癃開顆粒不同制備工藝的主要藥效學比較

癃開顆粒不同制備工藝的主要藥效學比較

謝家駿1， 喬正東2， 成 苗3
（1.上海中醫藥大學，上海200127；2.上海市浦東醫院，上海 201399；3.上海市中藥研究所，上海201401）

目的觀察比較癃開顆粒揮發油對其制劑主要藥效學活性的影響，為設計合適的制備工藝提供實驗依據。方法給丙睪誘發前列腺增生模型小鼠灌胃癃開顆粒含揮發油制劑 （癃開A）或癃開顆粒去揮發油制劑 （癃開B）10、20、40 g/kg，每天1次，連續14 d，末次給藥結束24 h后摘取小鼠前列腺，稱定質量，并換算成前列腺指數作組間比較。結果癃開A和癃開B對丙睪模型小鼠前列腺濕質量和指數均有一定的抑制作用，但兩者相應劑量組之間均無顯著性差異 （P＞0.05）。結論癃開顆粒含揮發油制劑與去揮發油制劑比較，兩者對前列腺增生的抑制程度相當，提示采用去揮發油制備工藝有藥效保障，可用于工業化生產。

癃開顆粒；揮發油；制備工藝；前列腺增生；小鼠模型

良性前列腺增生癥（benign prostate hyperplasia，BPH）是一種以前列腺間質和上皮細胞增生為特征，與年齡和性激素相關的中老年慢性疾?。?］，臨床主要表現為前列腺肥大，尿頻、尿急、夜尿增多及急迫性尿失禁，嚴重者出現尿潴留、血尿、腎積水。流行病學調查顯示，我國＞60歲的常住城鄉老年人前列腺增生總患病率為43.68%［2］，國外更高達50%以上［3-4］。隨著全球人口老年化進程的加快，其發病率逐年升高，已嚴重影響到人們日常工作和生活質量［5］。目前，探索良性前列腺增生癥發病機理，以及尋找相關治療藥物已成為研究熱點［6-7］。癃開顆粒由淫羊藿、黃芪、牛膝等中藥組成，具有補腎益氣、活血化瘀之功效，可用于改善輕、中度中老年良性前列腺增生癥 （腎虛血瘀證）患者出現的夜尿頻數、排尿困難、腰膝酸軟、小腹脹痛等癥狀［8］。本實驗以丙睪所致小鼠前列腺增生為指標［9］，觀察比較癃開顆粒含揮發油制劑與去揮發油制劑對前列腺增生活性的影響，為其有效部位的選定及制備工藝的設計提供科學依據。

1 實驗材料

1.1 受試藥物 癃開顆粒含揮發油制劑 （癃開A），由淫羊藿、生黃芪、杜仲 （淡鹽水炒）、女貞子 （酒制）、懷牛膝、三棱、莪術、赤芍、當歸尾、滑石等組成，按標準水提、濃縮、制粒工藝制備而成，每1 g制劑相當于生藥2 g（中藥研究所藥學研究室，批號000801）；癃開顆粒去揮發油制劑 （癃開B，中藥研究所藥學研究室，批號000802）。

1.2 對照藥 保列治（finasteride，MSD），10片/盒，5 mg/片 （美國默沙東公司，批號200541）。

1.3 模型藥 丙酸睪酮注射液（testosterone propionate injection，TPI），10支/盒，25 mg/支（上海第九制藥廠，批號00105Ⅱ），使用時用液體石蠟稀釋至1mg/mL。

1.4 實驗動物 ICR小鼠，雄性，體質量18～22 g（上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生產許可證號SCXK［滬］2003-0002）。環境條件為溫度 （22±2）℃，相對濕度60%～70%，不銹鋼籠具分籠飼養，飼以鼠用固體高壓料。實驗前禁食12 h，不禁水。

2 實驗方法

ICR小鼠90只，雄性，按體質量隨機分成空白組、模型組、癃開A（低、中、高）組、癃開B（低、中、高）組、陽性藥組，共9組，每組10只。除空白組皮下注射同容積液體石蠟外，其余各組小鼠分別皮下注射TPI 10mg/kg，每日1次，連續14 d。同時，癃開A和癃開B組小鼠分別灌服癃開A 10、20、40 g/kg和癃開B 10、20、40 g/kg，陽性藥組小鼠灌服保列治2 mg/kg，模型組和空白組小鼠則分別灌服蒸餾水，灌服容積均為20 mL/kg，每日1次，連續14 d。末次給藥后24 h，處死動物，摘取前列腺稱定質量，并換算成前列腺指數作組間比較。前列腺指數計算方法如下。

前列腺指數 （%） =前列腺質量 （g）÷體質量 （g）×100%

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析，計量資料采用“均數±標準差 （x±s）”表示，兩組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有顯著性。

3 實驗結果

3.1 對體質量的影響 癃開A中、高劑量組和癃開B高劑量組均能減輕模型小鼠的體質量。其中，癃開A中劑量組小鼠的體質量降低程度與模型組和癃開B相應劑量組比較，差異均具有顯著性意義 （P＜0.05）。

3.2 對前列腺質量的影響 癃開A與癃開B的低、中、高劑量組，以及陽性藥組對丙睪模型小鼠前列腺濕質量和指數均有一定的抑制作用。其中，癃開A低、中劑量組前列腺濕質量和低劑量組前列腺指數、癃開B中、高劑量組以及陽性藥組前列腺濕質量和指數與相應模型組比較，均具有顯著性或非常顯著性差異 （P＜0.05或P＜0.01），而且癃開B還顯示出一定的量效關系。另外，癃開A與癃開B相應劑量組之間比較，在抑制模型小鼠前列腺濕質量和指數方面均無顯著性差異 （P＞0.05），見表1。

表1 癃開顆粒不同制備工藝對丙睪所致小鼠前列腺增生的影響 (n=10,x±s)

結果顯示，癃開A和癃開B對模型小鼠前列腺濕質量和指數均有一定的抑制作用，但將兩者相應劑量組比較，均無顯著性差異 （P＞0.05）。

4 討論

癃開顆粒源于國家級名老中醫王綿之教授幾十年的臨床驗方，是通過現代提取方法科學加工而成的純中藥制劑。藥效學實驗結果表明［9］，它可減輕正常幼年小鼠前列腺濕質量及其DNA含有量，對由丙酸睪丸素或植入胎鼠尿生殖竇誘發的前列腺增生具有抑制作用；動物急性及長期毒性實驗結果［9-10］顯示，該藥最大給藥量為臨床擬用劑量的100倍。另外。以臨床擬用劑量50倍給藥，每日1次，連續3個月，發現除動物前列腺組織腺上皮輕度萎縮，細胞由柱狀向扁平或梭形移生，以及腺腔變小外，其他指標 （如一般行為變化、全血、血清生化、尿液檢測、以及組織病理學鏡檢）均未發現明顯異常，提示了癃開顆粒對良性前列腺增生癥有療效，且安全無明顯毒副作用。

前列腺是性激素的依賴性器官，其中雄性激素對前列腺的生長、結構和功能起著重要的作用。在前列腺組織內，雄性激素的主要作用形式是睪酮轉化為其代謝產物雙氫睪酮 （DHT）［11］。血漿中游離型睪酮進入前列腺細胞內，在5a-還原酶作用下首先不可逆地轉變為DHT，并與雄性激素受體結合形成復合物，作用于其特異性的DNA位點上，誘導雄性激素依賴性基因的復制和轉錄增加，蛋白合成增多。當DHT異常升高時，其可促使前列腺組織廣泛增殖，導致良性前列腺增生癥的發生［12］。基于此雙氫睪酮學說，加上為了便于產業化，我們在對該藥工藝路線的研究過程中，制備了含揮發油部位的癃開顆粒制劑 （癃開A）和去揮發油部位的癃開顆粒制劑 （癃開B）。按照藥物的定義，癃開A與癃開B處方一致，劑量相同，提取溶媒均為水，故其提取物應同屬一種藥物。然而，兩者也有區別，主要在于提取工藝模擬臨床使用方法程度的掌控。癃開A的制備工藝采用先萃取揮發油，后將其加入到水提浸膏中，故富集了處方藥材中的揮發油；癃開B的制備工藝采用直接煎煮提取，其中的揮發油在長時間沸騰狀態下大量揮發，從而基本消失。因此，評價該兩種制備工藝對其產物主要藥效學及強度的影響，對于制定含或去揮發油的工藝路線至關重要。遵照國家CFDA頒布的 《藥品注冊管理辦法》有關要求，參照臨床用藥實際情況，考慮到處方中揮發油成分對主要藥效學活性的潛在影響，課題組設計了富含或不含揮發油的兩條工藝路線，將所得到的提取物通過主要藥效學實驗進行比較，用于指導合理的制備工藝路線［13］。

癃開顆粒主要治療腎虛瘀阻證型良性前列腺增生癥，即前列腺肥大，故課題組設定的用于臨床療效評價的客觀指標是前列腺大小、最大尿流率 （Qmax）和殘余尿量［8］，其中前列腺大小是核心指標。由于中成藥中未見有明確抗前列腺增生的藥物，故選用保列治作為陽性藥物。在受試藥物的劑量設定上，結合主要藥效學實驗結果，將受試藥物癃開A與癃開B的低、中、高組劑量均設置為10、20、40 g/kg，分別相當于臨床劑量的5、10、20倍。為了便于產業化，我們制備了含和去揮發油部位的癃開顆粒制劑，并以丙睪誘發小鼠前列腺增生為指標，觀察比較兩者對其活性的影響。結果顯示，癃開顆粒含和去揮發油部位制劑對丙睪誘發小鼠前列腺增生均有一定的抑制作用，但相應的同劑量組之間無顯著性差異。由此可知，癃開顆粒含揮發油部位并非是防治良性前列腺增生癥的主要活性部位，這也為選用生產成本比較低的去揮發油制劑工藝路線和癃開顆粒產業化提供了科學依據。

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R285.6

：B

：1001-1528（2015）07-1568-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.07.038

2014-09-12

謝家駿 （1959—），男，研究員，碩士生導師，研究方向為藥理毒理學研究與中藥新藥開發。Tel： （021）51322395，E-mail：xiejj001@163.com