兒童哮喘支氣管肺泡灌洗液成分分析＊

陳禮娟 范如艷 范楚平 潘俊秀 肖志兵 劉 嬋

南華大學附屬郴州市醫院 郴州市兒童哮喘防治技術研發中心，湖南省郴州市 423000

兒童哮喘支氣管肺泡灌洗液成分分析＊

陳禮娟 范如艷 范楚平 潘俊秀 肖志兵 劉 嬋

南華大學附屬郴州市醫院 郴州市兒童哮喘防治技術研發中心，湖南省郴州市 423000

目的：通過對兒童哮喘支氣管肺泡灌洗液成分分析探討其發病機制。方法：應用酶聯免疫吸附實驗（ELISA）方法，對哮喘（29例）、支氣管肺炎（26例）和對照組（20例）共75例患兒的支氣管肺泡灌洗液進行細胞成分分析及上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度測定。結果：哮喘組支氣管肺泡灌洗液嗜酸性粒細胞為3.3%（1.0%～9.0%），上皮細胞2.9%（0.5%～9.8%），IgE為（98.76±15.65）ngL，IL－4為（17.89±3.65）ngL，IL－13為（6.75±0.87）ngL，與支氣管肺炎組和對照組相比明顯增高，差異有非常顯著意義（P＜0.01）；哮喘組IL－12為（2.12±0.76）ngL，與支氣管肺炎組和對照組相比明顯降低，差異有非常顯著意義（P＜0.01）；支氣管肺炎組中性粒細胞明顯增多。結論：哮喘患兒支氣管肺泡灌洗液以嗜酸性粒細胞和上皮細胞增多及IgE增高為其特征；哮喘患兒支氣管肺泡灌洗液IL－4、IL－13濃度增高，IL－12濃度降低，提示Th1Th2失衡是哮喘重要發病機制；支氣管肺泡灌洗液檢查可為哮喘患兒診斷提供有益線索。

兒童 哮喘 支氣管肺泡灌洗液 粒細胞 IgE 白介素

支氣管肺泡灌洗液（BALF）細胞成分及細胞因子分析能對氣道炎癥反應進行直觀反映，揭示哮喘發病機制，豐富人們對哮喘的認識。本研究應用BALF檢查技術，對臨床上常見的兒童哮喘及支氣管肺炎患兒進行了相關炎性細胞及炎癥介質的分析，探討BALF檢查技術在兒童哮喘診療中的應用及意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012－2014年本院住院患兒，共75例，將其分成3組：（1）哮喘組：共29例，均為哮喘緩解期患兒，除外其他系統合并癥及并發癥患兒，除外長期或規律應用激素史者。其中男16例，女13例；年齡5～10歲，平均年齡（5.83±2.75）歲；病程5～28d，中位病程7d。診斷依據中華醫學會兒科分會呼吸學組頒布的標準[1，2]。（2）支氣管肺炎組（肺炎組）：共26例，均為普通支氣管肺炎患兒，除外重癥肺炎和其他系統合并癥及并發癥患兒。其中男15例，女11例；年齡3～10歲，平均年齡（5.50 ±3.25）歲；病程4～24d，平均病程7d。診斷依據中華醫學會兒科分會呼吸學組頒布的標準[3]。（3）對照組：共20例，均為支氣管異物取出術后1周復查纖維支氣管鏡術患兒，均選取健側行支氣管肺泡灌洗，除外臨床或纖維支氣管鏡下有炎癥表現患兒。其中男11例，女9例；年齡2～6歲，平均年齡（3.33 ±2.25）歲；病程2～26d，中位病程5d。所有患兒均獲家長知情同意并簽訂纖支鏡術及支氣管肺泡灌洗術同意書后行纖維支氣管鏡術及支氣管肺泡灌洗術。三組在年齡構成、性別以及病程之間差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標本采集[4～7]：所有患兒均術前檢查心電圖、凝血功能、術前抗體、肝炎全套、心電圖、凝血功能正常方能進行纖支鏡下肺泡灌洗，術前30min霧化吸入可比特1.25ml（異丙托溴銨0.25mg，沙丁胺醇1.5mg）和2%利多卡因2ml，以減少氣道分泌、痙攣和達到氣道局部麻醉，術前10min靜脈推注咪達唑侖0.15～0.30mgkg鎮靜，手術均在持續低流量吸氧和心電監護下進行，選用合適鏡條，采用經鼻腔插入法，進入聲門、氣管時予2%利多卡因2～5ml經活檢孔注入以達到氣道局部麻醉和減少氣道痙攣，在右中葉或左舌葉開口處以37℃生理鹽水進行支氣管肺泡灌洗（體重小于20kg者，每次灌洗量1mlkg，共3次；體重大于20kg者，每次灌洗量20ml，使灌洗總量達3mlkg），并立即以13.3～20kPa（100～150mmHg）負壓進行抽吸。第一次灌洗所得BALF送檢病原學培養，其余混勻，4℃保存，30min內送檢。回收率大于40%、無大氣道分泌物混入、紅細胞小于20%的標本視為合格標本。每份標本均以4℃1 500rmin離心10min，其沉渣用于細胞分析，上清液置于－70℃保存，待檢。

1.2.2 細胞計數[8，9]：細胞活力以臺藍染色排除法評判；計細胞總數尿沉渣分析儀，結果以×106ml表示；分類計數細胞涂片的制備采用離心涂片法，以瑞氏－姬姆薩染色法染色，每張涂片計數200個細胞，取2張涂片的平均值。

1.2.3 BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度測定：用ELISA法檢測BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度，試劑盒為R&D公司生產，檢測結果單位為ngL。

2 結果

2.1 BALF細胞總數及分類計數 哮喘組和肺炎組細胞總數高于對照組（P＜0.01），提示氣道具炎癥反應。三組間巨細胞淋巴細胞差異無顯著意義。中性粒細胞肺炎組高于對照組和哮喘組（P＜0.01），提示其氣道存在感染。哮喘組嗜酸性粒細胞及上皮細胞高于對照組及肺炎組（P＜0.01）。提示哮喘組氣道存在致敏狀態，氣道黏膜上皮細胞脫落。見表1。

表1 各組BALF細胞總數及分類計數（中位數及范圍）

2.2 BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度比較 哮喘組IgE高于肺炎組和對照組（P＜0.01），提示哮喘為IgE介導的炎癥反應。哮喘組IL－4、IL－13高于肺炎組和對照組（P＜0.01），哮喘組IL－12低于肺炎組和對照組（P＜0.01），提示哮喘兒童Th1Th2細胞失衡。見表2。

表2 各組BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度比較（±s，ngL）

表2 各組BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度比較（±s，ngL）

注：a與對照組比較，P＜0.01；b與肺炎組比較，P＜0.01。

IL－13對照組20 27.23±8.47 4.27±0.84 4.25±1.38 3.09±0.69組別n IgE IL－12IL－4肺炎組26 32.53±9.52 5.31±0.53 5.35±1.21 3.52±0.83哮喘組29 98.76±15.65ab2.12±0.76ab17.89±3.65ab6.75±0.87abF 321.156 221.468 321.042 334.283 P＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

3 討論

本研究應用兒童BALF檢查技術，對臨床上常見的兒童哮喘及支氣管肺炎患兒進行了相關炎性細胞及炎癥介質的分析，探討BALF檢查技術在兒童哮喘診療中的應用及意義。

氣道慢性炎癥是各型各期兒童哮喘共同的病理學特征，表現為嗜酸性粒細胞為主的炎性細胞浸潤和上皮損傷，嗜酸性粒細胞是強效的炎前細胞，活化IL－5可使之增殖和活化，并釋放更多的細胞因子和炎癥介質，從而導致氣道黏膜上皮受損和氣道高反應性。近年國內有作者報道哮喘患兒BALF的研究結果[10，11]，本研究支持這一觀點，提示哮喘患兒BALF中嗜酸性粒細胞及上皮細胞明顯增多為其氣道炎癥的特征性改變。

哮喘患兒血清特異性IgE的水平與疾病程度、臨床表現密切相關，是哮喘發病的關鍵因子，IgE介導Ⅰ型變態反應導致了哮喘急性發作[12]。本研究哮喘患兒BALF中IgE升高，提示哮喘患兒氣道內分泌物IgE增高。哮喘的病因和發病機理相當復雜，目前認為是一種由多種炎癥細胞、炎性介質和細胞因子參與的氣道慢性炎癥性疾病，其中Th1Th2型細胞因子在支氣管哮喘病理生理過程中起重要的作用[11]。哮喘患兒Th1細胞減少，而Th2升高。IL－4、IL－13主要由活化的Th2細胞分泌，影響T淋巴細胞的分化及B淋巴細胞抗體分泌，參與哮喘呼吸道炎癥形成，是哮喘發病的重要因素[13～15]。IL－12主要由活化的Th1細胞分泌，對哮喘具有保護作用，抑制呼吸道抑制反應[16]。本研究哮喘患兒BALF中IL－4、IL－13升高，IL－12降低，提示Th1Th2型細胞因子存在不平衡是兒童哮喘慢性氣道炎癥形成的主要原因。

綜上所述，哮喘患兒BALF中嗜酸性粒細胞及上皮細胞明顯增多，IgE增高，為其氣道炎癥的特征性改變；Th1Th2失衡導致IL－4、IL－13升高IL－12降低是哮喘重要發病機制；BALF檢查可為哮喘患兒診斷提供有益線索。

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The Components Analysis of Bronchoalveolar Lavage Fluid of Pediatric Asthma Patients

CHEN Lijuan，FAN Ruyan，FAN Chuping，et al.Chenzhou Affiliated Hospital of the University of South China，Development and Investigation Center of Prevention and Control Technology of Pediatric Asthma of Chenzhou City，Hu’nan Province 423000

Objective：To explore the pathogenesis of pediatric asthma，we analyzed the pediatric asthma bronchoalveolar lavage fluid including cell composition and cytokine level.Methods：Using ELISA，we measured IgE，IL－12，IL－4and IL－13and counting the cell number in bronchoalveolar lavage fluid of 75patients including asthma（n＝29），bronchopneumonia（n＝26），control（n＝20）.Results：In the group of asthma，eosnophils was 3.3%（1.0%～9.0%），epithelial cell 2.9%（0.5%～9.8%），IgE was（98.76±15.65）ngL，IL－4was（17.89±3.65）ngL，IL－13was（6.75±0.87）ngL.That was significantly higher than the group of bronchopneumonia and control（P＜0.01）.IL－12（2.12±0.76）ngL in the group of asthma was significantly lower than the group of bronchopneumonia and control（P＜0.01）.However，neutrophil was obviously increased in the bronchopneumonia.Conclusion：Pediatric asthma bronchoalveolar lavage fluid was characterized with the increase of eosnophils，epithelial cell and IgE.The concentration of IL－4and IL－13increased，but the concentration of IL－12decreased in the bronchoalveolar lavage fluid of pediatric asthma.It is suggested that the unbalance of Th1Th2is of importance in the pathogenesis of pediatric asthma.

Children，Asthma，Bronchoalveolar lavage fluid，Granulocyte，IgE，Interleukin

R725.6

A

1001－7585（2015）12－1554－03

2015－02－06

（編輯羽飛）

郴州市科技局資助重點項目（2012cj084.CZ2013065）。通訊作者：范楚平