM系小鼠20只，雌雄各半，實驗室室溫適應性喂養3d，采用最大劑量法進行實驗，劑量為35.8mL/kg bw(干物質劑量為10.0g/kg bw)，24h內灌胃3次，連續觀察14d。

1.2.2 護肝功能實驗 小鼠隨機分為7組，每組12只，雌雄各半。實驗室室溫適應性喂養3d，進入實驗期。空白對照組、模型組每天灌胃給予生理鹽水20mL/kg，低劑量組灌胃劑量為8.35mL/kg，中劑量組灌胃劑量為 16.7mL/kg，高劑量組灌胃劑量為50.1mL/kg，對照組以中劑量組灌胃計量為依據灌胃純花生肽或純蒲公英提取物，花生肽對照組灌胃計量為3.33g/kg，蒲公英提取物對照組灌胃計量為0.167g/kg;連續灌胃30d，于末次給藥禁食16h后模型組及各劑量組一次性灌胃給予1%CCl480mg/kg bw，空白對照組灌胃食用大豆油。

1.2.3 檢測方法

1.2.3.1 血清中ALT、AST、LDH活力檢測 禁食24h后，眼眶靜脈取血，3000r/min離心15min分離血清，24h內全自動生化分析儀檢測血清中ALT、AST、LDH活力。

1.2.3.2 肝臟組織中MDA、SOD及GSH-PX活力檢測 小鼠斷頸處死，取肝臟稱重，加入生理鹽水勻漿，離心取上清。MDA活力采用TBA法測定，按測定試劑盒操作規程進行。SOD活力采用比色法測定，按測定試劑盒操作規程進行。GSH-PX活力采用比色法測定，按測定試劑盒操作規程進行。

1.3 數據處理

2 結果與分析

2.1 急性毒理實驗

實驗期間，實驗動物未見明顯中毒癥狀和死亡，依據急性毒性分級評價標準規定，本復方花生肽口服液屬于實際無毒物質。

2.2 護肝功能實驗

實驗期間，空白對照組、對照組、模型組以及各劑量組體重增重基本相同，組間無顯著差異(p＞0.05)。模型組 ALT、AST、LDH、MDA 含量都明顯高于空白對照組，且差異呈現極顯著性(p＜0.01);SOD及GSH-PX活性明顯低于空白對照組，且差異呈現極顯著性(p＜0.01)。表明急性肝損傷模型造模成功。

低劑量組ALT、LDH、MDA含量顯著低于模型組(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);中劑量組ALT、AST、LDH顯著低于模型組(p＜0.05)，MDA含量極顯著低于模型組(p＜0.01)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);高劑量組 ALT、AST、LDH、MDA 含量極顯著低于模型組(p＜0.01)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);蒲公英提取物組各項指標與模型組比較無顯著性差異，與中劑量組比較顯示ALT、AST、LDH含量顯著高于中劑量組(p＜0.05)，MDA含量極顯著高于中劑量組(p＜0.01)，SOD及GSHPX活性顯著低于中劑量組(p＜0.05);花生肽組ALT、LDH、MDA含量顯著低于模型組(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性顯著高于模型組(p＜0.05);與中劑量組比較顯示ALT、AST、LDH、MDA含量均顯著高于中劑量組組(p＜0.05)，SOD及GSH-PX活性顯著低于中劑量組(p＜0.05)。

復方花生肽口服液中、高2個劑量組均能抑制CCl4致小鼠急性肝損傷血清中ALT、AST、LDH升高，降低肝臟中MDA含量，提高肝臟中SOD及GSH-PX活性，對CCl4所致肝損傷有一定輔助保護作用。蒲公英提取物在此灌胃劑量條件下輔助保護肝臟損傷作用有限，花生肽組能有效降低急性肝損傷小鼠血清中ALT、AST、LDH含量，降低肝臟中MDA含量，提高肝組織中SOD及GSH-PX活性，對肝損傷有一定的保護作用，但與中劑量組相比具有顯著性差異(p＜0.05)。口服液中劑量組對CCl4所致肝損傷的輔助保護作用優于同劑量的單純蒲公英提取物及花生肽。

3 結論

CCl4經肝微粒體色素P450激活后生成CCl3，CCl3可攻擊肝細胞膜上磷脂分子，引起脂質過氧化，或與肝微粒體脂質和蛋白質發生共價結合，損傷肝細胞膜結構和功能的完整性，使胞漿內可溶性酶如轉氨酶(AST、ALT)、乳酸脫氫酶(LDH)滲入血液中，導致相關酶活性降低，能量產生減少，影響細胞呼吸，造成細胞氣球樣變和壞死［11］。

表2 小鼠血清及肝臟組織生化指標測定結果(±s)Table 2 The biochemical results of serum and liver tissue of mice(±s)

表2 小鼠血清及肝臟組織生化指標測定結果(±s)Table 2 The biochemical results of serum and liver tissue of mice(±s)

注:Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01與空白組比較;*p＜0.05，＊＊p＜0.01與模型組比較;▲p＜0.05，▲▲p＜0.01與中劑量組比較。

檢測項目 空白對照組 模型組 低劑量組 中劑量組ALT(U/L) 6.08±1.18 367.36±27.35ΔΔ 191.37±19.97* 87.63±19.57*AST(U/L) 7.81±2.83 401.33±33.94ΔΔ 223.17±22.74 103.26±19.87*LDH(U/L) 7492.45±791.83 14974.62±1094.73ΔΔ 12914.65±733.48* 12163.59±783.64*MDA(mol/mg) 4.22±1.95 8.39±1.19ΔΔ 6.56±1.18* 6.11±0.19＊＊SOD(U/mg) 4.45±0.15 1.83±0.24ΔΔ 2.21±0.24* 2.35±0.29*GSH-PX(mol·L-1·mg-1) 88.57 ±7.11 69.78 ±5.97ΔΔ 79.53 ±6.35* 81.75 ±6.32*檢測項目 高劑量組 蒲公英提取物組 花生肽組ALT(U/L) 47.13±8.57＊＊ 369.57±30.13▲ 174.59±16.32*▲AST(U/L) 71.29±11.78＊＊ 389.35±34.71▲ 190.63±18.64▲LDH(U/L) 10857±658.19＊＊ 14816±968.54▲ 12891±762.53* ▲MDA(mol/mg) 5.33±0.13＊＊ 8.27±1.63▲▲ 6.46±0.74* ▲SOD(U/mg) 2.43±0.19* 1.79±0.19▲ 2.26±0.18* ▲GSH-PX(mol·L-1·mg-1) 82.08 ±4.89* 70 ±6.07▲ 80.06 ±5.27*▲

實驗結果顯示，復方花生肽口服液中、高2個劑量組均能抑制CCl4致小鼠急性肝損傷模型血清中ALT、AST、LDH升高，降低肝臟中MDA含量，提高肝臟中SOD及GSH-PX活性，對CCl4所致肝損傷有一定輔助保護作用。且在劑量相同的條件下，復方花生肽口服液的輔助護肝功能優于單純的花生肽及蒲公英提取物。提示復方花生肽口服液對于肝臟具有較好的保護作用。同時急性毒理實驗結果顯示，復方花生肽口服液屬于實際無毒物質。

［1］陳貴堂，趙立艷，李博，等.花生肽對衰老模型大鼠血清和心、腦組織抗氧化效果的影響［J］.中國糧油學報，2002，27(1):43-46.

［2］趙海明.以花生蛋白為原料制備抗菌月桂酰基肽［D］.無錫:江南大學，2000.

［3］王瑛瑤，王璋，陳尚衛.花生肽ACE抑制活性肽的分離純化與結構鑒定［J］.食品科學，2008，29(10):341-344.

［4］張宇昊，馬良，王強.花生短肽降血壓活性研究［J］.食品科學，2008，29(6):399-403.

［5］彭維兵，何秋霞，劉可春，等.花生肽對小鼠抗運動性疲勞的實驗研究［J］.山東科學，2011，24(5):35-38.

［6］陳貴堂，趙立艷，趙霖，等.花生肽對半乳糖致大鼠肝損傷的抑制作用［J］.食品科學，2011，32(5):296-300.

［7］彭維兵，何秋霞，劉可春，等.花生肽對四氯化碳致小鼠肝損傷的保護作用［J］.中國食物與營養，2011，17(9):71-73.

［8］林云，江林，蔣健，等.蒲公英的藥理作用研究進展［J］.中國現代中藥，2011，13(8):42-47.

［9］Domitrovi R，Jabovace H，Romi Z，et al.Antifibrotic activity of Taraxacuin officinale root in carbon tetrachloride induced liver damage in mice［J］.J Ethnopharmacol，2010，130(3):569-577.

［10］任麗平，杜鋼軍，崔新萍.蒲公英對酒精性肝損傷的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17(11):178-181.

［11］黃鐘銹，陳冠敏，黃佳寧，等.枸杞多糖對化學性肝損傷的保護作用［J］.預防醫學情報雜志，2005，21(3):37-38.46.