急性肺炎患兒腸道病毒感染狀況研究

西安市兒童醫(yī)院內(nèi)分泌科（西安710002） 王旭艷 馮 媛

急性肺炎是兒童常見的感染性疾病，嚴(yán)重影響兒童的生命安全。病毒是引起急性肺炎的主要病原，常見的病毒病原主要有呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）、腺病毒（Adenovirus，ADV）、流感病毒（Influenza virus，IFV）等［1，2］。腸道病毒廣泛存在于自然界，是心肌炎、手足口病、肝炎等臨床常見疾病的致病病毒。近年來新發(fā)現(xiàn)腸道病毒（Enterovirus，EV）是引起兒童急性肺炎的重要病毒病原［3］。我院于2010年6月至2012年6月對(duì)130例急性肺炎患兒進(jìn)行腸道病毒病原的檢測(cè)，以了解腸道病毒引起急性肺炎的感染狀況，為本地區(qū)兒童急性肺炎的防治工作提供依據(jù)。

資料與方法

1 臨床資料 選擇急性肺炎患兒130例，標(biāo)本采集均經(jīng)患兒家屬同意。所有急性肺炎患兒抽取鼻咽抽吸物作為研究樣本。其中男74例，女56例。年齡10d至7歲，平均14．7±4．9個(gè)月，臨床資料按照標(biāo)本采集登記表通過病歷查閱獲得，所有急性患兒均做血常規(guī)、血?dú)夥治觥⒈茄史置谖锛?xì)菌培養(yǎng)、肝功能和心肌酶等實(shí)驗(yàn)室檢查。

2 標(biāo)本采集 患兒入院后根據(jù)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷為急性肺炎，在24h內(nèi)取出樣本，樣本采集方法：一次性無菌吸痰管經(jīng)鼻腔插入約8cm，吸取分泌物約2ml，每份分別加入1ml病毒保護(hù)液，成分為200U／ml的青霉素、鏈霉素、兩性霉素B及0．125%BSA，充分震蕩混勻后，在冰箱中凍融2次，離心，上清液－80℃保存。病毒RNA采用QLAamp提取試劑盒提取，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后采用PCR進(jìn)行反應(yīng)監(jiān)測(cè)腸道病毒（EV71）。第一輪PCR操作反應(yīng)條件為95℃變性4min，55℃退火30s，70℃延伸20s，25個(gè)循環(huán)；巢式PCR操作條件95℃預(yù)變性4min，50℃退火30s，70℃延伸15s，20個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1．5%瓊脂糖凝膠電泳，之后進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定。

3 核苷酸序列測(cè)定及對(duì)比分析 陽性擴(kuò)增產(chǎn)物純化后送國(guó)家權(quán)威定點(diǎn)基因研究中心進(jìn)行序列測(cè)定。采用專門軟件將所測(cè)得的序列與標(biāo)準(zhǔn)參考株進(jìn)行同源性對(duì)比劑核苷酸、氨基酸序列的變異分析，種系進(jìn)化分析采用MEGA3．1軟件進(jìn)行。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 本研究統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS15．0軟件包進(jìn)行，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方（χ2）檢驗(yàn)，以P＜0．05為有顯著性差異，P＜0．01為有極顯著性差異。

結(jié) 果

1 急性肺炎患兒中腸道病毒的檢出情況 見表1。在130例急性患兒標(biāo)本中，檢測(cè)出腸道病毒引起感染的12例，陽性率為9．2%，其中混合病毒感染9例，分別為混合流感病毒4例，混合腺病毒3例，混合鼻病毒2例。腸道病毒陽性檢出患兒的年齡為16d至29個(gè)月，平均5．2±2．7個(gè)月，大部分患兒在2歲以下（8例，占88．8%），12個(gè)月以下的6例，占66．6%；各年齡段患兒腸道病毒檢出率無顯著性差異。

表1 急性肺炎患兒各年齡段腸道病毒檢出情況

2 急性肺炎患兒不同性別腸道病毒感染情況見表2。12例腸道病毒檢出陽性的患兒中，男8例，占男性患兒的10．8%；女4例，占7．1%，兩組統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無顯著差異（P＞0．05）。

表2 不同性別急性肺炎患兒腸道病毒感染情況

3 腸道病毒感染陽性患兒的臨床資料 12例腸道病毒患感染患兒中有8例（66．6%）出現(xiàn)發(fā)熱，6例（50%）出現(xiàn)咳嗽，7例（58．3%）出現(xiàn)氣喘癥狀，4例（33．3%）合并其他癥狀，主要表現(xiàn)為腹瀉（4例），急性呼吸窘迫癥（3例）和粒細(xì)胞減少癥狀（1例）。

4 腸道病毒感染的時(shí)間分布 見表3。12例腸道病毒感染在2010年6月至2012年6月，感染部分發(fā)生在4～9月份，占91．7%，與其他月份比較有顯著性差異（P＜0．05）。

表3 不同月份腸道病毒感染情況

討 論

急性肺炎是兒科常見病，多發(fā)病，大多由病毒感染引起［4，5］，較常見的病毒為呼吸道病毒。近年來非呼吸道病毒腸道病毒引起急性肺炎的情況日益受到重視。腸道病毒為微小核糖核酸病毒科，有70余個(gè)血清型，主要包括新型腸道病毒5型，埃可病毒33型，脊髓灰質(zhì)炎病毒3型，柯薩奇病毒A組24型，B組6型。腸道病毒廣泛存在于自然界，與人類疾病關(guān)系密切，在溫?zé)釒У貐^(qū)流行廣泛，不同地區(qū)流行病毒類型常有改變。腸道病毒傳染源為病毒攜帶者，在人與人之間經(jīng)糞－口傳播，由糞便和鼻咽物排除體外，健康人體感染腸道病毒后在鼻咽部持續(xù)存在1～2周，通過糞便開始排毒通常在2周至3個(gè)月，因此糞便污染的物件為主要傳染源，同時(shí)還有昆蟲、蒼蠅等傳播媒介，腸道病毒在兒童中感染較為常見［6］，近年來報(bào)道顯示長(zhǎng)春等地區(qū)腸道病毒感染在急性肺炎中占據(jù)重要地位［7］。臨床病原體的診斷主要采取免疫學(xué)方法和RT－PCR技術(shù)，嬰幼兒的治療藥物主要有免疫球蛋白和干擾素等抗病毒藥物。

本研究中腸道病毒感染12例，陽性檢出率為9．2%，遠(yuǎn)低于重慶地區(qū)的16．2%［8］，這可能與腸道病毒地區(qū)分布所致，但9．2%的陽性檢出率仍然說明腸道病毒是急性肺炎的重要病原之一。從患兒的年齡來看，感染腸道病毒的患兒年齡主要在2歲以下，2歲以上的僅發(fā)現(xiàn)1例，這可能與較小患兒免疫系統(tǒng)發(fā)育不健全，體內(nèi)缺乏腸道病毒的特異性抗體有關(guān)。從腸道病毒感染患兒的性別來看，男、女感染率無明顯差異。感染腸道病毒的患兒臨床癥狀主要有發(fā)熱（占66．6%）、咳嗽（50%）、氣喘（58．3%），少數(shù)患兒出現(xiàn)急性呼吸窘迫癥和粒細(xì)胞減少癥狀，對(duì)于伴有腹瀉的急性肺炎患兒，應(yīng)首先考慮腸道病毒感染引起。本研究顯示：腸道病毒的感染多發(fā)生在4～9月份，這是時(shí)間氣候溫?zé)幔c道病毒對(duì)溫?zé)釟夂虮容^適宜，所以夏秋時(shí)節(jié)應(yīng)注意腸道病毒的感染。有研究報(bào)道稱腸道病毒感染易引起患兒白細(xì)胞、心肌酶異常及肝功能等異常［9］，所以經(jīng)注意這些指標(biāo)的及時(shí)監(jiān)測(cè)。

綜上所述，腸道病毒在急性肺炎患兒中陽性檢出率較高，對(duì)急性肺炎感染病毒病原譜是一個(gè)很好的補(bǔ)充，同時(shí)通過本研究認(rèn)識(shí)到腸道病毒引起患兒急性肺炎的發(fā)病多發(fā)生在嬰幼兒期，常伴有腹瀉癥狀的出現(xiàn)，另外，臨床醫(yī)師應(yīng)密切關(guān)注患兒白細(xì)胞、肝功能及心肌酶譜的變化，盡早確定是否為腸道病毒感染，及早治療，以改善患兒的預(yù)后。

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