常見動物疫苗的免疫佐劑

裴國鋒（河北省張家口市動物疫病預防控制中心 075000）丁勇（河北省懷安縣畜牧水產局動物疫病預防控制中心 076150）

常見動物疫苗的免疫佐劑

裴國鋒（河北省張家口市動物疫病預防控制中心 075000）丁勇（河北省懷安縣畜牧水產局動物疫病預防控制中心 076150）

著重介紹現代疫苗生產工藝中常見的幾種佐劑各自的優缺點及運用范圍及佐劑的作用功能。

疫苗；佐劑；種類；優缺點；適應范圍；作用

隨著養殖業快速高效發展，現代化、集約化、規模化養殖成為養殖主體，相應需求的動物疫苗也極具提高增加，為了使疫苗發揮其極大地免疫原性而用到一些佐劑，佐劑可使非特異性地通過物理的或化學的方式與特異性免疫反應物質結合，從而誘發肌體產生長期、高效的特異性免疫反應，提高肌體保護能力。隨著分子生物學技術的迅速發展，研制出的新型基因疫苗純度高、特異性強、分子小、免疫原性相對較差，難以產生足夠的免疫應答也需要一些佐劑來提高免疫原性。

1 根據佐劑的性質分類

1.1 微生物及其組分

微生物有百日咳桿菌、沙門氏菌、分枝桿菌、乳桿菌、李氏桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、諾卡氏菌、副粘病毒和細小病毒等。微生物組分有如G-（革蘭氏陰性菌）提出的脂多糖（CPS）和酵母多糖及真菌提出的香菇多糖以及中藥提取的各種多糖。

1.2 非微生物物質

按分子量大小和性質可分為以下四類。

1.2.1 高分子物質

核酸、人工合成多核苷酸、聚丙稀酸、丙稀酸等。

1.2.2 低分子物質

有機物的類脂、VA和無機物的硫酸鋁、磷酸鋁、氫氧化鋁等。

1.2.3 油類

植物油和礦物油等。

1.2.4 表面活性物質（乳化劑）

某些陰離子、表面活性劑和陽離子表面活性劑。

1.3 藥物類

有左旋咪唑、梯洛龍和D—青霉素胺類；中藥類有黃芪、冬蟲夏草、天麻和苦參等及其提取物和黃芪多糖、冬蟲夏草多糖等。

2 根據佐劑在體內的存留時間分類

2.1 貯存型佐劑

是膠體性佐劑與抗原混合接種，使其在注射部位存留較長時間，以便緩慢釋放抗原，形成持續地刺激免疫系統，而形成堅強免疫。如：油佐劑（SPOM白油）、鹽類鋁膠佐劑不融合佐劑等[1]。

2.2 非貯存型佐劑

這類佐劑不與抗原混合，分別在不同部位注射也可出現良好效果，又稱其為中樞性佐劑，又可分為微生物與非微生物佐劑[1]。

2.2.1 微生物佐劑

微生物及其產物，多種細菌如大腸桿菌、魏氏梭菌[2]、波氏桿菌和真菌及產物等。

2.2.2 非微生物佐劑

（1）核酸及其類似物：DNA、RNA、低核苷酸、多聚核苷酸和環磷腺苷等。（2）表面活性劑：吐溫-80、司班、卵磷脂類作物、溴十八烷基三甲胺類似物等。（3）藥物類：左旋咪唑、蜂膠等。

3 常用佐劑及其制備

3.1 油乳（佐劑常見是油包水型乳劑）

即它的作用機制是抗原被油包圍形成微結構內，使之貯存而緩慢釋放，刺激機體免疫細胞而出現免疫應答，產生抗體。主要有：弗氏佐劑分完全與不完全兩種，白油與SPON（司班）等。白油佐劑配方之一，10號白油94ml、司班-80 6ml（或吐溫-80 6ml）、硬脂酸鋁2g[3]，經過121℃滅菌20min，即可作為油相使用。白油85%乳化劑15%，混合過濾菌即成為佛氏不完全佐劑（FIA）；而向其中加入0.5mg/ml死結核桿菌或卡介苗，即為完全佛氏佐劑（FCA）。

3.2 蜂膠佐劑

蜂膠是由蜜蜂腭腺的分泌物和蜜蜂采的天然有機物，以及蜂蠟和花粉等組成。內含樹脂芳香油、花粉及20多種酮類化合物以及VB1、VP、VA，多種氨基酸、酶和多糖等成份，是一種天然的免疫增效劑和刺激劑，具有增進機體免疫功能和促進組織再生作用，具有廣譜抗微生物作用，研究證明，應用蜂膠作為機體的免疫增效劑，能顯著提高機體內抗體含量，增強吞噬細胞的吞噬能力。蜂膠的用法是將蜂膠用水—酒精乳化或用聚乙烯乙二醇，稀釋蜂膠效果更好，但國內常用水—酒精乳化蜂膠，常用蜂膠作佐劑的疫苗有雞大腸桿菌苗滅活蜂膠苗的研制[4]、禽霍亂蜂膠疫苗、兔各種蜂膠苗、雞痘蜂膠苗等。

3.3 脂質體佐劑

它是由一層或數層同化圓排列的連續脂質分子組成的內含水相空間而形成的，其成分主要是天然形成的磷脂，如磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺，也含有膽固醇、硬脂酸胺、磷脂酸和二酰基磷酸等成分，磷脂的酰基鏈越長飽和程度越高，則佐劑性越強。它兼具佐劑和載體功能，類似細胞膜的微球體。脂質體能將抗原傳遞給合適的免疫細胞，具有靶向作用[5]，脂質體可以說無毒、無免疫原性，且在體內能降解，是一種良好的佐劑。在細菌類、病毒類、寄生蟲類以及腫瘤類脂質體疫苗的開發中報道了很多。而納米正電荷脂質體將能順應疫苗研究的發展方向，有助于提高蛋白質疫苗和基因疫苗的細胞免疫效應，有大量試驗。

3.4 藥物類佐劑

3.4.1 中藥佐劑—多糖類佐劑

甘草、冬蟲夏草、天麻、黃芪、苦參、香菇多糖和靈芝多糖類等均有很好的免疫佐劑或免疫增效劑。各類多糖是一種良好的生物反應調節劑和無細胞毒性的免疫促進劑，不僅能激活T細胞、B細胞、巨噬細胞、NK細胞、TL細胞等免疫細胞，還能促進巨噬細胞分泌IV-I、腫瘤壞死因子，促進T淋巴細胞產生IL-2，激活白細胞，產生干擾素（IFN），通過不同的途徑激活人體系統和網狀內皮系統等。黃芪多糖及其制劑，稀釋疫苗如豬瘟、高致病藍耳、兔出血癥滅活凍干苗（兔瘟）等合用，能迅速刺激體液免疫且可較長時間維持較高水平。

3.4.2 左旋咪唑

可以恢復外周免疫細胞的功能，可使低活性的T細胞、巨噬細胞和中性細胞的功能恢復正常水平，若B細胞功能呈病理性亢進時，又能使之降低正常水平。左旋咪唑既是免疫扶正劑也是免疫調節劑，還可誘導T細胞中性細胞分化成熟，使T細胞轉化為致敏的T細胞，產生MHF和MIF等淋巴因子，再進一步活化巨噬細胞。左旋咪唑的主要代謝產物是一種巰基化合物，能促進細胞內微生物管的形成，因而增強細胞功能，它還有胸腺激素的類似作用，誘導T細胞成熟、增強外周T細胞巨噬細胞和中性顆粒細胞的活性。也被用做佐劑的一種重要物。

3.5 微生物成分及其產物佐劑

某些微生物或菌體成分同其他抗原一起注射，具有明顯的佐劑效應。有佐劑活性的微生物有分枝桿菌（結核桿菌、卡介等）及某些有百日咳桿菌、綠膿桿菌、布氏桿菌、大腸桿菌、魏氏梭菌的脂多糖、革蘭氏陽性菌有葡萄球菌、鏈球菌、短小棒狀桿菌、乳桿菌等。還有霍亂弧菌毒素和酵母菌的脂多糖。常見的有卡介菌（BCG）。免疫作用：促進細胞免疫功能，能促進單核巨噬細胞系統增生，增加吞噬細胞和外周淋巴組織的免疫活細胞釋放可溶性介質，激活巨噬細胞、TH和ETC等免疫細胞的功能，使宿主細胞免疫與抗腫瘤作用增強，活性成分及其作用，主要刺激細胞免疫，而死的BCG則可增強體液免疫。如用酚滅活BCG的甲醇提取物（MER）和細胞碎片、蛋白酶處理所得的不溶血性細胞壁骨架（CWS）均具有抗腫瘤作用。BCG水溶性物質、細胞膜組分和去脂菌體能刺激免疫作用，結核菌素的純蛋白微生物（PPD）則刺激骨髓免疫細胞分裂增殖。短小棒狀桿菌功能激活單核巨噬細胞系統，對體液免疫作用、對NK細胞的作用，對NK細胞的作用即NK細胞對癌腫細胞有特異的細胞毒作用。乳酸桿菌、人工合成胞壁酰二肽的新型佐劑。細菌脂多糖作用環依賴T細胞的B細胞克隆，使之分化為漿細胞產生抗體，作用于巨噬細胞系統，導致產生并分泌淋巴因子和白細胞介素，進而活化淋巴細胞，增強細胞免疫，CPS能調節巨噬細胞表面抗原，增強其抗原呈遞能力。

3.6 鹽類鋁膠佐劑

通過鋁粉加火堿合成法、明礬加磺酸鈉合成法、明礬加氨水合成法、三氧化鋁加氫氧化鈉合成法獲得，常見有氫氧化鋁、明礬佐劑、磷酸三鈣佐劑三種，但常用的是AI（OH）3佐劑。它的應用非常廣泛，是現在唯一被IDA批準的人、獸醫可應用的佐劑，是一種有效地誘導疫反應的佐劑，而氫氧化鋁成本低廉、無毒，使用方便，是胞外繁殖的細菌及寄生蟲抗原的良好免疫佐劑，但它的存在有明顯的缺點：輕度局部反應，易形成肉芽腫，極少數的發生局部無菌性膿腫，可能對人、畜神經系統有影響，現階段對誘發老年性癡呆在研究探討中；它可主要激活TH2免疫細胞誘導體液免疫應答，不能明顯地誘導細胞介導免疫應答，只適用于以抗體為主要保護性免疫的疾病疫苗，如乙肝麻疹等；比FCA釋放抗原物質的效應弱得多，同時對許多抗原都不同的有效，主要適用于免疫力強和可大量生產的抗原。

4 免疫佐劑的作用機理

4.1 對抗原的作用

增強抗原的表面積；增強T淋巴細胞和B細胞的協同作用；延長抗原在組織內的貯存時間。

4.2 對抗體的作用

引起接種部位細胞浸潤；加速淋巴細胞轉化作用；引起細胞膜與細胞漿的變化；細胞功能的改變；非特異性免疫增強作用。

[1]徐貴卿,房海,樸范編譯.獸醫生物制品學[M].河北科學技術出版.

[2]丁勇.兔瘟、巴氏桿菌、魏氏梭菌、波氏桿菌四聯苗的研制[J].上海畜牧獸醫通訊,1999（3）:7-9.

[3]丁勇.ND-IBD-EDS76三聯油佐劑滅活疫苗的研制[J].畜牧與獸醫,1998（6）:266.

[4]丁勇.雞大腸桿菌滅活蜂膠苗的研制[J].中國獸醫科技,1997（10）:43.

[5]苗玉清.免疫佐劑的種類[J].中國畜禽種業,2014（7）:30.

丁勇（1970.3-），河北省懷安縣人，畜牧獸醫師，主要從事畜牧、獸醫臨床、實驗室化驗、疾病預警、動物疫病防控技術、生物制品的研制與推廣應用等工作，現發表論文120篇，其中國家級刊物80余篇。