北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量分析

譚曉虹，田嘉銘，王志寶，馬寧，楊曉媛，張丹參

（1.河北北方學院藥學系，河北張家口075000；2.河北北方學院第一附屬醫院，河北張家口075000；3.河北科技大學，河北石家莊050000）

北五味子（Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.）為木蘭科五味子屬植物的干燥成熟果實。具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心的功效。北五味子在我國傳統醫學中使用有悠久歷史，主要用于久咳虛喘，夢遺滑精，久瀉不止，內熱消渴，心悸失眠等癥的治療[1]，北五味子主要含有木脂素、萜類、有機酸、揮發油及多糖等有效成分[2]。現代研究表明北五味子有效成分具有減輕肝損害和防治肝纖維化的作用[3]、對高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷有一定的保護作用[4]，還可抑制小膠質細胞的活化[5]。而且，北五味子作為藥食兼用的植物，除在臨床上廣泛應用外，由于其果實營養豐富，在食品領域也被備受矚目，如可用于釀酒、制作飲料等。本實驗以甲醇作為提取溶劑采用超聲提取法，利用高效液相色譜對北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的含量進行測定，為北五味子的質量控制及科學使用提供實驗參考。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀：美國Agilent1100；SZ-97A自動三重水蒸餾器：上海亞榮生化儀器廠；JN-5200DT型超聲儀：寧波江南儀器廠；756MC型紫外可見分光光度計：上海精密科學儀器廠；BT224s電子天平：北京賽多利斯科學儀器有限公司；DHG-9070AS型新型電熱恒溫鼓風干燥箱。

1.2 材料

五味子醇甲標準品（110857-200709）、五味子酯甲標準品（111529-200503）：中國生物制品檢定所，北五味子：張家口市藥材公司，經鑒定為遼寧產北五味子，甲醇（分析純）：天津市化學試劑三廠；甲醇（色譜純）：天津市贏達稀貴試劑化工廠；實驗用水均為三重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：HypersinBDSC8柱（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫 30℃；流動相：甲醇-0.1%醋酸（70∶30）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；進樣量：20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取五味子醇甲標準品0. 0099 g，五味子酯甲標準品0. 0099 g，分別用甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，作為標準儲備液。

2.3 供試品溶液的制備

將北五味子用蒸餾水漂洗3次后置50℃的干燥箱中干燥至恒重，取出粉碎成粉末狀。準確稱取北五味子粉末1 g各5份，置于50 mL比色管中，用甲醇定容至刻度，超聲功率220 W，超聲提取30 min后，常壓過濾，在濾渣中加入甲醇50 mL，再進行超聲提取30 min[6]，常壓過濾，合并兩次濾液定容至50 mL，濾液經0.45 μm微孔濾膜過濾，所得濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關系考察

取一定體積的五味子醇甲標準儲備液和五味子酯甲標準儲備液，將二者進行混合，用甲醇將混合標準儲備液稀釋成五味子醇甲質量濃度為10.00、14.00、18.00、22.00和26.00 ng/μL，五味子酯甲質量濃度為2.500、5.000、7.500、10.00和 12.50 ng/μL 的混合標準溶液。按照2.1項下色譜條件，對混合標準溶液進樣分析，分別以質量濃度x（ng/μL）為橫坐標，峰面積y（μV·s）為縱坐標進行回歸分析，得到五味子醇甲標準曲線方程及相關系數y1=40.407x1-8.538，r=0. 9994及五味子酯甲的標準曲線方程及相關系數y2=24.532x2-3.690，r=0. 9995。

2.5 精密度實驗

吸取同一五味子醇甲和五味子酯甲混合標準品溶液，在“2.1”色譜條件下重復進樣5次，考察精密度，結果表明五味子醇甲的RSD為0.910%（n=5），五味子酯甲的RSD為1.26%（n=5）。

2.6 重復性考察

精密稱取同一批次北五味子粉末，按供試品溶液的制備方法平行制備5份，在“2.1”色譜條件下進行HPLC分析測定，結果表明北五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的RSD分別為1.40%和1.43%。

2.7 穩定性考察

取同一供試品溶液，在室溫下分別放置0、2、4、8、12、24 h后進樣測定，結果表明：北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲均在24 h內穩定。北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的RSD為2.98%和2.19%。

2.8 回收率試驗

準確稱取已知含量的北五味子粉末5份，分別定量加入五味子醇甲對照品20.0 ng/μL，五味子酯甲對照品5.00 ng/μL，按方法“2.2”制備供試品溶液，在“2.1”色譜條件下進行HPLC分析，計算回收率，結果表明北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的平均回收率分別為100.9%、101.4%，RSD分別為1.11%、1.24%（n=5）。

2.9 樣品測定

精密吸取上述供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進樣20 μL分析測定，記錄色譜峰面積，以標準曲線方程求出樣品中五味子醇甲和五味子酯甲的含量。結果見表1；色譜圖見圖1～圖2。

3 討論

本實驗采用甲醇作溶劑超聲提取北五味子中五味子酯甲和五味子醇甲，提取時間短，所需溶劑量少，方法簡便易行且提取效果良好。利用HPLC法測定北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲含量，實驗表明以甲醇-0.1%醋酸（70∶30）作為流動相，北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲峰形良好，保留時間短，分離度高。方法精密度高，重復性及穩定性良好，回收率符合要求，具有快速、簡便、準確的優點。可用于北五味子中五味子醇甲和五味子酯甲的定量分析。實驗結果同時表明，北五味子中五味子醇甲的含量明顯高于五味子酯甲，這與文獻報道的北五味子中的五味子醇甲的含量相對高相一致[7]。并且在2005版藥典中，是以五味子中所含的五味子醇甲作為藥材的質量控制指標，因此本實驗可以為五味子的質量監控提供一定的參考。

表1 北五味子中五味子醇甲、五味子酯甲的含量（n=5）Table 1 The schisandrin and schisantherin A content in Schisandra chinensis（Turcz.）Baill（n=5）

圖1 五味子醇甲、五味子酯甲標準品HPLC圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substance of schisandrin and schisantherin A

圖2 北五味子樣品HPLC圖Fig.2 HPLC chromatograms of Schisandra chinensis（Turcz.）Baill

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京：化學工業出版社,2005：45

[2] 可成友,高珍,康宏玲,等.北五味子植物化學成分及其活性的研究進展[J].遼寧農業科學,2007,3：57-60

[3] 許珂玉,肖建英.五味子粗多糖提取物對大鼠肝纖維化的防治作用研究[J].中國藥房,2011,22(19)：1743-1745

[4] 孫瀟,姜恩平,陳建光.北五味子總木脂素對高脂血癥大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制[J].吉林大學學報：醫學版,2009,35(2)：276-279

[5] 張娜,胡荻,楊靜玉,等.五味子葉化學成分及五味子醇甲對脂多糖誘導的小膠質細胞活化抑制作用的研究[J].中國藥物化學雜志,2010,20(2)：110-115

[6] 楊磊,馬春慧,祖元剛.北五味子木脂素超聲提取工藝[J].農業工程學報,2009,25(增 1)：185-192

[7] 譚春梅,黃琴偉,張文婷,等.五味子和南五味子的HPLC指紋圖譜研究[J].中國現代應用藥學雜志,2008,25(6)：514-517