婦科沖洗粉質量標準研究

周紅玲 劉 陽

（湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院 湖南 株洲 412000）

婦科沖洗粉為我院婦科中醫醫師潛心研制的復方中藥制劑，由蛇床子、馬鞭草、地膚子等中藥所組成。該制劑具有清熱燥濕，殺蟲止癢。用于皮膚瘙癢，婦女陰癢等治療。本方為外用藥，先用開水適量浸泡30分鐘后去渣坐浴。該制劑原質量標準有專屬性不強的化學鑒別和重現性差的蛇床子薄層色譜鑒別，因此對其質量標準進行重新研究。本方中馬鞭草為馬鞭草科植物馬鞭草Verbena officinalis L.的干燥地上部分［1］，其主要有效成分為熊果酸，具有抗炎、抗菌和抗病毒的作用；蛇床子為傘形科植物蛇床Cnidium monnieri（L.）Cusson的果實［1］，其主要有效成分蛇床子素具有溫腎壯陽，燥濕，祛風，殺蟲等作用。為有效對該制劑進行質量控制，本文建立薄層色譜法鑒定馬鞭草，并建立HPLC法控制方中主要有效成分蛇床子素的含量。

1 儀器與試藥

LC-10ATvp高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD-10Avp紫外檢測器（日本島津公司），N2000色譜工作站（浙江大學智能信息工程研究所），薄層色譜掃描影像系統（瑞士卡瑪公司），KQ3200型超聲波清洗器（功率300W，頻率50kHz，昆山市超聲儀器有限公司）。

對照藥材：馬鞭草（批號：121002-200703，中國藥品生物制品鑒定所）；

對照品：熊果酸（批號：110742-200516，中國藥品生物制品鑒定所）；蛇床子素（批號：110822-200305，中國藥品生物制品鑒定所）；

婦科沖洗粉（湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院，60g／袋，批號：110505、110918、111105）；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑為分析純。

2 薄層色譜方法與結果

取本品5g，加80%甲醇60ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取馬鞭草對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取熊果酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述三種溶液各1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（20∶5∶8∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果見圖1。

3 蛇床子素含量測定方法與結果

3.1 液相色譜條件：色譜柱：Hpersil BDS C18（200mm×4.6mm×5μm）；流動相：乙腈-水（55∶45）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：322nm；進樣量：10μl。

3.2 對照品溶液的制備：精密稱取經五氧化二磷減壓干燥12小時的蛇床子素對照品10.54mg，置50ml量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.211mg·ml-1蛇床子素對照品溶液，精密吸取上述溶液5ml置25ml容量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度42.2μg·ml-1蛇床子素對照品溶液。

3.3 供試品溶液的制備：取本品粉末約0.7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

3.4 提取溶劑的選擇：分別用乙醇、乙酸乙酯作為提取溶劑照上法平行處理。精密吸取對照品溶液（42.2μg·ml-1）與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，并計算，結果見表1。結果表明，不同的提取溶劑對樣品中蛇床子素鈉的含量有影響，其中甲醇和乙酸乙酯較高，考慮色譜評價系統中理論塔板數、分離度和對稱因子三個參數的結果，故選擇甲醇作為最佳提取溶劑。

表1 提取溶劑的選擇

3.5 陰性對照溶液的制備：按婦科沖洗粉制法制成缺蛇床子的陰性樣品，按3.3項下同法制成陰性對照溶液。

3.6 方法學考察

3.6.1 專屬性考察：分別精密吸取3.2項下對照品溶液、3.3項下供試品溶液以及3.5項下陰性對照溶液各10μl，注入液相色譜儀，結果顯示，陰性對照溶液對測定結果無干擾，見圖2-4。

3.6.2 線性關系考察：精密吸取對照品溶液（0.211mg·ml-1）1.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml置25mL量瓶中，加入乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得（含蛇床子素）濃度分別為8.4μg·ml-1、16.9μg·ml-1、33.8μg·ml-1、50.6μg·ml-1、67.5μg·ml-1的標準品溶液，分別精密吸取上述各溶液10μl注入液相色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標，濃度為（μg·ml-1）為橫坐標，繪制標準曲線。其回歸方程為：Y=17102519.02X-6640.20，R=0.9999（n=5）。結果表明：蛇床子素鈉對照品在8.4～67.5μg·ml-1范圍內線性關系良好。

3.6.3 重復性試驗：取同一批號（批號：110505）樣品細粉6份，照3.3項下方法平行操作，精密吸取對照品溶液（42.2μg·ml-1）及上述供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，結果蛇床子素平均含量為0.14%（g／g），RSD=0.97%，結果表明該方法的重復性較好。

3.6.4 準確度試驗：取已測定含量的同一批號（批號：110505）樣品細粉（含蛇床子素1.48mg／g）6份，約0.35g，精密稱定，置25ml量瓶中，精密加入對照品溶液（42.2μg·ml-1）12.5ml，照供3.3項下方法平行操作，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，結果平均回收率為97.88%，RSD=0.94%，表明本方法回收率結果良好，見表2。

3.6.5 穩定性試驗：取4.3項下同一供試品溶液（批號：110505），分別于配制后的0、2、4、8、12小時，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，結果RSD為1.45%，表明供試品溶液在配制后12小時內穩定。

3.7 樣品含量測定：分別吸取3.2項下對照品溶液和3.3項下供試品溶液注入液相色譜儀，按2項下色譜條件測定，并按外標法計算蛇床子素的含量，結果3批樣品含量結果見表3，根據以下結果確定婦科沖洗粉中蛇床子素含量不得低于1.30mg／g。

表2 準確度試驗結果表

表3 樣品含量測定結果

4 討論

4.1 蛇床子素（歐芹酚甲醚）為香豆素類化合物，不溶于水和石油醚，易溶于甲醇、丙酮和氯仿等溶劑，為獲得最大提取率，并且結合試劑的毒性大小，本文考慮用毒性較小的甲醇、乙醇和乙酸乙酯作為提取溶劑，試驗結果表明甲醇和乙酸乙酯提取的蛇床子素含量相近并高于乙醇，但乙酸乙酯因為峰型矮胖，色譜系統評價參數中理論塔板數明顯低于甲醇，且對稱性較差，因此綜合上述考慮，選擇甲醇作為最佳提取溶劑。

4.2 原質量標準中化學鑒別專屬性較差，蛇床子的薄層色譜鑒別重現性較差，通過本研究改進，用馬鞭草對照藥材和熊果酸對照品同時對本方中君藥馬鞭草進行定性鑒別，用高效液相色譜法對君藥蛇床子中主要有效成分蛇床子素進行定量控制，且方法簡便，準確性和重現性較好，為有效控制婦科沖洗粉的質量提供定性定量的依據。

［1］ 中華人民共和國國家藥典委員會，中國藥典［S］.一部.中國醫藥科技出版社，2010

［2］ 董文桑，劉蓉，瞿發林.HPLC法測定鎮痛寧膠囊中蛇床子素含量［J］.中國藥師，2009，12（6）：829-830

［3］ 唐勇，周春菊.高效液相色譜法測定陰炎凈洗液中蛇床子素含量［J］.中國藥業，2008，17（21）：36

［4］ 李小安，張軍科，史美佳，等.HPLC法同時測定阿娜爾婦潔液中蛇床子素和歐前胡素的含量［J］.西北藥學雜志，2008，23（3）：139-141