神經膠質瘤患者外周血淋巴細胞亞群檢測的臨床分析

朱琳燕

湖北黃石市中心醫院腫瘤內三科 黃石 435000

神經膠質瘤占全部顱內腫瘤的40%～50%，是來源于神經上皮的一種腫瘤，具有低治愈率、高病死率、高復發率及高發病率特點［1］。神經膠質瘤的發生和發展與機體免疫狀態有關，機體免疫監視功能減弱及免疫功能低下常相互作用，促進神經膠質瘤的發生及發展［2］。其中淋巴細胞亞群是其最重要的一種指標，其腫瘤的惡化程度與各亞群比例變化關系密切［3］。本文2011-12—2013-08在我院接受診治的神經膠質瘤患者65例，采用流式細胞術對膠質瘤不同分級患者的外周血淋巴細胞亞群及調節T淋巴細胞（Treg）的比例進行分析，探討與腫瘤惡化程度的關系?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011-12—2013-08在我院接受診治的神經膠質瘤患者65例為觀察組，男42例，女23例；年齡29～80歲，平均（54.8±10.6）歲；根據膠質瘤惡性程度WHO分級，其中Ⅱ級～Ⅲ級作為A組，Ⅳ級作為B組。A組43例，男32例，女11例；年齡30～78歲，平均（55.1±11.2）歲；B組22例，男10例，女12例；年齡29～80歲，平均（54.2±10.3）歲。所有患者均經組織病理學檢查確診。選擇同期在我院健康體檢者43例作為對照組，男23例，女20例；年齡31～75歲，平均（53.9±9.6）歲。

1.2 主要試劑與儀器 美國Beckman Co uLter FC500流式細胞儀；試劑主要為CD4＋、CD25＋Treg試劑盒及Sim uL SET IMK Plus試劑盒，均為美國Beckman Co uLter公司生產。

1.3 淋巴細胞亞群檢測及CD4＋CD25＋Treg檢測 （1）淋巴細胞亞群檢測：本組所有患者均在清晨空腹取靜脈血2 000μL于乙二胺四乙酸（EDTA-K2）真空抗凝采血管內混勻，在室溫條件下保存。取6種不同熒光標記抗體各20μL與100μL全血中，并將其混勻，避光孵育25min加入紅細胞裂解液（Lysing Solution）1 000μL避光孵育12min加入450 μL PBS避光孵育12min，以1 200r／min離心6min，棄去上清，PBS洗滌2次，再加入500UPBS上機檢測，記錄CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4＋／CD8＋陽性細胞百分比。（2）CD4＋CD25＋Treg檢測：在其中1支管中加入20μL IgG1-FITC、20μL IgG2a-PE，另外1只管中加入20μL CD4-FITC、20μL CD25-PE分別加入100μL全血中，并將其混勻，避光孵育25min加入紅Lysing Solution 1000μL避光孵育12min加入450μL PBS避光孵育12min，以1 200r／min離心12min，棄去上清，PBS洗滌2次，再加入500μL PBS上機檢測。

1.4 統計學處理 運用統計學軟件SPSS 11.0進行分析，計量資料數據采用（±s）表示，兩組樣本均數對比采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組外周血T淋巴亞群檢測結果對比 觀察組外周血中CD3＋CD4＋T細胞百分比較對照組顯著降低（P＜0.05）；觀察組外周血中CD3＋CD8＋T細胞百分比較對照組升高，但無顯著性差異（P＞0.05）；觀察組外周血中CD4＋／CD8＋比值較對照組顯著降低（P＜0.05）。見表1。

表1 2組外周血淋巴細胞亞群檢測結果對比 （±s，%）

表1 2組外周血淋巴細胞亞群檢測結果對比 （±s，%）

注：與對照組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋CD4＋／CD8＋觀察組 65 36.9±4.6＊ 34.1±6.8 0.7±0.2＊對照組43 41.7±5.9 32.3±7.1 1.3±0.3

2.2 2組外周血淋巴細胞亞群檢測結果對比 A組外周血中CD3＋CD4＋百分比、CD4＋／CD8＋比值均較B組顯著降低（P＜0.05）；A組外周血中CD3＋CD8＋百分比較B組顯著升高（P＜0.05）。見表2。

表2 2組外周血淋巴細胞亞群檢測結果對比 （±s，%）

表2 2組外周血淋巴細胞亞群檢測結果對比 （±s，%）

注：與B組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋CD4＋／CD8＋A組 43 35.1±4.8＊34.6 ±6.9＊ 0.6±0.3＊B組22 40.4±6.9 31.7±6.8 1.2±0.4

2.3 2組T淋巴細胞與CD4＋CD25＋檢測結果對比 觀察組CD3＋T淋巴細胞百分比較對照組下降，但無顯著差異（P＞0.05）；觀察組CD4＋CD25＋Treg百分比較對照組顯著升高（P＜0.05）。見表3。

表3 2組T淋巴細胞與CD4＋CD25＋Treg亞群百分比檢測結果對比 （±s，%）

表3 2組T淋巴細胞與CD4＋CD25＋Treg亞群百分比檢測結果對比 （±s，%）

注：與對照組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋T淋巴細胞 CD4＋CD25＋Tre g觀察組 65 63.3±8.3 7.3±2.9＊對照組43 66.1±8.7 5.6±3.5

2.4 2組T淋巴細胞與CD4＋CD25＋檢測結果對比 A組CD3＋T淋巴細胞百分比較B組下降，但無顯著差異（P＞0.05）；A組CD4＋CD25＋Treg百分比較B組顯著升高（P＜0.05）。見表4。

表4 2組T淋巴細胞與CD4＋CD25＋檢測結果對比 （±s，%）

表4 2組T淋巴細胞與CD4＋CD25＋檢測結果對比 （±s，%）

注：與B組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋T淋巴細胞 CD4＋CD25＋Tre g A組 43 63.5±7.6 9.5±4.1＊B組22 64.2±7.9 6.3±3.4

3 討論

神經膠質瘤是常見的一種神經系統腫瘤，該腫瘤占神經系統原發性腫瘤一半以上。研究表明，在全年所有新發腫瘤中，膠質瘤占1.4%，其中病死率占所有腫瘤病死患者的2.4%，而患者的生存期與膠質瘤級別呈負相關，級別越高生存期越短。目前，手術難以將神經膠質瘤完全切除。同時膠質瘤患者由于增殖活性較高，術后易復發。而神經膠質瘤的發生和發展與機體免疫狀態有關，抗腫瘤機體免疫包括細胞與體液兩大免疫，而在殺傷腫瘤細胞及控制腫瘤生長方面，T細胞介導的細胞免疫具有重要作用。在神經膠質瘤患者發生及發展過程中，細胞增殖能力降低、T細胞亞群數量發生變化、細胞毒性降低及免疫功能失衡［4］。本文結果表明，觀察組外周血中CD3＋CD4＋T細胞百分比較對照組顯著降低，觀察組外周血中CD3＋CD8＋T細胞百分比較對照組升高，觀察組外周血中CD4＋／CD8＋比值較對照組顯著降低。A組外周血中CD3＋CD4＋百分比、CD4＋／CD8＋比值均較B組顯著降低，A組外周血中CD3＋CD8＋百分比較B組顯著升高。由此表明，神經膠質腫瘤患者免疫功能處于抑制狀態。

Treg細胞具有防止免疫過程過度損傷機體與維持自身耐受的作用，是具有負調節機體免疫反應的一群淋巴細胞，同時也參與腫瘤細胞逃避監視［5］。CD4＋CD25＋T細胞是天然產生的Treg細胞，研究表明，CD4＋CD25＋T細胞主要具有兩大功能，包括免疫抑制和低反應性，這些抑制功能的發揮不是細胞因子依賴性抑制，而是接觸式抑制［6］?；罨腃D4＋CD25＋T細胞能夠使CD4＋與CD8＋的T細胞表達IL-2受到抑制；而CD4＋CD25＋T細胞活化后由于CTLA-4分子表達增加，從而使得T細胞介導的免疫調節受到影響［7］。本文結果表明，觀察組CD4＋CD25＋Treg百分比較對照組顯著升高（P＜0.05）；A組CD4＋CD25＋Treg百分比較B組顯著升高（P＜0.05）。由此表明，Treg細胞數目影響腫瘤的發生、增長。綜上所述，Treg細胞可作為神經膠質瘤患者重要檢測指標，有利于對神經膠質瘤患者惡性程度及療效進行判斷。

［1］遲林，李昊淼.惡性腫瘤患者外周血淋巴細胞亞群及Treg細胞檢測的臨床應用［J］.山東醫藥，2010，50（22）：59-60.

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［3］馬學華，張萱，滕雷，等.膠質瘤切除術對神經膠質瘤患者外周血淋巴細胞亞群及CD4＋CD25＋調節性T細胞的影響［J］.黑龍江醫學，2013，37（4）：241-244.

［4］Kobayashi E，Mizukoshi E，Kishi H，et al.A new cloning and expression system yields and validates TCRs from blood lymphocytes of patients with cancer within 10days［J］.Nature Medicine，2013，19（11）：1542-1546.

［5］馬學華，張萱，滕雷，等.神經膠質瘤患者外周血淋巴細胞亞群檢測的臨床意義［J］.國際檢驗醫學雜志，2013，34（9）：1080-1082.

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［7］趙曉，燕翔，孫勝杰，等.晚期肺腺癌患者外周血T淋巴細胞亞群檢測的臨床意義［J］.南方醫科大學學報，2012，32（5）：752-754.