RP－HPLC 法測定馬齒莧中木犀草素的含量

□郭曉宇

馬齒莧為馬齒莧科一年生草本植物。首載于《神農本草經》。《本草綱目》記載:“其葉并比如馬齒，而性滑利似莧，故名。”因葉青、梗赤、花黃、根白、子黑又稱為五行草、五方草或五行菜。它又稱“長壽菜”或“長命菜”，含有非常豐富的人體必需營養物質，有助于保護健康，延長壽命。我國固有的馬齒莧屬植物共有6 種，即馬齒莧、毛馬齒莧、大花馬齒莧、四瓣馬齒莧、沙生馬齒莧和小琉球馬齒莧，其中馬齒莧最為常見。馬齒莧作為國家衛生部認定的既可藥用又可食用的野生植物之一，在我國各地分布比較廣泛。其有消炎、解暑、利濕、利尿等功能。

據研究，馬齒莧藥用、食用功能意義重大，使得應用前景較為廣泛。目前，雖有文獻報道研究其化學成分，但采用高效液相色譜的方法測定其中成分的鮮有報道。為提高該物應用的安全性，有必要對其進行質量控制。本研究采用RP －HPLC 法測定其木犀草素的含量，該方法簡便、快捷、準確、可靠、重復性好，可為其的質量監測提供一定的理論依據。

一、儀器與試藥

(一)儀器。高效液相色譜儀。

(二)試藥。木犀草素對照品(批號:111520 －200201)，購于中國食品藥品檢定研究院;馬齒莧(市售);甲醇為色譜純，磷酸為分析純，乙腈為色譜純，水為重蒸水。

圖1 對照品和樣品HPLC 圖

二、方法與結果

(一)標準品溶液的制備。準確稱量恒重的木犀草素標準品10．12mg，放入50ml 容量瓶中，用甲醇作為溶劑進行稀釋定容，濃度即為0．2024 mg/mL 的木犀草素標準品溶液。

(二)樣品溶液的制備。稱取經干燥粉碎的馬齒莧約10g，精密稱定，放于三角瓶中，加入100ml 甲醇，攪拌均勻，超聲處理(250 W，50 kHz)提取30min，冷卻至室溫，加入甲醇補足量，過濾，留濾液。

(三)色譜條件與系統適應性試驗。色譜柱:shim－pack VP－ODS C18(250 mm×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈－0．2%磷酸水溶液(60:40);進樣量:10 μL;流速1．0 mL/min。各主成分與相鄰峰之間的分離度大于1．5。

分別取對照品和供試品溶液注入高效液相色譜儀中進行測定。(見圖1)

(四)線性關系。精密稱取木犀草素11．54 mg、放入10ml容量瓶中，定容用甲醇，之后精確吸取0．1 mL、0．5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。注入液相色譜儀分析，以峰面積對濃度做線性回歸方程，結果見表1。

表1 回歸方程、相關系數和線性范圍表(n= 6)

(五)穩定性試驗。按照上述條件，取樣品每隔4h 進行測定，進樣6 次，以測定其穩定性能，測得木犀草素峰面積的RSD為1．2%。結果表明供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

(六)精密度試驗。得出結果樣品的穩定性能在24h 以內是良好的。

表2 加樣回收率實驗數據表

(七)重復性試驗。取樣品6 份，按樣品溶液的制備方法制備溶液并依法測定，結果木犀草素含量的RSD 為0．6%(n =6)，結果表明重復性良好。

(八)回收率試驗。準確量取樣品適量，加入適量的標準品，按上述方法處理，計算回收率，得出本實驗方具有較好的加樣回收率，結果見表2。

(九)樣品含量測定。按樣品溶液項下制備方法和色譜條件對3 批樣品中木犀草素進行分析，計算含量，結果見表3。

表3 樣品中各成分含量測定結果

三、結果與討論

(一)流動相的選擇。本研究分別考察乙腈－水、甲醇－水以及乙腈－0．2%磷酸水溶液作為流動相，結果顯示，乙腈－0．2%磷酸水溶液(60:40)作為流動相，色譜峰峰形對稱，分離效果好，分離度大于1．5，理論塔板數高，木犀草素拖尾小且無雜峰干擾。

(二)檢測波長的選擇。本研究選用木犀草素成分的最大吸收波長為設定波長，采用該波長方法檢測，分析簡便、快捷。

(三)提取方法的選擇。本實驗對提取溶劑、提取溶劑的溶度、提取時間、提取方法等進行綜合考察。結果表明，樣品提取時，超聲儀采用功率為250 W，頻率為50 kHz，超聲30 min 提取完全，效果好，操作時間短，故供試品溶液采用上述制備方法。

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