ABO血型鑒定中2例混合視野結果分析

靖春旭 趙菲

ABO血型鑒定中2例混合視野結果分析

靖春旭 趙菲

目的探討ABO血型正反定型鑒定困難的血型鑒定及結果判斷與分析。方法采用血型血清學方法對標本2例進行血型鑒定, 采用PCR-SSP法進行基因分型。結果案例1血清學ABO血型為A3B3亞型, 其基因分型結果為A102, B101, O01。案例2血清學ABO血型為A3亞型, 其基因分型結果為A101型。結論某些生理和病理原因會造成ABO正反定型不符, 在ABO血型檢測時應注意結合臨床診斷進行區分, 正確鑒定ABO血型。

ABO血型；亞型；混合視野

ABO血型系統是1900年由Karl Landsteiner 首先發現的,其A﹑B 抗原的免疫原性是所有人類血型系統抗原中免疫原性最強的, 血清中規律的存在抗-A或(和)抗-B抗體, ABO血型的正確定型對輸血至關重要。由于生理或病理原因引起ABO抗原或抗體減弱造成的ABO正反定型不符, 常常會干擾ABO血型的正確定型, 本文以1例嵌合型和1例白血病導致的混合視野外觀為研究對象, 對混合視野現象進行比較分析。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 案例1為本中心檢驗科送檢獻血者ABO正反不符標本；案例2為外院送檢患者標本, 懷疑急性白血病,無輸血史, ABO正反不符。

1.2 試劑與儀器 單克隆抗-A﹑抗-B, 抗-A1﹑抗-AB,抗-H, 抗-D﹑抗-C﹑抗-c﹑抗-E﹑抗-e, ABO試劑紅細胞, 譜細胞均為上海血液生物醫藥有限公司產品。人源抗-A﹑抗-B(效價均≥64), 成人ABO細胞均為實驗室自制試劑。所有試劑均經過批批檢合格, 并在有效期內使用。KA-2200離心機(日本久保田), 毛細管血液離心機TG12MX(湖南賽特湘儀), 所有儀器均在校準有效期內使用。

1.3 血清學檢測方法 均采用經典試管法進行檢測［1］。

1.3.1 正反定型試驗 按照標準操作規程進行操作。先將受檢者紅細胞洗滌3次, 配制成3%～5%紅細胞懸液備用。正定型：取2支干凈試管, 分別標為抗-A﹑抗-B, 分別滴加1滴抗血清試劑, 每管滴加1滴3%～5%受檢者紅細胞懸液；反定型：取4支干凈試管, 分別標為Ac﹑Bc﹑Oc﹑自身, 每孔滴加2滴受檢者血清, 再分別滴加1滴3%～5%試劑紅細胞懸液和受檢者紅細胞懸液, 混勻, 3400 r/min離心15 s, 觀察結果。

1.3.2 H抗原檢測 1滴抗-H試劑加1滴3%～5%受檢者紅細胞懸液, 3400 r/min離心15 s, 觀察結果。同時取新鮮成人B型紅細胞和O型紅細胞做強陽性和弱陽性對照, 根據各血型紅細胞H抗原強度由強到弱依次為O型＞A2型＞B型＞A2B型＞A1型＞A1B型的特點, 判斷被檢者紅細胞H抗原是否增強。

1.3.3 毛細管離心分離試驗 使用毛細管取壓積紅細胞,封住遠心端一側, 配平放入毛細管離心機, 10000 r/min離心5 min, 用砂輪截取毛細管近心端約1 cm的紅細胞作為新鮮細胞, 取毛細管遠心端約1 cm的紅細胞作為陳舊細胞, 紅細胞三洗后配制成3%～5%的紅細胞懸液進行試驗。

1.3.4 Rh分型檢測 取5支試管分別標識為抗-D﹑抗-C﹑抗-c﹑抗-E﹑抗-e, 每管加入1滴相應的Rh分型試劑, 再各加1滴被檢者3%～5%紅細胞懸液, 3400 r/min離心15 s,觀察結果。

1.3.5 混合視野標準凝集比例建立試驗 分別取3～5例檢測結果為A型和B型的混合壓積紅細胞1 ml, 洗滌3次, 按照95%A細胞+5%B細胞, 90%A細胞+10%B細胞, 80%A細胞+20%B細胞…10%A細胞+90%B細胞, 5%A細胞+95%B細胞的比例配制成11份不同比例的3%紅細胞懸液；取22支試管, 分別標為1-A﹑1-B…11-A﹑11-B, 加入相應抗-A或抗-B試劑50 μl/孔, 再分別加入50 μl紅細胞懸液,混勻, 3400 r/min離心15 s, 反復離心幾次, 觀察結果。將病例1和病例2的紅細胞配制成3%紅細胞懸液, 同樣條件下檢測, 與標準管結果進行比較, 得出其凝集細胞的大致比例。

1.4 ABO基因測序 ABO基因測序由試劑公司完成。

2 結果

2.1 案例1試驗結果

2.1.1 ABO正反定型檢測結果 抗-A﹑抗-B結果為70% mf (表示混合視野)﹑80% mf, 其他為陰性。

2.1.2 人源試劑及抗-H測結果為 人源抗-A﹑抗-B結果為60% mf﹑70% mf；抗-H結果為2+。

2.1.3 Rh分型檢測結果 抗-D﹑抗-c﹑抗-E結果為4+﹑3+﹑2+, 抗-C﹑抗-e結果為50% mf﹑40% mf。

2.1.4 毛細管離心分離檢測結果 近心端和遠心端抗-A﹑抗-B結果均為60% mf﹑70% mf。

2.1.5 基因分型及克隆檢測結果 A102, B101, O01。

2.2 案例2試驗結果

2.2.1 ABO正反定型檢測結果 抗-A結果為40% mf, B細胞4+, 其他陰性。

2.2.2 人源試劑及抗-H檢測結果 人源抗-A結果為40% mf﹑人源抗-B結果為陰性；抗-H結果為4+。

2.2.3 毛細管離心分離檢測結果 近心端和遠心端抗-A結果分別為5% mf﹑50% mf；近心端和遠心端抗-B結果均為陰性。

2.2.4 基因分型及克隆檢測結果 A101。

3 討論

案例1的血清學試驗結果符合A3B3的反應格局, 但從人群中A﹑B亞型的分布頻率來看, 胡應明等［2］和許志遠等［3］報道無償獻血者中A3亞型的比例約為1/100 000, B3亞型的比例約為2/100 000, 據此推算, 真正A3B3亞型的比例約為1/5 000 000 000, 極為罕見, 如果血清學檢測結果出現A3B3的表現, 應該首先考慮排除其它原因造成的混合視野現象, 如嵌合現象﹑疾病影響(案例1為無償獻血者標本, 通過健康征詢已排除輸血史﹑移植史等)等。案例2患者無近期輸血史,排除了輸錯血造成的混合視野現象, 進行臨床追溯得知其為急性髓系白血病, 可判斷為白血病引起的抗原減弱。對于這兩例標本, 可以考慮采用毛細管離心分離方法, 檢測比較新鮮和陳舊紅細胞表面的抗原存在的差異來進行分析, 案例1的毛細管離心結果顯示新鮮和陳舊紅細胞表面抗原一致, 案例2毛細管離心結果顯示新鮮紅細胞表面抗原表達明顯弱于陳舊紅細胞；而生理原因形成的混合視野其新鮮和陳舊紅細胞表面抗原表達應該無差異, 疾病狀態(血液系統疾病)造成的混合視野可見新鮮和陳舊紅細胞表面抗原表達存在明顯差異。案例2新鮮細胞抗原比陳舊細胞明顯減弱, 這可能是由于白血病引起的A或B抗原表達缺失是由于A或B基因產物欠缺或者不足所致, 而不是由于酶的作用底物缺乏所致,故其陳舊細胞的抗原性強于新鮮細胞［4］。

案例1為嵌合體, 嵌合現象是同種抗體減弱或缺少的不常見原因。真正的嵌合現象很少發現, 大半見于同卵雙胎的人體, 有兩種種群的紅細胞終生存在與在體內。這兩種組群的紅細胞彼此都認為身體是自己的, 所以這些人不會產生抗-A或抗-B抗體, 而在其血清內沒有可檢出的同種抗體。若嵌合現象見于非同卵雙胎的人體, 則是雙受精的情況所引起, 而稱之為嵌合體［4］。

嵌合體通過的分子生物學檢測可以確認［5,6］, 由于案例1獻血者未聯系到其家人, 未能進行家系調查。其Rh分型檢測抗-C﹑抗-e出現了混合視野也從另一個側面印證了嵌合型的懷疑。這例標本也為我們對于混合視野的理解開闊了思路。嵌合體在血清學檢測不易與亞型的混合視野區分, 臨床工作中可能漏檢部分嵌合體, 需要對亞型表型的患者進行分子生物學檢測以便確認。

［1］ 劉達莊.免疫血液學.上海：上海科技出版社, 2007:41-47.

［2］ 胡應明, 何子毅, 陳金鳳, 等.東莞市無償獻血者ABO亞型和弱D型分布調查.臨床血液學雜志, 2014, 27(6):475-477.

［3］ 許志遠, 王濤.北京地區獻血人群ABO亞型研究.北京醫學, 2013, 35(8):712-714.

［4］ 杰夫·丹尼爾.人類血型.北京：科學出版社, 2007:57-58.

［5］陳愛蓉, 黃毅.罕見開米拉A3B3血型的分子生物學研究.實驗與檢驗醫學, 2012, 30(1):15-18.

［6］喻瓊, 鄭巖.嵌合體血型的研究進展.中國輸血雜志, 2010, 23(2):146-148.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.133

2015-08-19］

南陽市2014年科技攻關項目(項目編號：2014GG029)

473000 河南南陽市中心血站