眩暈定方對PCIV氣虛血瘀證家兔腦干前庭神經功能的影響

劉 芳，劉春華，伍大華，李強翔，顏 旭，鄧浩慶

·基礎醫學論著/研究·

眩暈定方對PCIV氣虛血瘀證家兔腦干前庭神經功能的影響

劉 芳1，劉春華2，伍大華2，李強翔3，顏 旭2，鄧浩慶4

目的 構建后循環缺血性眩暈(PCIV)氣虛血瘀證家兔模型，觀察眩暈定方對循環缺血性眩暈的影響，并初步探討其可能的作用機制。方法 從40只家兔中隨機選取8只設為空白對照組(KBDZ組)，其余32只采用“饑餓+限量高脂飼料+頸椎旁硬化劑注射+旋轉刺激”多因素方法造模。在造模進行至第4周末，選擇符合模型標準的32只隨機分為模型對照組(MXDZ組)、眩暈定高劑量組(XYDG組)、眩暈定中劑量組(XYDZ組)、養血清腦顆粒組(YXQN組)，每組各8只。各組分別給予相應藥物灌胃干預2周，實驗結束時通過透射電鏡觀測前庭神經核組織超微病理的改變，采用誘發電位儀觀測腦干聽覺誘發電位(BAEP)的改變。結果 電鏡下觀察前庭神經核組織病變嚴重程度依次為：MXDZ組>YXQN組≥XYDZ組>XYDG組>KBDZ組。藥物干預后，與MXDZ組波峰潛伏期比較，XYDG組Ⅰ波、Ⅴ波差異具有統計學意義(P<0．01)，XYDZ組、XYDG組Ⅰ～Ⅴ波IPL差異有統計學意義(P<0．05或P<0．01)；與YXQN組比較，XYDG組、XYDZ組Ⅴ波差異具有統計學意義(P<0．05)，Ⅰ～Ⅴ波IPL差異有統計學意義(P<0．05或P<0．01)。結論 眩暈定方可恢復腦干、前庭神經功能，其作用機制可能與改善腦干聽覺誘發電位有關，從而發揮對前庭神經核組織的保護作用。

后循環缺血性眩暈；氣虛血瘀；眩暈定方；腦干；前庭神經核

機體平衡依賴于視覺、本體覺和前庭系統相互作用及周圍和中樞神經系統之間復雜的相互聯系、整合、調制而維持[1]。后循環缺血性眩暈(PCIV)主要是由各種原因引起內耳、小腦、腦干等區域供血降低，導致對缺血敏感的前庭神經系統功能障礙，常伴有小腦、腦干等神經定位體征。長期反復發作則神經元異常改變持續存在，即使間隙期也可不恢復[2]。PCIV的現代醫學治療主要采用藥物治療、外科手術治療、血管內介入治療，但上述方法均存在藥物不良、毒副作用大、手術創傷大、并發癥高等缺點。本課題組研究發現，中藥眩暈定方能有效增加血管性眩暈氣虛血瘀證模型家兔的腦血流量，降低血液黏度[3]。

1 材料與方法

1．1 實驗材料

1．1．1 實驗動物 健康成年新西蘭白兔，40只，雌雄各半，清潔級，體重(2．0±0．3)kg，兔齡(3～4)月個。由湖南中醫藥大學實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK(湘)2009-0012；飼養環境為室溫10～25℃，濕度65%～70%。

1．1．2 藥物與試劑 眩暈定方濃縮液由黃芪、當歸、丹參等11味藥組成，由湖南省中醫藥研究院附屬醫院制劑室完成。養血清腦顆粒：天津天士力制藥股份有限公司(批號：120923)，每袋4 g，15袋/盒。灌胃前，將適量顆粒用雙蒸水溶解成 1g/mL溶液。

1．1．3 實驗器材 腦干聽覺誘發電位儀(MEB-9200/9300)，日本光電公司；可調速眩暈產生儀，自行設計，湖南航空航天機械加工廠制作，旋轉速度0～150 r/min；逃避刺激反射訓練箱，自行設計，湖南航空航天機械加工廠制作，底板為金屬板，通電后可因導電而產生麻痛樣電刺激，在籠內距離底面25 cm處安裝高臺，供動物逃避刺激；HT7700型透射電鏡，日立高新技術公司。

1．2 模型制備 正常對照組自由飲水，常量進食普通飼料；造模組自由進水、限量普通飼料+限量高脂飼料喂食。氣虛血瘀型PCIV動物模型采用“饑餓+限量高脂飼料+頸椎旁硬化劑注射+旋轉刺激”多因素方法造模[4，5]。將家兔放入自制的旋轉儀中固定后，以90 r/min速度旋轉，誘發動物產生眩暈癥狀。造模成功后改以普通飼料喂養。

1．3 分組與干預措施 從40只家兔中隨機選取8只設為空白對照組(KBDZ組)，其余32只造模。在造模進行至第4周末分組，隨機分為模型對照組(MXDZ)、眩暈定方高劑量組(XYDG組)、眩暈定方中劑量組(XYDZ組)、養血清腦顆粒組(YXQN組)，每組各8只。XYDZ組予眩暈定濃縮液、YXQN組予養血清腦顆粒懸液，MXDZ組予安慰劑(雙蒸水)，均灌胃干預。各組灌以同等容量的藥液或雙蒸水，連續灌胃2周。藥物劑量換算方法按照劑量-體表面積換算方法，根據D1/D2=R1/R2計算，各組均以人的藥物常用量換算為動物用量。眩暈定方中、高劑量為原生藥7．88 g/(kg·d)、15．32 g/(kg·d)，養血清腦中劑量為0．575 g/(kg·d)。

1．4 檢測項目與方法

1．4．1 前庭神經核透射電鏡病理學檢測 實驗結束，沿家兔后頸部正中線將皮毛向兩側剪開，向上剪至頂部，切開頸部肌肉，暴露頸椎，與第7頸椎處用鉗子剪斷頭部，分離頂骨和頂間骨，取出腦組織，于小腦絨球附近確定前庭神經蝸神經位置，向上探尋至腦干，于延髓背外側處切除表面白質，分離出內部灰色前庭神經核組織約2 mm×2 mm大小，立即置入2．5%戊二醛固定，包埋切片，用醋酸鈾、硝酸鉛雙重染色，用日產HT7700型透射電鏡觀察、照片。

1．4．2 腦干聽覺誘發電位(BAEP)的描記與分析方法 參照文獻方法[6，7]，在屏蔽室內進行。采用誘發電位儀于造模前、后及藥物干預后各測定1次。測量各波的潛伏期(PL)、波峰間潛伏期(IPL)，用誘發電位記錄儀記下每次測試的BAEP。

2 結 果

2．1 實驗動物存活情況 KBDZ組因灌胃操作不當死亡1只，實驗結束時有7只納入統計；XYDG組因注射利多卡因不當致死1只，YXQN組灌胃操作不當致死1只。其余各組均正常。

2．2 各組家兔前庭神經核組織透射電鏡病理學檢測 所有電鏡圖片的放大比例為1∶40 000。KBDZ組實驗動物可見胞漿內的正常線粒體，極少神經纖維分層水腫，神經元前庭神經核與胞漿正常。造模后實驗動物前庭神經核組織的病變多見神經外周組織、胞漿水腫、線粒體病變(多為水腫病變)、神經纖維(即有髓神經纖維的髓鞘)分層水腫脫失；多見血管受外周組織的壓迫、不規則收縮、管腔狹窄，甚至滲血；少見神經核核膜不完整、神經元固縮壞死，罕見神經核水腫。經眩暈定方和養血清腦顆粒干預后，前庭神經核組織的病變有不同程度的改變，病變嚴重程度依次為：MXDZ組>YXQN組≥XYDZ組>XYDG組>KBDZ組。MXDZ組：髓鞘分層及軸突內線粒體水腫；血管外周水腫、不規則收縮，血管內皮細胞空泡變性；神經元周圍水腫并滲血。XYDG組：神經組織水腫，神經元固縮壞死，血管外周水腫，血管腔狹小；神經元胞漿水腫，核膜不清，出現裸核；正常線粒體與水腫線粒體，髓鞘分層、水腫。XYDZ組：神經組織、血管腔、神經元、線粒體及髓鞘改變同XYDG組。YXQN組：神經組織水腫，神經元固縮壞死，血管外周水腫，血管腔狹小；血管外周水腫，血管不規則收縮，血管內皮細胞空泡變性；髓神經纖維的軸索水腫，髓鞘分層、脫失。

2．3 各組家兔腦干聽覺誘發電位分析 與KBDZ組比較，造模各組Ⅰ波、Ⅴ波、Ⅰ～Ⅴ波差異有統計學意義(P<0．05～P<0．01)。MXDZ組、XYDF組、XYDG組、XYDZ組及YXQN組各組比較Ⅰ波、Ⅲ波、Ⅴ波差異均無統計學意義(P>0．05)。藥物干預后，與MXDZ組波峰潛伏期比較，XYDG組Ⅰ波、Ⅴ波差異具有統計學意義(P<0．01)，XYDZ組、XYDG組Ⅰ～Ⅴ波IPL差異有統計學意義(P<0．05～P<0．01)；與YXQN組比較，XYDG組、XYDZ組Ⅴ波、Ⅰ～Ⅴ波IPL差異有統計學意義(P<0．05～P<0．01)。詳見表1。

組別n時間 PL(t/ms) Ⅰ波Ⅲ波Ⅴ波 IPL(ms) Ⅰ～Ⅲ波Ⅲ～Ⅴ波Ⅰ～Ⅴ波KBDZ組7干預前0.99±0.052.36±0.074.56±0.161.36±0.052.20±0.163.57±0.187干預后1.00±0.072.79±0.425.61±0.371.43±0.032.21±0.424.22±0.40MXDZ組8干預前1.28±0.341)3.00±0.755.73±0.601)1.27±0.183.04±0.345.41±0.332)8干預后1.25±0.172.76±0.365.70±0.381.56±0.422.93±0.474.50±0.45XYDG組7干預前0.99±0.052)2.36±0.074.56±0.161)1.63±0.452.95±0.754.48±0.542)7干預后1.22±0.094)2.58±0.095.00±0.194)5)1.36±0.062.40±0.163.76±0.194)6)XYDZ組8干預前1.27±0.282)2.80±0.615.75±0.561)1.84±0.702.46±0.674.30±0.472)8干預后1.20±0.122.67±0.135.04±0.145)1.47±0.162.37±0.183.84±0.203)YXQN組7干預前1.40±0.332)3.25±0.845.71±0.531)1.61±0.452.86±0.514.48±0.472)5)7干預后1.27±0.183.04±0.345.41±0.331.76±0.532.37±0.504.14±0.36 與KBDZ組比較,1)P<0.05,2)P<0.01;與MXDZ組比較,3)P<0.05,4)P<0.01;與YXQN組比較,5)P<0.05,6)P<0.01。

3 討 論

后循環又稱椎-基底動脈系統，由椎動脈、基底動脈和大腦后動脈組成，主要供血給腦干、小腦、丘腦、枕葉、部分顳葉及上段脊髓。其血管走行及分支生理變異大，約60%供應腦干的深穿支血管較細，且很多分支均為終末動脈，故后循環很容易受到血流動力學和血管腔變化的影響而發生缺血性改變[8，9]。雙椎動脈及基底動脈血流狀態持久反復的改變必將引起所供腦神經細胞的電生理發生變化[10]。BEAP是評價腦干功能理想的電生理檢查手段。BEAP各波的發生源與椎-基底動脈系統供血區相吻合。其中Ⅰ波、Ⅲ波、Ⅴ波分別反映聽神經近端、腦橋的上橄欖核、中腦下丘核的變化；Ⅰ～Ⅲ波波峰間潛伏期(IPL)為外周聽神經至低位腦干的傳導時間，可反映聽神經及橋腦下端的病變；Ⅲ～Ⅴ波IPL反映腦橋上方與中腦部分的傳導時間，反映橋腦中上部的病變；Ⅰ～Ⅴ波IPL代表外周聽神經至整個腦干中樞傳導時間。后循環缺血引起腦干缺血，導致神經元受損，將引起BAEP各波PL(潛伏期)及IPL發生改變。即使血供已恢復， BAEP仍可以檢測出神經元電活動的改變，故能為PCI患者的腦干功能提供客觀資料，在PCI治療前后BAEP改變可敏感地反映腦神經功能的轉歸，對指導臨床治療及評價預后等有重要意義[10]。臨床研究表明[11]，BAEP 能靈敏地檢測出后循環缺血患者的神經電生理異常，其異常程度可部分反應病情的嚴重程度，對PCI的診斷和病情評估，提供重要的參考。

前庭系統主要由椎-基底動脈系統供血，內耳迷路和前庭神經核的供血，是機體維持平衡、感知機體與周圍環境相關的主要器官。因為該血管均為終末動脈，一旦發生病變，其側支循環建立較慢，且前庭神經核是腦干中最大的神經核，位置較表淺，對缺血缺氧十分敏感，較易受到損傷而引發眩暈[12，13]。

眩暈定方來源于王凈凈教授的經驗方。王教授認為，本病以氣虛血瘀、腦失所養為主要病機，故用益氣活血通絡為法擬定本方。方中黃芪功專氣分，擅補元陽，能培補脾肺之氣，又性溫而能升陽，使清氣上達，令氣旺血行，充養髓海；葛根性味輕清，亦有升舉陽氣作用；川芎、歸尾味辛性溫，丹皮、丹參味辛微寒，均有活血通絡、養血安神的功用，且寒溫配合，有調和陰陽之妙；配以地龍熄風通絡，山楂活血助運。全方配合，共達益氣升清、活血化瘀、熄風定眩之功效。既往實驗研究顯示，該方能有效增加血管性眩暈氣虛血瘀證模型家兔的腦血流量，降低血液黏度[14]。

本研究證實，PCIV氣虛血瘀證家兔及通過眩暈定方干預后，鏡下觀察前庭神經核組織病變嚴重程度依次為：MXDZ組>YXQN組≥XYDZ組>XYDG組>KBDZ組；KBDZ組與造模后的各組比較Ⅰ波、Ⅴ波差異有統計學意義(P<0．05，P<0．01)；而造模后，MXDZ組、XYDZ組及YXQN組各組比較Ⅰ波、Ⅲ波、Ⅴ波差異均無統計學意義(P>0．05)。從藥物干預前后家兔左耳BAEP的主要指標檢測結果，可以發現眩暈定方及養血清腦顆粒均可以不同程度地縮短模型家兔左耳BAEP的PL與IPL，提示眩暈定方能改善模型家兔的腦干聽覺通路功能障礙。

結合前期研究[15，16]及本實驗研究結果，眩暈定可能通過增加血管性眩暈氣虛血瘀證模型家兔的腦血流量，降低血液黏度，發揮對前庭神經核組織的保護作用，改善模型家兔的腦干聽覺誘發電位，恢復腦干前庭神經功能。眩暈定方的適應證范圍可以擴大至慢性腦供血不足及其并發癥，值得在今后的研究中繼續探討。中醫在防治眩暈方面具有獨特優勢，采用中醫藥標本同治的方法防治老年后循環缺血性眩暈有著廣泛的前景。

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(本文編輯 王雅潔)

Effects of Xuanyunding Decoction on the Brain Stem Vestibular Function in Rabbits with Posterior Circulatiory Ischemia Vertigo and Syndrome of Qi Deficiency and Blood Stasis

Liu Fang，Liu Chunhua，Wu Dahua，Li Qiangxiang，Yan Xu，Deng Haoqing

Hunan Institute of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410006，Hunan，China Corresponding Author：Liu Chunhua

Objective To observe effect of Xuanyunding decoction(XYDD) on brain stem vestibular function in rabbits with posterior circulation ischemia vertigo(PCIV)and syndrome of qi deficiency and blood stasis，and to explore the possible mechanism．Methods Methods Forty rabbits were randomly divided into four groups．Eight rabbits was in blank control group，and the others were modeled with the compound method of starvation，high lipid feedstuff，injection of sclerosing agent beside cervical vertebra and rotation．After four weeks，24 rabbits were randomly divided into three groups:Model control group，XYDD high dose group，XYDD medium dose group and Yangxue Qingnao granule(YQG) group，8 cases in each group，with two weeks intervention．The histological change of vestibular nucleus was observed by transmission electron microscope，and brainstem auditory evoked potential(BAEP) was also determined．Results The severity of histological change was followed by model control group， YQG group，XYDD medium dose group，XYDD high dose group，blank control group in order．After intervention，there was statistic significance in preclinical wave crest of raveⅠand rave Ⅴ between model control group and XYDD high dose group(P<0．01)．There was statistic significance in aveⅠ to V interpeak latency(IPL) between model control group and XYDD high or medium dose group(P<0．05 orP<0．01)．The differences were statically significant in waveⅤ and waveⅠ to V IPL between YQG group and XYDD high or medium dose group(P<0．05 orP<0．01)． Conclusion XYDD may improve the function of brain stem and vestibule by protecting vestibular nucleus and brainstem auditory evoked potential in rabbits with PCIV and syndrome of qi deficiency and blood stasis．

posterior circulation ischemia vertigo;Xuanyunding decoction;qi deficiency and blood stasis syndrome;brain stem;vestibular

湖南省自然科學基金資助項目(No.12JJ3090)；湖南省中醫藥科研計劃資助項目(No.2012146)

1．湖南省中醫藥研究院(長沙 410006)；2．湖南省中醫藥研究院；3．湖南省馬王堆醫院；4 湖南中醫藥大學

劉春華，E-mail：amy123020063@126．com

R743 R289

A

10．3969/j．issn．1672-1349．2015．11．008

1672-1349(2015)11-1270-04

2015-03-10)