呼吸道感染細菌培養及藥物敏感性試驗

卞永娟

呼吸道感染細菌培養及藥物敏感性試驗

卞永娟

作者結合相關文獻從培養基的選擇﹑接種方式及培養條件﹑初次培養24 h致病菌的選取與分純﹑結果報告與解釋等方面對呼吸道感染細菌培養及藥物敏感性試驗加以闡述, 進而明確病原體是進行感染性疾病治療的金標準。因此, 在技術上應盡量完善試驗條件, 爭取快速準確找到病原微生物。

呼吸道感染；細菌培養；藥物敏感性；試驗

引起呼吸道感染的常見細菌為革蘭陽性菌和革蘭陰性菌(肺炎鏈球菌﹑金黃色葡萄球菌﹑化膿性鏈球菌﹑流感嗜血桿菌﹑腦膜炎奈瑟菌﹑肺炎克雷伯桿等), 此外還有結核分枝桿菌等［1］。當懷疑呼吸道有細菌感染時, 建議先采樣進行細菌培養及藥物敏感性試驗, 同時根據病情決定是否經驗用藥, 等到培養及藥物敏感性試驗結果完成后及時調整用藥。隨著國家關于加強抗菌藥物規范使用文件的出臺, 臨床越來越重視細菌培養的必要性和重要性, 明確病原體是進行感染性疾病治療的金標準。因此, 在技術上應盡量完善試驗條件,爭取快速準確找到病原微生物。本文結合相關文獻就呼吸道感染細菌培養及藥物敏感性試驗加以闡述。

1 培養基的選擇

對于呼吸道病原體培養用的培養基應盡量滿足各類細菌的生長條件。通常選用包括哥倫比亞血培養基作為基礎培養基, 該培養基能夠使絕大多數的細菌生長, 用于細菌種類及比例的判斷及革蘭陽性菌的觀察與分離。巧克力培養基作為流感嗜血桿菌﹑卡他莫拉菌及其他革蘭陰性球菌, 如腦膜炎奈瑟菌及不動桿菌某些種的觀察和分離, 特別是流感嗜血桿菌只在巧克力培養基上才能夠生長良好［2,3］。

2 接種方式及培養條件

實驗室收到標本后應盡快接種。標本應先進行培養接種,再進行涂片, 以免在涂片過程中污染, 影響培養結果。根據涂片結果將拒收的不合格標本盡快通知臨床。涂片不合格,但已經接種的標本, 可報告培養的細菌種類及比例, 注明“疑似非下呼吸道標本”字樣［4］。

呼吸道標本的接種方法根據具體的標本類型略有不同。①上呼吸道來源的各類拭子在培養基一區進行反復涂抹。②痰液標本的接種應選取黃粘部位進行接種, 有條件的實驗室可以洗痰去掉唾液部分, 甚至將黏痰部位進行均質化后進行接種, 但整個過程應避免污染。③支氣管肺泡灌洗液標本應定量接種10 μl或20 μl。④組織標本應在無菌條件下研磨后接種, 若是針吸組織樣本可以直接接種到血培養基上, 用接種環將組織盡量鋪開與培養基充分接觸。

3 初次培養24 h致病菌的選取與分純

3.1 首次觀察時間為孵育后24 h, 對于生長不良的培養基應孵育48 h觀察第二次, 對于無菌生長的培養基應孵育72 h甚至更長時間才能做出無菌生長的報告。特殊細菌如結核分枝桿菌等應根據目的菌的生長情況延長培養時間。即使是24 h已經生長良好的培養基也應繼續培養48 h, 著重觀察有無類似博德特菌等慢生長菌的出現。

3.2 標本直接涂片鏡檢的結果可以用以指導解釋初次培養菌株情況的判斷, 培養基上的初培養菌種情況應當與標本涂片結果保持一致, 若一種甚至多種生長菌在標本涂片中沒有觀察到, 建議對標本進行雙人二次檢測。

3.3 可根據以下內容識別在培養基上生長的大量細菌為潛在的主要病原體, 而不屬于呼吸道正常菌群。①若一種菌株在培養基第二區甚至是更高區域生長的數量為中量或大量；②在標本涂片中為主要可疑致病菌但在培養物中數量較少；③雖然只在培養基第一象限生長, 但為純培養物沒有其他呼吸道正常菌群生長, 同時標本格蘭染色顯示是膿性標本。

3.4 痰涂片結果和培養結果不一致的原因分析 ①由于痰標本在進行培養和涂片時選取的部位不一致。②某些快生長菌所占比例并不多, 但由于其生長速度快﹑營養要求低, 能夠在培養過程中迅速變為優勢菌, 掩蓋了其他菌的生長, 造成結果不一致。③標本從采集到接種的時間過長, 造成一部分苛養菌死亡, 特別是流感嗜血桿菌, 在涂片中看到的只是菌體殘骸, 而非活菌［5］。

4 結果報告與解釋

呼吸道標本的細菌學檢查結果通常由涂片報告﹑培養及藥物敏感性報告組成。培養及藥物敏感性報告是對臨床更具有指導性意義的報告。

培養結果的參考價值一方面取決于患者的癥狀﹑特征,另一方面要結合痰涂片的結果判斷痰標本是否合格才能進一步參考。一份呼吸道標本細菌學檢查報告包括正常菌群部分﹑條件致病菌以及該菌的藥物敏感性試驗結果及解釋結果。正常菌群通常以半定量的形式報告, 在此處若不合格痰標本還會標注“疑似非下呼吸道標本字樣”, 以提示臨床醫生對此報告的參考程度。

痰標本細菌學培養報告通常有陰性報告和陽性報告。臨床可以參考此報告進行抗菌藥物治療, 具有重要的臨床參考價值［6］。

5 小結

在使用抗生素前, 應先收集標本, 對感染病原菌先進行培養和藥敏試驗, 然后根據試驗結果來選擇合適的抗生素,才能在臨床上正確使用抗菌藥物, 減少耐藥菌株和菌群失調的出現, 有的放矢及時治愈疾病。

［1］陳再玲. 654例下呼吸道感染患者痰培養病原菌及其藥物敏感試驗分析.中國醫學創新, 2012, 9(23):138-140.

［2］傅石明. 改進痰培養標本篩選方法的探討.中華醫院感染學雜志, 2012, 22(9):1991-1992.

［3］王惠萱, 李雪梅, 滕毅, 等. 臨床痰標本檢驗前期處理新方法研究. 國際檢驗醫學雜志, 2010, 31(8):898-899.

［4］賴群清. 住院老人痰標本細菌培養結果分析. 海南醫學, 2010, 21(3):59-60.

［5］陳麗華, 杜娟.痰標本直接涂片與細菌培養結果分析. 基層醫學論壇, 2012, 16(35):4729-4730.

［6］張旻, 盧少華. 500份痰標本細菌培養和藥敏試驗結果分析.中國醫藥科學, 2013, 3(24):121-122.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.196

2015-06-19］

136000 吉林省四平市結核病醫院