幾種兒童牛奶酪蛋白含量的測定與比較

陳惠，謝彩軍，葉廣輝，陳俊城，龐玉鳳，朱曉瑩

（1.廣西省百色市右江民族醫(yī)學院藥學系，廣西百色533000，2.右江民族醫(yī)學院科學實驗中心，廣西百色533000）

組成人體蛋白質的氨基酸有20種，其中有8種是人體自身不能合成的，必須從食物中攝取，這8種氨基酸稱為必需氨基酸[1]。膳食蛋白質中如果包含了8種必需氨基酸，那么這種蛋白質稱為全蛋白。牛奶中的蛋白質是膳食蛋白質中常見的全蛋白之一[2]。酪蛋白是牛奶中最主要的蛋白質，約占蛋白總量的百分之八十[3]。因此，酪蛋白的含量是衡量牛奶營養(yǎng)價值的一個重要指標。牛奶是兒童膳食蛋白質的重要來源，對兒童生長發(fā)育具有重要的意義。本文選擇幾種常見的盒裝兒童牛奶，用生物化學實驗方法測定牛奶中酪蛋白的含量，對性價比較高的兒童牛奶提出一些建議。

1 材料與方法

1.1 材料

兒童牛奶A（旺仔復原乳牛奶）、兒童牛奶B（皇氏小星仔兒童牛奶）、兒童牛奶C（伊利QQ星兒童成長牛奶）、兒童牛奶D（蒙牛未來星兒童成長牛奶）均購于百色市天鵝城超市。

1.2 試劑與儀器

牛乳酪蛋白：sigma公司；總蛋白測定試劑盒：四川邁克生物科技有限公司；95%乙醇、無水乙醚、0.2 mol/L pH=4.7醋酸-醋酸鈉緩沖液、乙醇-乙醚混合液（體積比1∶2）、0.1 mol/L氫氧化鈉溶液均為國產分析醇。

722分光光度計、ND0-710重溫恒溫干燥箱、PL203分析天平、TGL-18G-C離心機、A-1000S超濾機、酸度計。

1.3 方法

1.3.1 牛奶中酪蛋白的提取[4-5]

取各品牌兒童牛奶10mL置于50mL燒杯內，加熱至40℃左右，邊緩慢攪拌邊加入10 mL已預熱（40℃）的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，室溫冷卻，3000 r/min離心10 min后棄上清，制得酪蛋白粗品。用少量蒸餾水洗滌沉淀3次，棄上清液；加入5 mL 95%乙醇，3000 r/min離心5 min，棄上清液；用乙醇-乙醚混合液洗滌兩次，再用無水乙醚洗滌沉淀兩次；抽干，置于恒溫烤箱中50℃干燥3 h，稱重。

1.3.2 酪蛋白標準溶液的配制及標準曲線的繪制[6]

準確稱量牛奶酪蛋白1.000 g，以0.1 mol/L NaOH溶液溶解定容至100 mL配成10 mg/mL標準溶液，搖勻后保存?zhèn)溆谩Ｅ渲脻舛确謩e為0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%標準溶液1 mL，加入4 mL雙縮脲試劑，混勻，37℃水浴10 min，540 nm下測定各管溶液的吸光度值。以酪蛋白濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

1.3.3 樣品酪蛋白溶液的配制、酪蛋白樣品純度計算及酪蛋白性價比計算

分別準確稱取樣品酪蛋白0.1g，以0.1 mol/L NaOH溶液溶解定容至20 mL，樣品酪蛋白含量測定方法同標準溶液的測定。然后根據標準曲線計算樣品中酪蛋白的實際含量，以此判斷酪蛋白樣品純度。再根據包裝體積及售價計算兒童牛奶中酪蛋白的價格即酪蛋白性價比（g/元）=酪蛋白重量×樣品純度×體積/價格。

2 結果

2.1 提取酪蛋白的重量

各個品牌兒童牛奶提取的酪蛋白的重量見下表1。

由表1可見：樣品中酪蛋白含量大?。簝和Ｄ藽＞兒童牛奶D＞兒童牛奶B＞兒童牛奶A。

2.2 標準曲線的制作

依據實驗所得數據，繪制的酪蛋白標準曲線見下圖1。

表1 不同品牌兒童牛奶酪蛋白含量（x±s，n=3）Table 1 Different Brand Children's Milk Castein Conten

圖1 酪蛋白標準曲線Fig.1 Castein Standard Curve

2.3 酪蛋白樣品純度的測定

不同品牌兒童牛奶提取酪蛋白含量測定結果見表2。

表2 不同品牌兒童牛奶酪蛋白含量測定Table 2 Different Brand Children's Milk Castein Conten Determination

由表2可知，通過計算得的酪蛋白濃度與配置濃度相當，說明等電沉淀法提取的酪蛋白樣品純度較高；從購買的酪蛋白性價比來說，兒童牛奶C＞兒童牛奶B＞兒童牛奶D＞兒童牛奶A。

3 討論

自從“三鹿事件”曝光后，乳制品的質量與安全成為我國民眾最關心最敏感的事。目前市場上牛奶的品牌較多，品牌產品種類豐富，并且各種各樣的功能牛奶也不斷涌現，面對眾多選擇，常常會讓消費者無所適從。在選擇兒童牛奶時，家長往往依據廣告宣傳，售價，口感等因素，極少考慮到牛奶中的蛋白質含量。本文選擇市場上四種品牌的兒童牛奶，通過等電沉淀法，統(tǒng)一提取牛奶中的酪蛋白，比較其含量高低及蛋白質性價比。四種兒童牛奶中提取的酪蛋白含量大小依次為：兒童牛奶C＞兒童牛奶D＞兒童牛奶B＞兒童牛奶A。提取蛋白含量均低于包裝盒上標識蛋白質含量，這與牛奶中酪蛋白的含量有關，也與實驗操作過程中丟失部分酪蛋白樣品有關。就購買的蛋白質性價比而言兒童牛奶C＞兒童牛奶B＞兒童牛奶D＞兒童牛奶A。

酪蛋白是牛奶中的主要蛋白質，酪蛋白是由αS1、αS2、β和κ酪蛋白組成的復合物[6-7]，它們在牛奶中的含量相對恒定，平均等電點為4.7。本次實驗利用蛋白質在等電點時溶解度最低的原理，在適宜的溫度下，用緩沖鹽溶液將牛奶pH調至等電點，使酪蛋白沉淀，然后用水、乙醚、乙醇洗滌共沉淀的雜蛋白、乳糖和脂類等雜質，得到較純的酪蛋白。該方法操作簡便，對試劑、儀器要求不高，測定結果較準確，可以以此監(jiān)測牛奶的質量。

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