淋巴細胞免疫表型聯合CCL-2水平檢測對復發性流產的診斷價值

宋麗，穆春華，陸曉媛

(1徐州醫學院研究生學院，江蘇徐州221002;2泗陽縣人民醫院;3徐州醫學院)

復發性流產(RSA)是一類常見的妊娠疾病，其發生與多種因素相關。趨化因子在調節滋養細胞的遷移和侵襲、促進胎盤形成、調節淋巴細胞等方面具有重要作用;當趨化因子和(或)趨化因子受體表達量或活性異常時，可能導致胚胎的早期丟失。目前研究顯示，淋巴免疫表型與RSA的發生具有一定的聯系，但具體機制尚不明確。為此，本研究對RSA患者外周血淋巴細胞表型及趨化因子水平進行了研究。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年8月～2013年8月在徐州醫學院附屬醫院婦產科門診就診的RSA患者60例(RSA 組)，年齡22～38(31.1±5.7)歲。超聲診斷發現胚胎發育停止或者枯萎，無胎心搏動，確診流產。患者均符合RSA的相關標準:流產次數超過2次，染色體檢查正常，內分泌系統無異常，無子宮疾病。另選取同期終止妊娠的健康婦女30例作為對照組，年齡 21 ～39(30.3 ±4.3)歲，無流產史，染色體正常，婦科檢查指標正常。兩組年齡、孕周等差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 RSA組及對照組抽取靜脈血5 mL，然后進行吸宮手術;吸宮手術收集的絨毛及蛻膜組織處理后立即用液氮冷卻，低溫保存。

1.2.2 淋巴免疫表型分布檢測 靜脈血經處理后，加入熒光標記CD127鼠抗人單抗各20 μL，避光15 min后加入500 μL溶血素，PBS洗滌離心棄去上清，流式細胞儀檢測。

1.2.3 血清CCL-2水平檢測 參照雙抗體夾心酶標免疫分析方法的一般操作要求，對患者血清標本進行CCL-2水平檢測，采用酶標儀450 nm測定吸光度，繪制標準曲線，計算CCL-2濃度。

1.2.4 絨毛、蛻膜組織CCL-2表達檢測 采用蛋白免疫印跡法，參照試劑盒操作規程檢測絨毛、蛻膜組織CCL-2表達情況。

1.2.5 統計學方法 采用 SPSS18.0統計軟件，計量資料以±s表示，兩組間符合正態分布資料比較采用t檢驗，不符合正態分布資料采用秩和檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清淋巴免疫表型比較 見表1。

表1 兩組血清淋巴免疫表型比較(%，±s)

表1 兩組血清淋巴免疫表型比較(%，±s)

組別 n CD+3 CD+4 CD+8 CD+16CD+56 CD+4CD+25CD127 RSA 組 60 56.5 ±5.6 38.1 ±6.6 25.6 ±3.1 23.2 ±2.3 7.9 ±1.2對照組 30 51.0 ±4.1 30.5 ±2.5 22.9 ±4.1 18.2 ±1.7 10.6 ±1.8 t 2.79 3.15 2.56 4.15 3.25 P 0.031 0.027 0.068 0.015 0.026

2.2 兩組血清 CCL-2水平比較 RSA組、對照組 血清CCL-2水平分別為(16.1±2.1)、(9.8±4.1)g/L，RSA組CCL-2水平高于對照組(P＜0.05)。

2.3 絨毛、蛻膜組織CCL-2表達情況 RSA組絨毛及蛻膜組織中CCL-2呈現高表達狀態，高于對照組表達水平。見圖1。

圖1 及對照組絨毛及蛻膜組織中CCL-2的表達情況

3 討論

妊娠是指胚泡和母體組織結合的一個復雜的生理過程，類似于器官移植，將父母雙方的抗體抗原進行融合、識別，并產生相關作用的一個過程［1］。免疫學認為，妊娠的過程是父方抗原成分與母體免疫系統識別產生免疫應答的過程［2］，但是妊娠結局與器官移植產生的免疫應答不同，它是一種特殊類型的同種異體移植。因此，胚胎與母體之間的免疫平衡是妊娠成功與否的關鍵。大量的研究證明，妊娠失敗多與母體的免疫排斥有關，當胚胎與母體免疫系統產生排斥，母體免疫系統會發生免疫應答，產生免疫耐受，導致進一步的妊娠失敗。但是，RSA與免疫應答及與何種免疫表型具有關聯，仍然是臨床研究的熱點問題［3］。

RSA是無明顯病理原因的多次流產，其產生的原因復雜［4～6］，臨床常見的是免疫性和非免疫性RSA。非免疫性的RSA主要表現為染色體異常、生殖系統異常;而免疫性的RSA主要表現為免疫功能紊亂，其中還包括自體免疫性RSA和非自體免疫型RSA。目前關于RSA與免疫因子的關系尚不清楚，本研究希望通過RSA患者與正常人群的淋巴免疫表型的差異，尋找RSA的免疫應答機制。本研究發現，RSA 患者中分布與對照組有統計學差異，RSA患者淋巴細胞免疫表型以為主。但是，本研究僅用流式細胞儀對血清中的免疫細胞進行了熒光標記，樣本量較小，其結果的真實性仍然需要進一步研究。

CCL-2是一類較為常見的趨化因子，與免疫系統應答有一定聯系。趨化因子在調節滋養細胞的遷移和侵襲，促進胎盤形成，調節外周血淋巴細胞遷移、募集和歸巢中起著決定性的作用［7］。當趨化因子和(或)趨化因子受體表達量或活性異常時，可能導致胚胎的早期丟失。研究表明，趨化因子與母胎之間存在非常緊密的聯系，在胚胎著床及生長過程中，趨化因子產生非常重要的作用［8］。免疫學的深入研究顯示，RSA與免疫應答具有密切的聯系［9～11］;同時，RSA 與胚胎周圍局部功能異常的細胞分泌細胞因子有關，并在調節細胞遷移侵襲、促進胎盤形成的過程中起到關鍵作用［12］。本研究發現，RSA患者血清CCL-2水平明顯高于對照組，在絨毛及蛻膜組織中CCL-2也呈現高表達狀態，進一步印證了RSA患者的趨化因子異常。

綜上所述，淋巴細胞免疫表型聯合CCL-2水平檢測對臨床診斷RSA有重要作用。

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