HIV、HBV共感染患者病毒載量和外周T淋巴細胞亞群的相關性研究

鄭立娜 金明珠

浙江省樂清市血站，浙江樂清 325600

流行病學調查顯示，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV） 感染引起的肝炎是肝硬化和原發性肝癌發生的主要原因之一[1-2]。 HBV 和人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）存在相同的感染途徑，如毒品途徑傳播、性途徑傳播和母嬰途徑傳播等，且HIV 感染患者的免疫能力較健康人群更為低下，因此在HIV 感染者中HBV 感染率也居高不下[3]。 有研究報道，約50%的HIV 感染者血清中存在HBV 的病毒標志物[4]。 在HIV 感染患者中，乙型肝炎的感染率高達4%～10%[4-5]。 機體對HBV 的清除需要通過特異性淋巴細胞介導的體液免疫途徑進行，然而在HIV 和HBV 共感染的患者中，HIV 破壞了患者體內CD4+T 淋巴細胞的正常生理功能，導致HIV 患者對HBV 的清除能力降低，臨床癥狀也更為嚴重[6]。 隨著雞尾酒療法的普及，HIV 感染患者的生活質量和生存期已顯著升高[7]。 有關HIV、HBV 共感染患者的治療情況，尤其是感染發生后病毒載量和免疫學關系的研究較為少見，因此對其展開研究具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011 年1 月～2014 年1 月就診于樂清市血站門診和住院部未經高效抗逆轉錄病毒治療的HIV感染患者（單純感染組，1230 例）和HIV、HBV 共感染患者（共感染組，148 例）作為研究對象，共計1378 例，其中男1031 例，女347 例，年齡16～72 歲，平均（54.3±12.6）歲。 單純感染組中男932 例，女298 例，平均年齡為（54.4±11.8）歲；共感染組中男99 例，女49 例，平均年齡為（54.3±13.1）歲。 HIV 感染依據《全國艾滋病檢測技術規范（2009 年版）》確診，首先對患者血液進行HIV 抗體初查確認，對陽性患者抽取血樣后送往樂清市CDC 經蛋白印跡法確診；HBV 感染依據《慢性乙型肝炎防治指南（2010 年版）》確診，采用酶聯免疫吸附法檢測患者血清中的HBsAg，兩次重復陽性結果判為HBV 感染陽性。 本研究經樂清市血站倫理學會批準，所有患者或其家屬均被告知且簽署了知情同意書。 兩組患者性別、年齡等比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），具有可比性。

1.2 檢測內容

1.2.1 HIV-1 抗體檢測 采用上海生工生物公司提供的酶聯免疫試劑盒對HIV-1 抗體進行檢測，陽性者抽取血樣后送往樂清市CDC 經蛋白印跡法確診，檢驗步驟嚴格依據試劑盒說明書進行。

1.2.2 HBsAg 檢測 采用酶聯免疫吸附試劑盒檢測血清中的HBsAg，兩次重復陽性結果判為HBV 感染陽性，操作過程依據說明書進行。

1.2.3 T 淋巴細胞亞群計數 使用FACS Calibur 流式細胞儀對研究對象外周靜脈血中的T 淋巴細胞亞群進行計數，記錄CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細胞數量和CD4+/CD8+的比值。 使用試劑和流程均依照FACS Calibur 流式細胞儀使用說明書進行。

1.2.4 病毒載量測定 血清HIV RNA 病毒載量采用RT-PCR 方法測定，使用羅氏公司的全自動核酸分離純化系統及核酸提取試劑盒進行，提取病毒總RNA并測定病毒載量，操作嚴格依據說明書進行。 血清HBV DNA 病毒載量采用熒光定量PCR 監測系統（FQD-33B 型）進行，操作嚴格依據說明書進行。

1.2.5 生化指標檢測 采用全自動生化分析儀分析患者的天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、總蛋白（TP）、總膽紅素（TBIL）、白蛋白（ALB）。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0 軟件分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，非正態分布數據采用對數轉換后符合正態分布，組間比較采用獨立樣本t 檢驗，計數資料采用χ2檢驗，相關性采用Pearson 相關分析，以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者生化指標和病毒學指標比較

兩組患者ALT、AST、TP、ALB、TBIL 水平和HIV RNA 載量比較，差異有高度統計學意義（P ＜0.01）。見表1。

表1 兩組患者生化指標和病毒學指標比較（±s）

表1 兩組患者生化指標和病毒學指標比較（±s）

注：ALT：丙氨酸氨基轉移酶；AST：天冬氨酸氨基轉移酶；TP：總蛋白；ALB：白蛋白；TBIL：總膽紅素；HIV：人類免疫缺陷病毒；HBV：乙型肝炎病毒；“-”：無數據

組別 生化指標ALT（U/L） AST（U/L） TP（g/L） ALB（g/L） TBIL（μmol/L）病毒學指標（log10 cps/mL）HIV RNA HBV DNA單純感染組（n = 1230）共感染組（n = 148）t 值P 值42.6±64.4 78.3±63.2 6.479＜0.01 40.1±32.5 88.3±82.6 7.034＜0.01 72.3±6.3 71.1±5.4 2.506＜0.01 41.3±5.7 37.1±4.1 10.156＜0.01 13.5±13.4 17.2±18.3 2.384＜0.01 4.8±1.2 6.4±1.1 16.55＜0.01-6.1±1.3

2.2 兩組患者外周T 淋巴細胞亞群比較

兩組患者CD4+、CD8+、CD3+T 淋巴細胞亞群計數和CD4+/CD8+比較，差異有高度統計學意義（P ＜0.01）。見表2。

2.3 HIV、HBV 病毒載量與外周T 淋巴細胞亞群的相關性

HIV RNA 載量與HBV DNA 載量呈正相關（r =0.471）；CD4+/CD8+與HBV DNA 載量呈負相關（r =-0.412）；CD4+、CD4+/CD8+與HIV RNA 載量呈負相關（r=-0.841、-0.583）。 見表3。

3 討論

HIV 和HBV 具有相似的傳播途徑（主要是性傳播、靜脈吸毒傳播）和易感人群，因此HIV 和HBV 共感染現象在我國和全世界范圍內都十分普遍，雖然HBV 屬于DNA 病毒而HIV 屬于RNA 逆轉錄病毒，但HBV 與HIV 在復制能力和基因結構上均有相似之處，且HBV 同樣具有感染T 淋巴細胞的能力[8]。 目前，我國缺乏有關HIV、HBV 共感染的大規模調查，衛大英等[9]調查顯示，HIV、HBV 共感染的主要原因是靜脈注射毒品，約93.6%的靜脈吸毒HIV 患者共感染HBV。有報道指出，HIV、HBV 共感染加速了艾滋病的病情發展，增加了治療的肝毒性，并降低了患者生存率[10-11]，因此，艾滋病和HIV 感染患者中，共感染其他病毒尤其是HBV 感染情況的調查對于提高艾滋病和HIV 感染的治療效果具有重要意義。 HIV 的病毒載量對HIV 感染患者的生存率具有顯著影響，然而對HIV、HBV 共感染患者中病毒載量和外周T 淋巴細胞亞群的相關性研究較少。 在HIV、HBV 共感染患者體內，HIV 與HBV 的存在是呈競爭性相互抑制關系，還是存在一定程度的促進作用仍未有統一定論，且共感染患者中病毒載量與患者病情尤其是對肝臟和免疫系統的影響是否與單純HIV 感染患者的情況相同尚需要大量的研究進行證實。 王海斌[12]調查了HIV、HBV、丙型肝炎病毒三重病毒共感染患者中病毒載量與T 淋巴細胞亞群的關系發現，HBV 和丙型肝炎病毒的病毒載量與HIV 病毒載量具有相關性，且HBV 的病毒載量與T 淋巴細胞亞群呈負相關，但HIV 和丙型肝炎病毒的病毒載量與T 淋巴細胞亞群無相關性，提示三重感染患者對免疫系統的破壞以HBV 對患者的影響為主，而與HIV 的關系較小，提示HBV 雖然促進HIV 的復制，但是會抑制其對機體免疫功能的破壞。 黃海軍等[13]研究肝炎患者（B 型和C 型）病毒載量與T 淋巴細胞亞群相關性發現，慢性乙型肝炎患者基因型與病毒載量和集體細胞免疫存在一定相關性，提示HBV 對于患者的免疫系統具有一定的破壞作用[14-15]。

表2 兩組患者外周T 淋巴細胞亞群比較（±s）

表2 兩組患者外周T 淋巴細胞亞群比較（±s）

組別 CD4+（個/μL）CD8+（個/μL）CD3+（個/μL）CD4+/CD8+單純感染組（n=1230）共感染組（n=148）t 值P 值230.5±186.3 130.1±116.3 9.180＜0.01 881.2±665.8 654.2±401.2 5.965＜0.01 1332.5±902.6 1110.5±503.8 4.553＜0.01 0.34±0.26 0.21±0.18 7.856＜0.01

表3 HIV、HBV 病毒載量與外周T 淋巴細胞亞群的相關性

本研究結果顯示，1378 例HIV 患者中，HIV、HBV共感染患者148 例，感染率超過10%，單純HIV 感染和共感染患者的年齡和性別分布差異無統計學意義；HBV、HIV 共感染患者的肝損傷程度顯著高于單純HIV 感染患者，提示不同年齡和性別的患者共同感染HIV 和HBV 的概率相近，但HBV、HIV 共感染患者的肝損傷程度相較于單純HIV 感染患者更為嚴重。 其原因一方面是由于HBV 對肝細胞產生了直接的破壞作用，另一方面是HBV 導致抗病毒治療對肝細胞的損傷增加，因此在HIV 感染患者中應進行HBV 感染的篩查以確認患者是否共感染HBV，對共感染HBV 的患者應及時進行保肝治療，降低病毒對肝臟的損傷。本研究還顯示，HBV、HIV 共感染患者的HIV 病毒載量顯著高于單純HIV 病毒感染患者，且HIV RNA 載量與HBV DNA 載量呈正相關（r = 0.471），與王海斌[12]的研究結果相近，提示HBV 共感染會促進HIV 感染的病程，原因可能是HBV 感染對患者的免疫功能造成較大的影響，降低了患者免疫系統對HIV 病毒的抑制作用，且HBx 蛋白的發現也支持了這一結論[16]。進一步分析共感染患者中HIV、HBV 病毒載量與T淋巴細胞亞群的相關性發現，在共感染患者中單純感染組與共感染組的HIV RNA 載量和外周T 淋巴細胞計數比較，差異有高度統計學意義（P ＜0.01）；CD4+/CD8+與HBV DNA 載量呈負相關（r = -0.412）；CD4+、CD4+/CD8+與HIV RNA 載量呈負相關（r = -0.841、-0.583）。 本研究結果提示HIV、HBV 共感染會增加HIV 感染患者的免疫損傷， 且免疫損傷程度不僅與HBV 的感染程度（即病毒載量）相關，而且與HIV 的感染程度也有一定的相關性。 HIV 病毒載量與CD4+、CD4+/CD8+的相關性較HBV 更為密切，因此筆者推測共感染患者中免疫損傷主要由HIV 引起；HBV 會增加HIV 的病毒載量， 因此其與患者的免疫損傷指標有一定的相關性

綜上所述，HBV 可能存在促進HIV 復制的功能，因此患者的肝損傷和免疫損傷較單純HIV 感染更為嚴重，在臨床上應引起重視。

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