RP-HPLC法測定復方醋酸潑尼松龍滴鼻液中醋酸潑尼松龍的含量

摘要：目的 建立高效液相色譜法測定復方醋酸潑尼松龍滴鼻液中醋酸潑尼松龍的含量的方法。方法 采用Phenomenex Gemini C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以乙腈-水（35：65）為流動相，流速為1.0mL·min-1，檢測波長為246nm。結果 醋酸潑尼松龍在在0.009642~0.2411mg·ml-1范圍內濃度與峰面積呈良好線性關系（r2=1），平均回收率為101.01%，RSD為0.7%（n=9）。結論 本方法簡便、快速、結果準確性、重現性好。

關鍵詞：含量測定；復方醋酸潑尼松龍滴鼻液；RP-HPLC

Determination of Prednisolone Acetate in the Co-prednisolone Acetate Nose Drops by RP-HPLC

LE Li-yuan

(Shaoyang Institute for Food And Drug Control， Shaoyang 422001，Hunan，China)

Abstract：Objective To establisha method for determination content of prednisolone acetate in the co-prednisolone acetate nose drops by RP-HPLC.MethodsPhenominix Gemini C18 （250mm×4.6mm，5μm）column was used and acetonitrile -water（35：65）was used as mobile phase， the flow rate was 1.0mLomin-1，the detecting wave-length was at 246nm.ResultsThere was a good linear relationship between the concentration of prednisolone acetate and peak area within a range of 0.009642~0.2411mg·ml-1（r2=1）.The average recover was 101.01%，with RSD=0.7%（n=9）.ConclusionThemethod is highly repeatable and accurate.

Key words：Determination of content;Prednisolone acetate nose drops; RP-HPLC復方醋酸潑尼松龍滴鼻液為湘鄉市人民醫院常用醫院制劑，為腎上腺皮質激素類外用藥物，具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用，外用于治療過敏性、非感染性皮膚病和一些增生性皮膚疾患，如皮炎、濕疹、神經性皮炎、脂溢性皮炎及瘙癢癥等。該制劑臨床主要用于鼻的過敏與自身免疫性炎癥疾病。原醫院制劑檢驗標準中醋酸潑尼松龍采用提取后再用紫外-可見分光光度法測定，操作繁瑣且誤差較大。為減少測量誤差，方便實驗操作，本文按國家藥品標準工作手冊[1]建立了RP-HPLC法測定醋酸潑尼松龍含量，操作簡單靈敏，結果準確，重現性好。

1儀器與試藥

1.1儀器Waters2695系列液相色譜儀，安捷倫1260系列液相色譜儀；色譜柱：Phenomenex Gemini C18（250mm×4.6mm，5μm）。

1.2試劑與試藥醋酸潑尼松龍對照品由中國食品藥品檢定研究院提供（醋酸潑尼松龍，批號：100124-200303，含量99.2%），復方醋酸潑尼松龍滴鼻液由湘鄉市人民醫院制劑室提供，甲醇、乙腈、三乙胺、磷酸均為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Phenomenex Gemini C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（35：65）；進樣量：10μl；檢測波長：246 nm；柱溫：35℃[2]。

2.2對照品溶液的制備取醋酸潑尼松龍對照品0.01217g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品10瓶，搖勻，精密量取供試品5ml，置200ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取續濾液即得。

2.4線性關系試驗精密稱取醋酸潑尼松龍對照品24.30mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml、5ml、5ml、5ml、5ml，分別置100ml、100ml、50ml、25ml、10ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各10μl，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度（C）為橫座標，峰面積（A）為縱座標，繪制標準曲線。得回歸方程：Y=4.4475×10-8X+2.4714×10-4，r2=1，試驗結果表明，醋酸潑尼松龍濃度在0.009642~0.2411mg/ml范圍內，峰面積與濃度線性關系良好。

2.5專屬性試驗取對照品溶液、供試品溶液，以及醋酸潑尼松龍含量測定用陰性樣品，按供試品溶液配制方法制成陰性樣品溶液。精密量取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

試驗結果表明：對照品溶液、供試品溶液色譜行為良好，理論板數按醋酸潑尼松龍峰計算為16952，陰性樣品無干擾，見圖1、圖2、圖3。

圖1對照品溶液色譜圖

圖2供試品溶液色譜圖

圖3陰性樣品溶液色譜圖

2.6加樣回收率試驗精密稱取醋酸潑尼松龍12.10mg，置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對照品溶液（濃度為：0.2401mg/ml）。精密量取自制陽性樣品2ml（含量：1.601mg/ml），共9份，分別置25ml量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，精密量取5ml~25ml量瓶中，分別精密量取對照品溶液2ml、3ml、5ml各三份，分別加至上述供試品溶液中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為回收率試驗供試品溶液；取溶液配制項下的對照品溶液，精密量取上述溶液各10μl，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率，試驗結果表明，該平均回收率良好達101.01%，RSD為0.7%。

2.7精密度試驗取對照品溶液，按上述色譜條件，精密量取10μl，注入液相色譜儀，連續進樣5次，記錄色譜圖，結果RSD為0.1%，結果表明該方法進樣精密度良好。

2.8重復性試驗取本品10瓶，搖勻，精密量取供試品5ml，置200ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液，配制5份；取溶液配制項下的對照品溶液，按上述色譜條件，分別精密量取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以醋酸潑尼松龍峰面積計算含量，即得，結果RSD為0.3%，結果表明該方法重復性良好。

2.9穩定性試驗取供試品溶液，間隔1h進樣1次，連續進樣24h，記錄峰面積，RSD曾0.6%，表明穩定性良好。

2.10耐用性試驗取本品，更換液相色譜儀和色譜柱，依法測定，結果兩次峰面積僅相差0.2%，結果表明該方法耐用性良好。

2.11定量限精密量取線性項下的第1份溶液1ml，置200 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取該溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖 。結果表明醋酸潑尼松龍的定量限為4.821×10-4ng（SN=10）。

3樣品測定

取兩批次樣品，按上述方法與色譜條件測定，按外標法計算樣品中醋酸潑尼松龍的含量。2個批號（130611，13.613）的含量測定結果分別為102.48%，98.3%。

4討論

4.1現有醫院制劑檢驗方法醫院2005年批準的，且含量測定方法參照的是《中國藥典2005年版二部》中采用顯色再用紫外-可見分光光度法測定醋酸潑尼松龍的含量，操作繁瑣且易產生誤差，本文建立的方法簡單易行，用時短，所需試劑少，靈敏度高，結果準確。

4.2本制劑中醋酸潑尼松龍為非極性物質，而且在非極性溶劑中易降解，故制成水溶性基質的的混懸劑的形式用于臨床，制劑過程中切不可加入乙醇、乙酸乙酯等有機溶劑進行助溶，以避免醋酸潑尼松龍快速降解。

4.3混懸劑本身為非均相溶液，醋酸潑尼松龍在混懸劑中常沉降至瓶底，造成取樣與使用時混懸液上部液體中醋酸潑尼松龍濃度遠高于下部，給本次試驗帶來極大不便，后采取超聲振搖后再混勻取樣的方法才取得良好的檢驗結果。

4.4本制劑處方中混懸劑為羧甲基纖維素鈉，造成制劑粘稠度特別大，給取樣帶來了極大的困難，經過多次嘗試后均不能取得良好平行結果，后采用移液槍前進移液法[3]，才最終解決高粘稠液體取樣，最終結果平行完好一致。

4.5本方法色譜條件基本采用中華人民共和國藥典2010版中醋酸潑尼松龍含量測定項下的色譜條件與系統適用性試驗，但在實際試驗中考察原料藥時發現，原料藥中基本不存在醋酸氫化可的松干擾，再考慮到減少基層醫院藥品檢驗工作難度，故去掉\"醋酸潑尼松龍與醋酸醋酸氫化可的松分離度應不少于2.0\"此一項。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.國家藥品標準工作手冊[M].北京：中醫藥科技出版社，1999.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010版（二部）[M].北京：中醫藥科技出版社：2010:1125-1126，附錄194-195.

[3]高友中.研究可調移液器在理化檢驗中的應用[J].中國醫藥指南，2011，9（34）：303-304.

編輯/哈濤