豬圓環(huán)病毒與豬丹毒、豬巴氏桿菌病混合感染的診治

2015-01-03 05:39:12劉濤王瑞溫新杰

中國(guó)動(dòng)物保健 2015年3期

劉濤，王瑞，溫新杰

（1.信陽農(nóng)林學(xué)院河南信陽464000；2.確山縣畜牧局河南駐馬店463200）

劉濤1，王瑞1，溫新杰2

（1.信陽農(nóng)林學(xué)院河南信陽464000；2.確山縣畜牧局河南駐馬店463200）

通過臨床癥狀、病理剖檢及實(shí)驗(yàn)室診斷工作，確定一例由豬圓環(huán)病毒、豬丹毒、豬巴氏桿菌混合感染病例，并提出針對(duì)性的控制方案。

圓環(huán)病毒；豬丹毒；豬巴氏桿菌；PCR

2015年1月，駐馬店市確山縣某豬場(chǎng)持續(xù)發(fā)生以發(fā)熱、體表出現(xiàn)彌漫性皮膚出血為主要特征的疫情，豬場(chǎng)按按常規(guī)解熱及抗生素治療，病情未得到控制，最后通過實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原檢測(cè)，確診為豬圓環(huán)病毒、豬丹毒、豬巴氏桿菌病混合感染，經(jīng)篩選敏感藥物以采取針對(duì)性的綜合防控措施控制了疫情。

1 發(fā)病情況

2015年1月初，駐馬店確山縣某規(guī)?；i場(chǎng)育肥豬持續(xù)發(fā)生以體溫升高、呼吸困難、體表出現(xiàn)彌漫性出血為特征的疫病，豬場(chǎng)先后按多家飼料公司、獸藥廠技術(shù)員推薦的治療藥物和控制方案進(jìn)行處理,用過治療呼吸道疾病的氟苯尼考、潔霉素、黃芪多糖等藥物，用藥后效果不明顯，該病發(fā)病率達(dá)10%以上，病死率達(dá)90%。

2 臨床表現(xiàn)

病豬精神沉郁，體溫升高達(dá)40～41.5℃，呼吸困難，喘氣明顯，耳根、頸部、背部，胸前、腹壁和四肢內(nèi)側(cè)等處，出現(xiàn)鮮紅色充血區(qū)，病程長(zhǎng)者中心部位形成黑褐色痂皮（見圖1、圖2）。

3 剖檢變化

淋巴結(jié)腫大，尤其是腹股溝淋巴結(jié)腫大明顯，切面出血或灰白色；肺臟膨脹，質(zhì)地實(shí)變，表面有灰白色斑塊。腎臟腫大變形，呈土黃色，被膜剝離后可見腎表面有暗紅色出血點(diǎn)（見圖3）。肝臟腫大黃染，膽囊充盈（見圖4）。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌學(xué)診斷

4.1.1 直接涂片觀察

無菌取病豬的脾、肺、腎臟、淋巴結(jié)、直接涂片,經(jīng)革蘭氏染色，鏡下可見有革蘭氏陽性細(xì)長(zhǎng)桿菌和兩端鈍圓的短桿菌。

4.1.2 細(xì)菌分離鑒定

無菌取剖檢病豬的脾、肺和腎接種于鮮血瓊脂平板在37℃培養(yǎng)24 h后在平板上可見到光滑、圓形，邊緣整齊的白色菌落，一種在血平板上不溶血，另一種有不完全溶血現(xiàn)象（見圖5、圖7）。經(jīng)染色鏡檢后可見革蘭氏染色陰性細(xì)小桿菌和兩端鈍圓球桿菌，經(jīng)生化鑒定為丹毒絲菌和巴氏桿菌[1-2]（見圖6、圖8）。

4.1.3 動(dòng)物試驗(yàn)

取脾臟、肝臟、腎臟等臟器，用生理鹽水制成1∶10懸液，以0.2 mL經(jīng)皮下接種小鼠2只，在接種后3 d，試驗(yàn)小鼠2只均發(fā)生死亡。從其心血和腎臟中檢出紅斑丹毒絲菌和巴氏桿菌。

4.2 藥敏試驗(yàn)

將兩種細(xì)菌液分別涂布于巧克力瓊脂平板，以紙片法進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，藥物包括氟苯尼考、丁胺卡那霉素、紅霉素、頭孢噻呋鈉、阿莫西林、氨芐青霉素、卡那霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、恩諾沙星等13種。結(jié)果表明，丹毒絲菌對(duì)恩諾沙星、阿莫西林高度敏感，巴氏桿菌對(duì)阿莫西林高度敏感。

4.3 病毒的檢測(cè)

4.3.1 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù)GenBank已發(fā)表的序列，應(yīng)用Primer-Premier5.0軟件設(shè)計(jì)豬圓環(huán)病毒引物。上游引物：5'-GTTATGGTATGGCGGGAGG-3'；下游引物：5'-CCGCTCTGTGCCCTTTGA-3'。引物擴(kuò)增特異性目的片段，出現(xiàn)189 bp大小條帶判斷為PCV2陽性。

4.3.2 DNA的提取

按基因組DNA提取試劑盒和純化試劑盒說明書進(jìn)行病料組織中DNA提取及純化。

4.3.3 PCV2檢測(cè)方法的建立

2×MasterMix 12.5 μL，PRV上游和下游引物各2 μL，DNA模板8.5 μL。95℃預(yù)變性5 min，然后95℃變性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)，72℃延伸10 min。

4.3.4 PCR檢測(cè)結(jié)果（見圖9）

圖9 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳

根據(jù)以上臨診斷癥狀、剖檢病變和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，綜合判定該豬場(chǎng)發(fā)病是由豬圓環(huán)病毒2型和豬丹毒及豬巴氏桿菌混合感染引起。

5 控制措施

1）發(fā)病豬只，建議使用阿莫西林和氟尼辛葡甲胺注射液，大群添加阿莫西林（克拉維酸鉀）和恩諾沙星粉劑。對(duì)病情較重的豬只可用5%葡萄糖加VC以及地塞米松靜脈注射[3]。

2）平時(shí)應(yīng)堅(jiān)持定期對(duì)圈舍四周、地面、用具進(jìn)行消毒。

3）做好保溫與通風(fēng)干燥工作。

4）做好豬群圓環(huán)疫苗免疫工作。

6 小結(jié)

我國(guó)許多養(yǎng)豬場(chǎng)環(huán)境污染嚴(yán)重，豬病非常復(fù)雜，以多病原混合感染和繼發(fā)感染為主，豬場(chǎng)濫用抗生素導(dǎo)致許多病原性細(xì)菌已產(chǎn)生廣泛耐藥性，發(fā)病后用藥效果不理想。診斷豬病要結(jié)合流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢病變以及實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行綜合判定才能確診，否則只會(huì)誤診和漏診，導(dǎo)致延誤治療時(shí)機(jī)和加大損失。本次疫情通過全面診斷尤其是借助實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)，判斷發(fā)病原因?yàn)樨i圓環(huán)病毒Ⅱ型和豬丹毒及豬巴氏桿菌混合感染引起。

我國(guó)由郎洪武等于2001年首次報(bào)道從豬群中分離到了PCV-2以來，近幾年來由于圓環(huán)病毒在豬場(chǎng)陽性感染率的持續(xù)升高，導(dǎo)致一些生產(chǎn)條件一般，同時(shí)疫苗與飼料更迭頻繁的豬場(chǎng)內(nèi)部豬病發(fā)病復(fù)雜化。如同此次病例，由于豬群免疫力下降，內(nèi)源性細(xì)菌—巴氏桿菌通過釋放皮膚壞死毒素加之丹毒絲菌產(chǎn)生大量的神經(jīng)氨酸酶，引起毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞膜通透性升高，直接損傷血管內(nèi)皮，最終在臨床上表現(xiàn)出皮膚彌漫性出血征。

周緒斌等于2009年報(bào)道了中國(guó)10個(gè)省市36個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)豬丹毒血清流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)母豬胎次越高陽性率越高[4]。由于受近幾年生豬行情下滑影響，中小規(guī)模豬場(chǎng)母豬淘汰速度放緩，這為丹毒絲菌等病原體在種豬群中滋生創(chuàng)造了條件。

豬病的預(yù)防是一個(gè)永恒的話題，只有真正地尊重生豬生產(chǎn)規(guī)律，創(chuàng)造有利條件提高豬只自身的免疫力水平，才能在層出不窮的豬病面前，做到從容不迫，而不是被動(dòng)應(yīng)付?！觯ň庉嫞豪钣甏龋?/p>

[1] 白文彬,于康振.動(dòng)物傳染病診斷學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社. 2000,462-467.

[2] 唐先春,吳斌,索緒峰,等.豬多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及生物學(xué)特性研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào).2005,36(06):590-595.

[3] Barbara E.Straw,Jeffery J.Zimmerman.[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社.2011,709-721.

[4] 周緒斌,丹尼,李聰,等.豬丹毒-古老的傳染病是否從中國(guó)規(guī)?；i場(chǎng)消失了？[J].今日養(yǎng)豬業(yè).2009,5:22-24.