蒿甲醚粉針劑對裸鼠體內移植人肺腺癌A549 的抑制作用

余春潔，王 鵬，胡慧媛，賈艷琪，施 娟，徐洪呂

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，占新發腫瘤病例的14.5%，居各類腫瘤死亡病例的首位，嚴重威脅人們健康，影響其生活質量，且肺癌病死率高，多數患者在明確診斷時即有轉移，5 年生存率約維持在15%［1］。治療肺癌的方法有很多，但是化學藥物的毒性、手術和放射療法對人體正常組織的損傷容易導致腫瘤復發，因此，尋找低毒性、特異性殺傷肺癌細胞的藥物和方法一直是醫學探索的熱點。20 世紀60 年代，我國科研人員從植物青蒿中提取出抗瘧有效成分青蒿素，隨后其在臨床中迅速取代奎寧等傳統抗瘧藥，被WHO 稱為治療瘧疾的最大希望。近年研究發現，青蒿素及其衍生物有明確的抗腫瘤和抑制腫瘤血管生成的作用［2］，其作用與bcl－2 基因、PCNA基因表達下調和bax 蛋白表達升高相關［3］。蒿甲醚 (Artemether)為青蒿素的脂溶性衍生物，是含過氧橋結構的倍半萜內酯化合物，在臨床上治療惡性瘧和腦型瘧有顯著療效［4］，并有治療瘧疾、血吸蟲、免疫調節等作用［5］，其可選擇性殺傷腫瘤細胞而對正常組織細胞的毒性較小，與傳統化療藥物不存在交叉耐藥［6］。有研究顯示，蒿甲醚能抑制U251 細胞生長，呈劑量和時間依賴性［7］，同時其與順鉑聯用對小鼠Lewis肺癌有相加抑制作用，能促進腫瘤細胞凋亡，機制可能與調控細胞凋亡相關基因的表達有關［8］。本研究旨在探討蒿甲醚對裸鼠體內移植人肺腺癌A549 細胞株生長的抑制作用，為肺癌的臨床用藥研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 選取雌性裸鼠32 只，鼠齡6 ～7 周;體質量20 ～23 g，購于上海實驗動物中心。

1.1.2 主要藥品和試劑 蒿甲醚粉針劑(1 ml:80 mg/支，批號:H10900011)由昆明制藥廠股份有限公司生產，0.9%氯化鈉溶液(100 ml:0.9 g/瓶，批號:200511003)由昆明南疆制藥有限公司生產。

1.1.3 細胞系 人肺腺癌細胞系A549 細胞由昆明醫科大學實驗動物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組與劑量 按裸鼠體質量將其分為不同的層，再對每一層的裸鼠進行編號，采用隨機數字表法將裸鼠分為低、中、高劑量組和對照組，各8 只。裸鼠接種人肺腺癌A549 細胞24 h 后，高劑量組給予蒿甲醚粉針劑120 mg/kg、中劑量組為80 mg/kg、低劑量組為54 mg/kg，對照組給予0.9%氯化鈉溶液10 mg/kg，連續給藥12 d 后處死裸鼠，剝離腫瘤，稱腫瘤質量。抑瘤率= (1－實驗組平均瘤質量/對照組平均瘤質量) ×100%［9］。

1.2.2 移植瘤模型的建立 取對數生長期的A549 細胞，PBS洗滌，調整細胞密度，制備成2 ×106個/0.2 ml 的細胞懸液，分別接種于裸鼠腋下。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0 軟件包進行統計學分析，計量資料以(x ±s)表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用q 檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4 組死亡情況 實驗期間，低、中劑量組各有1 只裸鼠死亡，高劑量組和對照組無裸鼠死亡。

2.2 4 組抑瘤率比較 4 組抑瘤率比較，差異有統計學意義(P ＜0.05)。其中高劑量組抑瘤率高于低、中劑量組，差異有統計學意義(P ＜0.05);低、中劑量組抑瘤率比較，差異無統計學意義(P ＞0.05，見表1)。平均瘤質量隨蒿甲醚的劑量增加而減少，見圖1。

表1 4 組體內腫瘤質量及抑癌率比較Table 1 Comparison of tumor mass and suppressor ratio in 4 groups

圖1 4 組平均瘤質量隨蒿甲醚劑量變化圖Figure 1 The average tumor weight change with dose artemether in 4 groups

3 討論

蒿甲醚對多種腫瘤具有一定的抑制作用已經被諸多研究證實。左曙光等［10］研究表明，與青蒿素相比，蒿甲醚水溶性更好，吸收更快，具有更強的抗腫瘤活性，蒿甲醚可以抑制人慢性髓性白血病細胞株K562 細胞增殖，影響細胞周期，誘導腫瘤細胞凋亡。早期國內外學者就蒿甲醚對人肺腺癌A549 的作用也做了一些研究。郭燕等［11］研究結果顯示，蒿甲醚可顯著抑制人肺腺癌A549 細胞株生長，其細胞毒作用與其誘導腫瘤細胞凋亡有關。錢海洪等［12］研究發現，蒿甲醚與順鉑聯用可以明顯抑制人肺腺癌A549 細胞生長，兩藥單用和聯用時隨著藥物濃度增加，其效應也增加。但以上研究均是體外細胞培養研究。本研究在裸鼠體內種植人肺腺癌A549，研究蒿甲醚在體內對人肺腺癌A549 的抑制作用。

本研究結果顯示，對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組平均抑瘤率比較，有明顯差異，其中高劑量組抑瘤率高于低、中劑量組;同時，低、中、高劑量組抑瘤率逐漸升高。因此，蒿甲醚對裸鼠體內移植人肺腺癌A549 有一定的抑制作用，且隨著蒿甲醚劑量的增加而增強。另外，低劑量組與中劑量組抑瘤率比較，無明顯差異，可能是實驗中操作不當導致的誤差引起，也可能是因為人肺腺癌A549 對高劑量的蒿甲醚更為敏感，因此仍需進一步實驗進行研究。

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4 Eckstein－Ludwig U，Webb RJ，Van Goethem ID，et al. Artemisinins target the SERCA of plasmodium falciparum ［J］. Nature，2003，424 (6951):957－961.

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6 伍治平，高誠偉，吳永貴，等. 蒿甲醚對SD 大鼠原位腦膠質瘤的抑瘤實驗［J］. 腫瘤防治研究，2010，37 (6):614－617.

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8 萬成亮，蔣永新，寸英麗，等. 蒿甲醚與順鉑聯用對Lewis 肺癌小鼠的抑瘤作用及其機制探討［J］. 昆明醫學院學報，2011，32(3):21－26，24.

9 萬成亮，蔣永新，寸英麗，等. 蒿甲醚與順鉑聯用對Lewis 肺癌小鼠的抑瘤作用［J］. 時珍國醫國藥，2011，22 (12):2924－2926.

10 左曙光，劉淳，劉馨，等. 蒿甲醚對K562 細胞作用的體外實驗研究［J］. 實用醫學雜志，2010，26 (20):3680－3682.

11 郭燕，王俊，章必成，等. 蒿甲醚對人肺腺癌A549 細胞體外生長的影響［J］. 醫學研究生學報，2007，20 (3):233－235，239.

12 錢海洪，胡義德. 順鉑與蒿甲醚聯用增強對人肺腺癌A549 細胞的抑制作用［J］. 四川醫學，2006，27 (2):111－113.