氣相色譜測定蔬菜中甲基對硫磷的不確定度評定

摘要：目的探討適用于氣相色譜法測定蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量的不確定度評定的方法。方法從測定程序分析不確定度來源，并計算各不確定度分量及合成不確定度。結(jié)果被測樣品蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量測定的測量不確定度主要來源于測量重復性，其它因素影響相對較小。通過選擇合適的、可行的試驗方案，規(guī)范操作可以有效減少不確定度，保證測量結(jié)果準確、可靠。結(jié)論提出的方法適用于蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量的不確定度評定。

關鍵詞：氣相色譜法；甲基對硫磷；不確定度；評定依據(jù)國際標準ISO/PIEC 17025《測試和校準實驗室能力的通用要求》中5.4.6\"測量不確定度的評估\"條款規(guī)定：測試實驗室應建立并實施測量不確定度評估程序。測量不確定度是表征合理賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)[1-2]。測量結(jié)果的可用性很大程度取決于測量結(jié)果不確定度的大小。對蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量檢驗方法的測量不確定度研究迄今未見文獻報道。作者根據(jù)國家標準GB/T5009.20-2003和我國\"測量不確定度評定與表示\"的有關標準[1-4]，對氣相色譜法定量測定蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量的測量不確定度進行研究，找出影響不確定度的因素，求出各不確定度分量對總測量不確定度的相對貢獻，對不確定度進行評估，并對測量結(jié)果進行表述。為氣相色譜法定量測定農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的測量不確定度評定提供參考模型，對實驗室的分析測試工作具有一定的實用價值。

1資料與方法

1.1方法及原理

1.1.1測量方法 GB/T5009.20-2003，食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定[4]。

1.1.2原理 試樣經(jīng)乙腈提取、氯化鈉分層去水后，有機相經(jīng)Carb/NH2固相萃取柱凈化后，用丙酮定容，經(jīng)GC/FPD（或GC-MS、GC/NPD）進行有機磷檢測，根據(jù)保留時間和峰面積分別進行定性和定量。

1.2材料和儀器

1.2.1樣品 蔬菜（泥）（質(zhì)控樣，2013年9月12日測定）。

1.2.2甲基對硫磷標準液 100 μg/mL的標準溶液（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所，編號為GSB05-2285-2008，不確定度為±0.17 μg/mL，2013年5月購買）。

1.2.3設備 氣相色譜儀GC7890A（安捷倫科技有限公司，編號為001-042-3）；1/‰電子分析天平（Sartorius，編號為001-004-3）；200 μL移液槍(Eppendorf North America，Inc，系統(tǒng)誤差為±0.6 μL)。

2實驗過程

2.1測定蔬菜（泥）（農(nóng)殘考核樣）有機磷含量的步驟，見圖1。

圖1 測定蔬菜（泥）（農(nóng)殘考核樣）有機磷含量流程圖

2.2工作曲線制備 用200 μL移液槍分別吸取100 μg/mL甲基對硫磷標準溶液8、16、24、32、6 μL用丙酮稀釋到1.0 mL，上機測定，見表1。

2.3樣品測定 試樣經(jīng)乙腈提取、氯化鈉分層去水后，有機相經(jīng)Carb/NH2固相萃取柱凈化后，定容到2.0 mL，經(jīng)GC/FPD進行甲基對硫磷檢測，見表2。

3不確定度評定

3.1建立數(shù)學模型Cx=■ (1)

其中：Cx--試樣中甲基對硫磷的含量，mg/Kg；C0--測定液中甲基對硫磷濃度，μg/mL；m--樣品取樣量，g；V--試樣定容體積，mL

3.2不確定度來源分析

3.2.1 A類不確定度來源（uArel） 即由重復測定樣品引起的。

3.2.2 B類不確定度來源

3.2.2.1樣品稱量引起的相對不確定度(umrel) 包括天平的允差、偏載誤差、重復性誤差引起的不確定度。

3.2.2.2樣品定容體積引起的的相對不確定度(uvrel) 包括2 mL容量瓶允差、定容時的估讀誤差、校準與使用溫度不同引起的不確定度。

3.2.2.3測定過程引起的相對不確定度（uxrel） 包括工作曲線擬合引起相對不確定度uxrel-1，移液槍的相對不確定度uxrel-2，標準溶液的相對不確定度uxrel-3，氣相色譜儀的相對不確定度uxrel-4。

4不確定度分量的計算

4.1 A類不確定度評定 同一操作人員在相同的條件下對同一試樣進行6次檢測，采用標準曲線法擬合甲基對硫磷含量測定結(jié)果分別為8.09 mg/Kg、7.88 mg/Kg、7.82 mg/Kg、7.90 mg/Kg、8.01 mg/Kg、7.86 mg/Kg，平均值為7.93 mg/Kg。樣品重復測定的相對標準不確定度按貝賽爾公式計算，RSD=0.011，p=6則

uArel= RSD/■=0.011/■=0.0045

4.2 B類不確定度評定

4.2.1樣品稱量引起的相對不確定度(umrel)查稱量使用的電子天平檢定證書，其最大允許誤差±0.010 g，偏載誤差±0.010 g，重復性誤差±0.015 g，取k=■，由于樣品的稱樣量為4.832 g，所以由于樣品稱取的引起的相對標準不確定度umrel=■×■=0.0025

4.2.2樣品定容體積引起的的相對不確定度（uvrel）[5]

4.2.2.1校準 A級2 mL容量瓶允差±0.01 mL，取k=■，則uvrel-1=■×■=0.003；

4.2.2.2定容時的估讀誤差，估計為±0.01 mL，取k=■，則uvrel-2=■×■=0.003；

4.2.2.3溫度 由容量瓶校準溫度與使用時溫度不同引起的不確定度uvrel-3在實驗中測得水溫Tt=23℃。

Δv=vt-v20=(α水-α玻)×V20×(Tt-T20)=(2.1×10-4-1.5×10-5)×2×(23-20)=0.12×10-2(mL)。取k=■，則uvrel-3=Δ■=■=0.00035；

uvrel=■=■=0.0043；

4.2.3測定過程引起的相對不確定度（uxrel）

4.2.3.1工作曲線擬合引起相對不確定度uxrel-1[6-7] 甲基對硫磷含量x是工作曲線回歸計算得出，由上述實驗計算得出，回歸方程y=ax+b（y為色譜峰面積，x為甲基對硫磷含量μg/mL），則x=(y-b)/a；本次實驗的標準回歸方程為：y= 1085.5x+24.293，r=0.9999。按實驗方法的要求，對每個濃度的標準溶液重復測定3次，求出其平均峰面積，則x的標準不確定度uxrel-1可按式(3)求得[8]：

uxrel-1=■■（3）

式中：sr=■；sxx=■x■-■■；式中a-工作曲線斜率，a=1085.5；p-樣品測定液測量次數(shù)，p=6；n-標準曲線各點測量總次數(shù)，n=15；X-各標準溶液中甲基對硫磷含量的平均值，X=2.88 μg/mL；X0-樣品測定溶液中甲基對硫磷含量平均值，X0=19.13 μg/mL，將各值代入式中得S=4.167902，Sxx=18.688則uxrel-1=0.0051。

4.2.3.2移液槍的相對不確定度uxrel-2 200 μL移液槍(±0.6 μL) 的不確定度為■=0.346（K=■），標準平均移取體積為24 μL，則uxrel-2=■=0.014。

4.2.3.3標準溶液的相對不確定度uxrel-3[9-10] 由證書可知其不確定度±0.17 μg/mL，則uxrel-3=■=0.0017。

4.2.3.4氣相色譜儀的相對不確定度uxrel-4 證書可知氣相色譜儀的的定量重復性為3.0%，則uxrel-4=■=0.0122（K=■）。

綜合以上結(jié)果則uxrel=■=0.0193

4.3 B類不確定度計算及結(jié)果 urelB=■=0.0199

4.4合成標準不確定度計算及結(jié)果 ucrel=■=0.020

5考核樣中甲基對硫磷含量的擴展不確定度U(C)

考核樣中甲基對硫磷的含量為C=7.93 mg/Kg。取包含因子k=2(95%置信概率)，擴展不確定U(C)=2×7.93×0.020≈0.32 mg/Kg。

6測定結(jié)果表示

考核樣中甲基對硫磷的含量表示為：Cx=C±U(C)=(7.93±0.32)mg/kg。擴展不確定U(C)=2×7.93×0.020≈0.32mg/kg，包含因子k=2。

7結(jié)論

以氣相色譜法定量測定蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量為例，討論了測定蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量測量不確定度的主要來源及其各不確定度分量評定方法，分析了影響測量標準不確定度結(jié)果的各個因素，比較其對總測量不確定度的相對貢獻。由此可見，被測樣品蔬菜中甲基對硫磷農(nóng)藥殘留量測定的測量不確定度主要來源于測量重復性，其它的因素影響相對較小。通過選擇合適的、可行的試驗方案，規(guī)范操作就可以有效減少不確定度，保證測量結(jié)果的準確、可靠。該方法也可以應用于氣相色譜法測定茶葉、蔬菜、水果、大米中其他農(nóng)藥殘留量測量不確定度分析，還可以應用于高效液相色譜法測定防腐劑含量的不確定度評定。

參考文獻：

[1]國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.JJF1059-1999測量不確定度評定與表示[S].北京:中國計量出版社，1999.

[2]國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局計量司.測量不確定度評定與表示指南[M].北京:中國計量出版社， 2003，15-17.

[3]魏昊，喬東.化學分析中不確定度的評估指南[M].北京:中國計量出版社，2002:26-28.

[4]GB/T5009.20-2003，食品中有機磷農(nóng)藥殘留量的測定[S].北京:中國計量出版社，2003:157-167.

[5]國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.國家計量檢定規(guī)程JJG196-2006.常用玻璃量器檢定規(guī)程[S].北京: 中國計量出版社，2006:4-6.

[6]Ellison SLR， RossleinM. Quan tify ingU ncertainty in AnalyticalMeas??urement[S].2ndEd. UK， Eurachempcitac，2000:11.

[7]蔣永祥，葉麗.茶葉中多種有機磷農(nóng)藥殘留量測定不確定度的評定[J].分析實驗室， 2006， 25(12): 54-57.

[8]S Lee，Y Park，W Yang et al[J].Chromatogr，B，2008，865:33-39.

[9]卓先義，馬棟，卜俊，等.氣相色譜法測定海洛因含量的測量不確定度評定[J]. 法醫(yī)學雜志， 2006，22(6):421-423.

[10]戴維杰.液相色譜法測定雪碧中苯甲酸的不確定度分析[J].職業(yè)與健康，2004，20(5):46-47.編輯/張燕