基于ITS2 條形碼序列對新型“香料”毒品植物成分的研究

楊雪瑩，曹海丹，裴 黎，徐 鵬

（1.公安部物證鑒定中心 法醫遺傳學公安部重點實驗室，北京100038；2.長春理工大學，長春 130022）

近期在世界很多國家和地區出現一種新興毒品，形態與茶葉相似，吸食方法與大麻（Cannabis sativa）相同，燃燒會揮發出類似四氫大麻酚的物質（THC），其主要成分是JWH-073（1-丁基-3-（1-萘甲酰基）吲哚）和JWH-018（1-戊基-3-（1-萘甲酰基）吲哚）的一種烷基同系物。這兩種化合物均為合成大麻素，能夠與大麻素類似的受體結合，產生的效力比天然大麻強4～10 倍，能夠迅速地從肺部轉移到血液，到達全身各器官，吸食者可出現嘔吐、妄想、精神恍惚和情緒失控等癥狀，嚴重者會感到呼吸困難、心跳加速、激動和瞳孔放大等。這種毒品由多種植物混合制成，吸毒者把它稱作“香料”[1-3]。本研究使用DNA 條形碼鑒定技術，采用ITS2 DNA 條形碼片段，對新型“香料”毒品的植物成分進行鑒定研究，為“香料”毒品中有效成分的分析提供更確切的信息。

1 材料與方法

1.1 材 料

材料為某市查獲的疑似毒品物質，查獲的部分樣品外包裝袋上標識為“spike 99”，“K2”，“7 號”。樣品均為干燥植物成份，“K2”取兩種不同顏色樣本各1 份（“K2”-1, “K2”-2）、“spike 99”、“7 號”各取1 份，每種樣本各取30mg，研磨成粉末，利用QIAGEN DNeasy plant mini kit 提取基因組DNA。

1.2 PCR 擴增及序列測定

采用正向引物5'-GCGATACTTGGTGTGAAT-3'，反向引物5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'擴增ITS2 片段。PCR 反應總體積為25μL，體系內含PCR mix 12.5μL（Tiangen Biotech Co., 中國）、引物各1μL（2.5μmol/L），總DNA 1μL。PCR 反應程序為94℃，預變性5min；94℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 45s，40 個循環；72℃延伸10min。純化PCR 產物并使用ABI公司的3730XL 測序儀（美國Applied Biosystems公司）進行雙向測序[4-5]。

1.3 序列分析

將測序得到的峰圖應用CodonCode Aligner V3.71（美國CodonCode 公司Dedham, MA）序列分析軟件進行校正拼接，ITS2 序列用HMMer 注釋法切除5.8S 和26S 端，保留ITS2 的全長，應用BLAST方法在NCBI 數據庫中比對。……