摘要:目的通過原子吸收光譜法檢測全血、血漿和紅細胞中的鈣、鎂、銅、鐵、鋅五種微量元素,了解用該方法檢測的微量元素在3種樣本內的含量分布狀況。方法用原子吸收光譜法分別檢測5個人的全血、血漿和紅細胞中的微量元素,并對其結果進行統計分析。結果鈣主要存在于血漿中,鋅、鐵和鎂主要存在于紅細胞中,銅在3者間分布無顯著性差異,全血的鋅、銅和鎂約為全血和血漿之和的1/2。結論3種樣本中因紅細胞鈣和血漿鐵不能用該方法直接檢測,故不便于確定參考范圍而用全血檢測結果都有較好的臨床指導意義,適宜作為微量元素檢測分析的樣本。
關鍵詞:原子吸收光譜;微量元素;全血;細紅胞;血漿1資料與方法
1.1一般資料 隨機抽取5人的血液3~4 mL,注入肝素鈉抗凝管中混勻。
1.2儀器和試劑 北京博暉創新光電技術股份有限公司生產的BH5100型原子吸收光譜儀。試劑為該公司生產的BH5100型原子吸收光譜儀隨機附帶試劑BH5100稀釋液和標準液及質控品。嚴格按廠家操作說明書進行測樣。
1.3方法 將5份肝素鈉抗凝血充分混勻,從每管全血中取40 L加入BH5100稀釋液1.2 mL中,立即振蕩混勻備檢。為保證結果準確,每份全血稀釋2管取均值作為最終檢測結果。然后將5份全血以3 000 r/min離心10 rain,分別分離出各自的紅細胞和血漿,為保證紅細胞中不含有血漿中的微量元素,將分離出血漿后的紅細胞用生理鹽水離心洗滌5次,最后棄去洗滌液。將分離出的紅細胞和血漿進行與全血相同的預稀釋備檢。備檢樣本用BH5100型原子吸收光譜儀檢測鈣、鋅、銅、鎂、鐵5種微量元素,嚴格按規程操作,檢測時首先用標準液上機制訂標準曲線,要求曲線I>10.99方可;然后以樣本在儀器上的吸光度與曲線上標準液吸光度對比,可得出微量元素含量。
1.4評價標準 樣本測量時均同定值質控物一起測量,質控結果在±2SD范圍內,證明結果可靠性較好。
1.5統計學處理 組間比較采用t檢驗;顯著性水準?。害?0.05。
2結果
鐵、鋅和鎂主要存在于紅細胞中,全血中的鋅、鎂和銅微量元素含量約為血漿和紅細胞兩者之和的1/2。鈣在紅細胞中含量甚微,基本上用該方法檢測不出(P<0.01),因為鈣全部在血漿中,紅細胞中檢測不出,全血鈣含量約占血漿鈣的70%。全血鐵則占紅細胞內鐵的50%左,鐵在血漿中含量也檢測不出,鐵全部在紅細胞中。
3討論
原子吸收光譜法的優點是穩定性好、準確度和靈敏度都較高。分析結果幾乎不受火焰溫度變化的影響,因為這種方法測量的是火焰中的基態原子而不是激發態原子,由于大多數元素的最強共振線都<6000。原子吸收法中一般火焰溫度<3000 K。較低激發態的原子數與基態原子數的比值都很小,火焰中激發的原子數很少超過原子總數的1%,因此,當激發溫度改變時,假如激發原子數從1%變到1.1%,與此相對應的基態原子數由99%變到98.9%,對吸收強度的測量是可以忽略的。同樣,由于擇品組成的不同所引起激發溫度的改變,在一定程度上對分析結果的影響也不大。原子吸收光譜分析較穩定,準確度較高,靈敏度也高精密度通??蛇_1%左右。選擇性高,由于采用了空心陰極燈作為光源,發射出來的是各元素特有的共振線,且元素吸收線又是特征的,很少有兩個元素吸收同一波長的譜線,因此,很少受其他元素的干。操作簡單、快速、常常不需分離即可進行測定[3]。但對樣本的采集處理、檢測環境和操作人員能力的要求較高,故不論何種檢測方法只能針對特定的樣本而言其結果才具有較好的臨床參考價值[4]。
本組實驗結果表明,用該方法檢測血液3種樣本內的5種微量元素,各樣本間元素含量有較大差異,其中鐵全部在紅細胞的血紅蛋白中,因此全血鐵大大高于血漿鐵,而遠小于紅細胞鐵。另在血漿中用該方法檢測不出的原因是全血稀釋液對鐵其有影響,須用專門的血漿稀釋液進行稀釋[5],文獻記載人體血漿中的鐵波動很大(>20%),說明血漿鐵不適用于估計人體鐵的含量。
血漿中的鈣其含量和另兩組結果相比具有顯著性差異。因為血液中的鈣主要存在于血漿中,因此從理論上分析全血鈣的濃度約為血漿鈣的1/2左右,但其相關性較差。血漿鈣與其他兩組有較大差異的原因,應與血細胞壓積高低有一定作用,另外是否應用特殊方式處理紅細胞樣本對結果有更大的影響,目前尚不清楚。
銅在3者中的含量則較為均衡,3者間的結果比較無顯著性差異。血液中的銅主要存在于血漿中與銅蘭蛋白結合,因此評價人本銅含量應首選血漿標本,全血銅與血漿銅有很好的相關性,在一定場合可以替代血漿銅的測定。鋅是人體必需微元素具有重要的生理功能和臨床診療意義,紅細胞中的鋅含量比血漿鋅高5~10倍,全血鋅比血漿鋅高3~5倍,究竟哪種標本最適合反應鋅的體內含量尚未完全明確。
鎂50%存在于人體骨骼,40%存在于細胞內液中,細胞外液只占5%因此全血鎂的含量比血漿鎂高,本實驗分析數據表明,全血鎂與血漿鎂的相關性最好。但細胞內鎂與細胞外鎂的生理功能并不相同,因此臨床應根據需要選擇不同的標本進行。
全血中的鋅、鎂和銅微量元素結果約為血漿和紅細胞兩者之和的1/2,原因是血液是由細胞和血漿組成的混懸液,其中細胞成分占45%左右,血漿占55%左右[6]。
綜上所述,用原子吸收光譜法直接檢測這3種樣本的微量元素時,血漿和紅細胞鐵、鈣元素不能用該法直接測出,而全血樣本則具有5種元素分布較為均衡,能較好地反映人體內的微量元素含量,也有利于建立臨床使用參考體系。所以在工作中,要選用更準更好的方法,對具有較高臨床指導意義的樣本進行檢測,以做出最準確最有意義的結果,從而有力保障臨床患者的治療和公眾的健康。
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