高效液相色譜法測定復方甘草麻黃堿片中鹽酸麻黃堿含量

李 霞，李 繼，戴 涌，劉海靜

(陜西省食品藥品檢驗所，陜西 西安 710065)

復方甘草麻黃堿片是由鹽酸麻黃堿、石膏、杏仁、甘草浸膏和碳酸鈣等成分組成的復方制劑，主要成分為鹽酸麻黃堿，具有舒張血管、興奮神經(jīng)和鎮(zhèn)咳祛痰等作用，臨床用于治療咳嗽、咳痰及喘息性支氣管炎和單純性支氣管炎引起的咳嗽。國家藥品監(jiān)督管理局藥品標準[1]規(guī)定對其中的鹽酸麻黃堿進行含量測定，方法為堿化后氯仿提取，采用高氯酸非水滴定測定含量，該法操作復雜，萃取過程中損失較大，且易受其他成分和輔料等因素影響，專屬性較差。本試驗中采用高效液相色譜法對鹽酸麻黃堿的含量進行測定，方法專屬性高，方法簡便、快速、準確，重現(xiàn)性好，適用于復方甘草麻黃堿片中鹽酸麻黃堿的含量測定。

1 儀器與試藥

Waters Alliance HT 型液相色譜儀，包括Waters 2487 檢測器;Mettler AE240 型電子天平，超聲波振蕩儀。甲醇均為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純，水為超純水;鹽酸麻黃堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為171242-200404);復方甘草麻黃堿片(批號為120901，樣品來源為省級藥品抽驗)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Diamonsil (鉆石)C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:0.1 mol/L 磷酸二氫鉀-甲醇(75 ∶25)，流速:1.0 mL/min;檢測波長:210 nm;進樣量:20 μL。進樣分析對照品溶液，記錄色譜圖，見圖1 A。鹽酸麻黃堿峰的保留時間為8.0 min，理論板數(shù)為10 300，拖尾因子為1.1，符合色譜分析的要求。

2.2 溶液配制

精密稱取鹽酸麻黃堿對照品52.75 mg，置50 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液;再精密量取10 mL 置50 mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液，置冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩Ｈ头礁什萋辄S堿片20 片，研細，精密稱取粉末約0.11 g(相當于鹽酸麻黃堿10 mg)，置100 mL 容量瓶中，加水適量，超聲提取10 min 后，加水至刻度，精密量取5 mL 置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。根據(jù)復方鹽酸麻黃堿的處方制備不含鹽酸麻黃堿的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取2.2 項下的陰性對照品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣20 μL，記錄色譜圖。結(jié)果表明，處方中其他成分和輔料對結(jié)果沒有影響，方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:分別吸取2.2 項下對照品貯備液0.5，1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，分別置100 mL 容量瓶，加水至刻度，即得系列質(zhì)量濃度的對照品溶液。照2.1 項下色譜條件各進樣2 次按擬訂色譜條件測定。以對照品峰面積為縱坐標( Y)、對照品質(zhì)量濃度(X)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程Y =42 973 X +3 856(r=0.999 9)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿質(zhì)量濃度在1.06 ～21.1 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取2.2 項下同一對照品貯備液，分別稀釋成低、中、高質(zhì)量濃度的對照品溶液(5.3，10.6，15.8 μg /mL)，照2.1 項下的色譜條件分別于1 d 之內(nèi)連續(xù)進樣5 次，考察日內(nèi)精密度;連續(xù)3 d 每天進樣1 次，考察日間精密度。結(jié)果鹽酸麻黃堿的日內(nèi)和日間的RSD 均小于1.5%(n =5)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗:取復方甘草麻黃堿片約0.056 g，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，分別精密加入鹽酸麻黃堿對照品貯備液(1.055 mg/mL)7，5，3 mL，照2.2 項下樣品溶液的配制方法制備，即得高、中、低3 種濃度的樣品;每種濃度各配制3 份，按2.1項下色譜條件測定。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收試驗結(jié)果( n=9)

重復性試驗:取供試品粉末6 份，精密稱定，照2.2 項下樣品制備方法制樣，2.1 項下色譜條件測定。結(jié)果鹽酸麻黃堿平均含量為97.7%，RSD 為0.3%(n=6)，表明方法重復性好。

穩(wěn)定性試驗:取重復性試驗項下同一份供試品溶液，分別在1，2，4，6，8，10，12，14，16，18，20，22，24 h 時照2.1 項下色譜條件各進樣20 μL，記錄峰面積。結(jié)果含量的RSD 為0.2%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

定量限及檢測限:逐級稀釋2.2 項下的對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣。以信噪比分別為10 ∶1，3 ∶1 計，鹽酸麻黃堿的定量限為10.6 ng/mL，檢測限為1.06 ng/mL。

2.4 樣品含量測定

按2.2 項下的方法配制試品溶液各3 份，用0.45 μm 的濾膜過濾，分別取續(xù)濾液進樣測定，每個樣品重復進樣3 次，按外標法以峰面積計算含量。結(jié)果3 批樣品中鹽酸麻黃堿含量分別為標示量的98.5%，99.8%，98.7%，平均99.00%，RSD=0.71%(n=3)。

3 討論

樣品前處理:復方甘草麻黃堿片是由化學藥品和中藥構(gòu)成的復方制劑，成分相對復雜，在含量測定時樣品的前處理尤其重要。國家藥品監(jiān)督管理局藥品標準[1]中樣品前處理采用的是樣品堿化后用氯仿反復提取。文獻[2]報道，采用水溶解加高碘酸和氫氧化鈉反應后，用鹽酸調(diào)節(jié)pH，上述方法均煩瑣且損失大。考慮到鹽酸麻黃堿在水中較易溶解，本試驗中采用超聲水提法，樣品經(jīng)過濾后直接進樣，結(jié)果該方法操作簡單，提取效率高，回收率完全滿足色譜分析的要求。

色譜條件的確定:在麻黃堿的測定中，流動相的使用有多種，如甲醇-水[2]、0.092%磷酸溶液(含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺)-甲醇(1.5 ∶98.5)[3]、乙睛-0.02 mol /L 磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)pH 至3.0) -0.2%三乙胺(5 ∶95 ∶0.1)[4]或乙腈-0.1% 磷酸(10 ∶90)[5]。因為乙腈毒性較大，且價格較貴，故本試驗在篩選流動相時，首選甲醇為有機相。當以甲醇-水為流動相時，發(fā)現(xiàn)樣品中鹽酸麻黃堿和其他成分的分離不好，且鹽酸麻黃堿的峰形較差。經(jīng)過多次試驗后，最終確定以0.1 mol /L 的磷酸二氫鉀-甲醇(72 ∶28)為流動相，以Diamonsil (鉆石)C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)為固定相時，鹽酸麻黃堿的峰形最好，拖尾最小且與其他成分的分離度較好，理論板數(shù)超過10 000;而且采用不同廠家的柱子和適當?shù)母淖兞鲃酉嗟谋壤⒅鶞睾土魉伲}酸麻黃堿的保留時間有少許變動外，峰形均較好。表明該方法專屬性高，方法簡便、快速、準確，重現(xiàn)性好，適用于對復方甘草麻黃堿片中麻黃堿的含量測定。

檢測波長的選擇:通過對對照品溶液的紫外波長掃描，鹽酸麻黃堿在254 nm 波長處有最大吸收，在200 ～220 nm 處有較大的末端吸收。考慮到254 nm 波長處的吸收靈敏度較低且有其他成分的干擾，最終選擇了210 nm 的末端吸收為檢測波長。經(jīng)試驗其他成分、溶劑及輔料在該波長下對麻黃堿的測定均無干擾。

[1] WS-10001 - (HD-1343) -2003，國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準[S].

[2] 黃璐敏，簡淑娟. 甘草麻黃堿片的質(zhì)量控制方法研究[J]. 中國藥房，2005，16(16)：1 259.

[3] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部) [M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：301.

[4] 吳芳花，鄔月鑫. 高效液相色譜法測定止咳平喘類藥中鹽酸麻黃堿含量[J]. 中國藥業(yè)，2014，23(1)：22 -23.

[5] 李文烈，姬雪禮，曹海芳，等. 高效液相色譜法測定加味定喘片中鹽酸麻黃堿含量[J]. 中國藥業(yè)，2013，22(6)：70 -71.