高效液相色譜-串聯四極桿質譜聯用檢測蕎麥草中非法添加的苯乙雙胍

陳 江，劉 凱，肖 引，羅定強

(1. 武警陜西省總隊醫院，陜西西安710054;2. 陜西省食品藥品檢驗所，陜西西安710061)

蕎麥草為蓼科植物，資源分布廣。蕎麥葉具有降糖、調脂作用[1]。中成藥中非法添加化學成分，特別是非法添加降糖類成分，會危害患者的生命安全[2-3]。目前尚未有文獻報道藥材中檢出非法添加化學成分，筆者收集了5 批蕎麥草，經過高效液相色譜-串聯四極桿質譜聯用(LC-MS/MS)技術、多反應監測(MRM)掃描模式進行分析，其中1 批檢出苯乙雙胍。現報道如下。

1 儀器與試藥

LC-20AD 型島津高效液相色譜儀，API3200 串聯四級桿質譜儀，Analyst 1.5 工作站，甲醇(美國Fisher 公司)。乙酸銨為分析純(西安化學試劑廠)，超純水(美國Millipore 純水系統);鹽酸苯乙雙胍對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100922 -200701);5 批蕎麥草樣品均收購西安藥材市場，經陜西省食品藥品檢驗所鑒定為蕎麥地上部分。

2 方法與結果

2.1 檢測條件

色譜條件:色譜柱為Waters C18柱(150 mm×4.6 mm，3.5 μm)，流動相為甲醇-0.001 mol/L 乙酸銨(30 ∶70)，流速為0.2 mL/min。

質譜條件:離子源溫度為450 ℃，離子化模式為ESI+，檢測模式為MRM;霧化氣(Gas1)氣流量為40.00 mL/min，輔助加熱氣(Gas2)氣流量為40.00 mL/min，氣簾氣(Curtain Gas)20.00 mL/min;噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能量電壓值優化至最優靈敏度。離子對質譜參數見表1。

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸苯乙雙胍對照品6.02 mg，加甲醇制成每1 mL含602 ng 的溶液，搖勻，即得對照品貯備液。取本品粗粉2 g，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，稱定質量，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

表1 苯乙雙胍質譜參數

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品貯備液2 mL，分別置100，50，25，10，5 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別得到12.04，24.08，48.16，120.4，240.8 ng/mL 的對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液10 μL，按擬訂的條件測定，以化合物定量離子對的峰面積( Y)對相應的濃度( X)進行線性回歸計算，得線性方程Y=28 200 X+2 270(r=0.998 6)。結果表明，鹽酸苯乙雙胍進樣量在12.04 ～240.8 ng 范圍內與峰面積線性關系良好。

檢測限與定量限確定:以信噪比S/ N 約為3 時，檢測限為2.2 μg/Kg，S/ N 約為10 時，定量限為6.3 μg/Kg。

精密度試驗:精密吸取苯乙雙胍對照品溶液(48.16 ng/mL)，按擬訂的條件連續測定5 次，以定量離子對計算精密度。結果的RSD 為2.66% ( n=5)。

穩定性試驗:精密密吸取苯乙雙胍對照品溶液(48.16 ng/mL)，按上述條件，分別在0，2，4，8，12 h 測定，以定量離子對計算。結果的RSD 為3.01% ( n=5)。

重復性試驗:精密稱取陽性樣品2 g，平行6 份，依法制備供試品溶液，根據苯乙雙胍定量離子對峰面積計算樣品中苯乙雙胍平均含量為1.52 μg/g，RSD 為3.13%(n=6)。

加樣回收試驗:取陰性樣品粗粉2 g，分別精密加入鹽酸苯乙雙胍對照品溶液(24.08，48.16，120.4 ng/mL)50 mL，每個濃度平行制備3 份，按供試品溶液同法制備，按上述條件測定，計算回收率。結果低、中、高濃度溶液的平均加樣回收率分別為85.6%，87.2%，89.6%，RSD 分別為2.1%，1.9%，1.6%(n=3)。

2.4 樣品檢測結果

按擬訂的LC-MS/MS 條件進行測定，陽性樣品與對照品苯乙雙胍顯相同保留時間的多反應監測離子對色譜峰。結果見圖1。

3 討論

中成藥非法添加化學藥品的目的是為了提高療效、占有市場份額，但忽視了患者的健康安全，嚴重者可能危害生命。因此，監管部門應引起重視，加強宣傳與管理。本試驗中采用LC-MS/MS、多反應檢測掃描方式進行樣品檢測。多反應監測模式可以看成2個SIM，試驗時盡可能多選幾個離子對，基質干擾時可更換相應的離子對，以提高專屬性。判定陽性樣品時，除陽性樣品與對照品多反應監測離子對完全一致時，還應計算樣品和對照品非定量離子對與定量離子對色譜峰的比值，僅當兩者數值的相對偏差小于15%時方可判定兩者為同一物質。另外，可利用定量離子計算陽性樣品的含量。試驗時，優化多反應監測離子對參數噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能量等條件，可提高靈敏度。

[1] 劉淑梅，韓淑英，崔國金，等. 甜蕎麥葉總黃酮降糖、降脂作用及機制[J]. 第四軍醫大學學報，2003，24(9)：1 815.

[2] 楊 釗，陳安珍，吳愛英，等.UPLC-MS/MS 測定降糖類中成藥及保健品中11 種化學藥[J]. 藥物分析雜志，2009，29(12):2 127.

圖1 多反應監測離子對色譜峰

[3] 劉福艷，蔣 俊，謝元超，等. 液相色譜-質譜聯用法檢測中藥制劑中摻入的雙氯芬酸鈉和醋酸潑尼松[J]. 藥物分析雜志，2009，29(12):1 231.