胃腸間質瘤的免疫組化及基因突變分析

劉春樣，陳劼，李惠，王劍蓉

南京中醫藥大學附屬醫院江蘇省中醫院病理科，江蘇南京 210029

胃腸間質瘤的免疫組化及基因突變分析

劉春樣，陳劼，李惠，王劍蓉

南京中醫藥大學附屬醫院江蘇省中醫院病理科，江蘇南京 210029

目的探討胃腸間質瘤的免疫表型及c-kit和血小板源性生長受體α（PDGFRA）基因突變狀態。方法應用免疫組化SP法檢測110例GIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA和S100的表達情況，應用直接測序法檢測8例 GIST中c-kit及PDGFRA基因的突變狀態。結果110例GIST中Dog-1、CD117、CD34、SMA、S100的陽性率分別為92.7%、93.6%、79.1%、44.5%、8.2%。8例GIST中c-kit突變率75%，PDGFRA突變率100%。結論免疫組化可區分大部分GIST病例，c-kit及PDGFRA突變檢測對于Dog-1、CD117陰性病例有重要的鑒別診斷價值，并對靶向藥物的應用有重要意義。

胃腸間質瘤；免疫組化；c-kit；血小板源性生長受體α基因

胃腸間質瘤（gastrointestinal stromal tumors，GISTs）是消化道最常見的間葉源性腫瘤，組織學上由梭形細胞、上皮樣細胞、偶或多形性細胞排列成束狀或彌漫狀，由突變的c-kit或PDGFRA基因驅動[1-2]，可見于消化道的任何位置。過去，多數GISTs被診斷為平滑肌或神經源性腫瘤,1983年Mazur等首次提出GISTs的概念[3]。目前，GISTs的診斷依賴于結合組織形態學、CD117和DOG1免疫組化檢測以及c-kit和PDGFRA基因突變的檢測。該研究回顧性分析 2013年1月—2015年1月收集的南京中醫藥大學附屬醫院的110例GISTs的臨床病理特點，并運用免疫組化方法檢測Dog-1、CD117、CD34、SMA、S100的表達，其中8例包含c-kit、PDGFRA基因突變檢測結果，探討免疫組化結合基因檢測對GISTs的診療價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南京中醫藥大學附屬醫院自2013年1月—2015年1月經手術或內鏡下切除的資料完整、診斷明確的原發性GISTs患者組織標本110例。

1.2 免疫組化檢測

所有標本均經10%甲醛固定，常規石蠟包埋，切片。免疫組化采用SP兩步法，試劑均購自福州邁新生物技術開發有限公司。參照產品說明書進行實驗，常規設置陽性和陰性對照。結果判定：陽性表達部位定位準確，Dog-1、CD117、CD34陽性細胞數平均≥10%為陽性。

1.3 基因突變檢測

按照試劑盒（OMEGA，USA）說明提取石蠟組織中的基因組DNA，運用合適的引物PCR(聚合酶鏈式反應)擴增c-kit基因外顯子9、11、13、17和PDGFRA基因外顯子12、18。PCR產物經3%瓊脂糖凝膠電泳確定后，用ABI 3500測序儀行序列分析。應用SeqScape v2.7軟件判斷基因突變情況。

2 結果

2.1 臨床及病理特征

110例患者中，男56例，女54例。年齡22～89歲，中位年齡59歲。腫瘤發生部位：胃74例（67.3%），小腸21例（19.1%），結直腸6例（5.5%），食管6例（5.5%），胃腸外（腹膜后、盆腔）3例（2.7%）。根據文獻[4]將腫瘤行危險度分級：極低組47例（42.7%），低組25例（22.7%），中等組10例（9.1%），高組28例（25.5%）。腫塊最大直徑范圍0.3～20 cm，平均直徑4.6 cm。110例患者中梭形細胞型92例（83.6%），上皮樣型7例（6.4%），混合細胞型11例（10%）。

2.2 免疫組化結果

110例中CD117、Dog-1、CD34、SMA、S100的陽性例數分別為 102（92.7%）、103（93.6%）、87（79.1%）、49（44.5%）、9（8.2%）（表1）。CD117、Dog-1、CD34大部分為彌漫性表達。8例CD117陰性病例中，7例Dog-1陽性。SMA、S100大部分為局部或局灶陽性。

2.3 基因檢測結果

8例GIST（中等風險1例，高風險7例；胃4例，小腸3例，直腸1例）行c-kit、PDGFRA基因突變檢測，總體突變率100%（8/8）。其中c-kit突變率75%，PDGFRA突變率100%（表2）。c-kit突變結果提示4例應用伊馬替尼可能有積極療效，2例可能產生耐藥或敏感性降低，2例療效不明確。PDGFRA檢測結果對伊馬替尼療效預測尚需要進一步臨床觀察。8例GIST中，6例CD117陽性。其中一例CD117、Dog-1雙陰性，c-kit第9外顯子插入突變。

表2 基因突變情況[n（%）]

表1 GISTs的免疫組化表達（%）

3 討論

GISTs是消化道最常見的間葉源性腫瘤，在中國，估計年發病率約為10-20/100萬，其中10%～30%為惡性。本研究中，中高等風險組占34.6%。GIST可發生于消化道任何部位，部分患者可發生于消化道外[5]。該研究中，胃部發生率最高（67.3%），小腸其次（19.1%）。

GISTs具有非定向分化特征，因不同瘤體的組織分化程度存在差異，故其表現出的形態學以及組織學特征也不同。該研究中梭形細胞型占83.6%，上皮樣型占6.4%，混合細胞型占10%。在組織學上，GISTs與其他間葉源性腫瘤相似，難以與平滑肌腫瘤、神經纖維瘤等鑒別。免疫組化診斷以往依賴CD117、CD34的表達。近年來，隨著研究的進展，DOG1已成為GISTs診斷的重要分子標記物[6]。在該研究的110個病例中，CD117、Dog-1、CD34的陽性率分別為92.7%、93.6%、79.1%，在8例CD117陰性的病例中，7例Dog-1陽性。CD117、Dog-1、CD34三者聯合應用可區分出絕大部分的GISTs。

國內學者研究[7-8]顯示，伊馬替尼輔助治療在中高危GIST患者中獲益。因此，中高風險病人應常規行c-kit、PDGFRA基因檢測以篩選是否適用靶向治療。該組38例中高風險病例中有21.1%行基因檢測，c-kit突變率 75%，PDGFRA突變率100%。一例CD117、Dog-1雙陰性GIST存在c-kit第9外顯子突變。C-kit突變結果提示4例應用靶向藥物可能有積極療效，1例可能產生耐藥，1例敏感性降低，2例野生型療效不明確。PDGFRA突變對伊馬替尼療效預測尚需要臨床進一步觀察積累。

GISTs的發病機制、生物學行為復雜，臨床診療存在難點。常規染色聯合免疫組化可提高GISTs的診斷準確率，在免疫組化無法確診的情況下，行c-kit、PDGFRA基因檢測有助于GISTs的診斷，并為靶向治療提供參考。

[1]Hirota S,IsozakiK，Moriyama Y，etal.Gain-of-functionmutationsof c-kit in human gastrointestinalstromal tumors[J].Science，1998，279(5350):577-80.

[2]Heinrich MC，Corless CL，Amette Duensing，et al.PDGFRA activatingmut ationsin gastrointestinalstromal tumors[J].Science，2003（299）:708-710.

[3]Mazur MT,Brent Clark H.Gastric stromal tumors：Reappraisal of hist ogenesis[J].Am JSurg Pathol，1983，7(6):507-520.

[4]CSCO胃腸間質瘤專家委員會.中國胃腸間質瘤診斷治療專家共識：2011年版[J].臨床腫瘤學雜志，2011,16(9):836-844.

[5]陳吉添．胃腸道間質瘤72例臨床病理及免疫組化分析[J].廣西醫學，2012，34(12):1687-1689．

[6]Novelli M,Rossi S,Rodriguei-justo M,et al.DOG1 and CD117 are the antibodies of choice in the diagnosis ofgastrointestinal stromal tumours[J]. Histopathology，2010，57（12）：259-270.

[7]Zhan WH，China Gastrointestinal Cooperative Gro.Efficacy and safety of adjuvant post-surgical therapy with imatinib in patients with high risk of relapsing GIST[J].ASCOMeeting Abstracts，2007（25）:10045．

[8]Li J，J.F.Gong，A.W，wu，et al．Post-operative imatinib in patients with intermediateorhigh riskgastrointestinalstromaltumour[J].Euro JSurOncol，2011，37(4):319-324．

Immunohistochem istry Features and M utation Status of GISTs

LIU Chun-yang，CHEN Jie，LIHui，WANG Jian-rong
Department of pathology,Affiliated Hospital of Nanjing university of TCM,Jiangsu Province Hospital of TCM,Nanjing,Jiangsu Province,210029 China

ObjectiveTo investigate the immunohistochem istry (IHC)features and genemutation status of c-kit and PDGFRA of GIST.M ethodsThe expression of DOG1,CD117,CD34,SMA and S-100 was detected by immunohistochemicalmethod in 110 cases of GIST.Genemutation status of c-kit and PDGFRA were detected by direct sequencing in 8 cases of GIST.Resu ltsIn the patients of 110,the positive rates of DOG1,CD117,CD34,SMA and S-100 were 92.7%,93.6%,9.1%,44.5%and 8.2%respectively.Gene mutation rates of c-kit and PDGFRA was 75%and 100%respectively in 8 cases.ConclusionIHC can distinguish most GISTs cases,mutation test of c-kit and PDGFRA is important for differential diagnosis in DOG1 and CD117 negative patients,and have significance to guide the application of targeted drug.

Gastrointestinal stromal tumors;Immunohistochem istry;C-kit;PDGFRA

R735

A

1674-0742（2015）07（b）－0008-02

2015-04-17）

劉春樣（1985.10-），女，江蘇宿遷人，碩士，住院醫師，研究方向：腫瘤病理及分子病理。

王劍蓉（1974.6-），女，江蘇高郵人，碩士，副主任醫師，研究方向：消化道病理及分子病理。