高譜對銀杏葉黃酮內酯含量的測定及銀杏葉的鑒用

阮成鋒 阮成鈞

（河南省信陽市潢川縣人民醫院中藥房，河南 信陽 465150）

1 銀杏葉的含量測定

1.1 儀器與試藥：①高效液相色譜儀。②微量注射器。③分析天平。④水浴鍋，分析漏斗蒸發器。⑤甲醇。⑥蒸餾水。⑦C18色譜柱，⑧銀杏總黃酮醇苷，萜類內酯對照品。⑨銀杏葉。⑩甲醇-40%磷酸、五氧化二磷、醋酸乙酸等。11微孔濾膜（0.45 mm）有機組。

1.2 總黃銅醇進行含量測定

1.2.1 利用高效液色譜條件與系統適用性進行試驗：用十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）為流動組，檢測波長為360 nm。理論塔板數按槲皮素峰計算應不低于2500、山奈素峰與異鼠李素峰的分離度應＞1.5[1]。

對照品溶液的制備：分別精密稱取五氧化二磷干燥的槲皮素，山奈素，異鼠李素對照品，各加甲醇制成每1 mL含槲皮素0.03 mg、山奈素0.03 mg、異鼠李素0.02 mg的溶液作為對照品溶液。

供試品溶液的制備：取銀杏葉20 g，除去雜質精密稱定，研細取約相當于總黃酮醇苷19.2 mg的粉末，精密稱定，精密加入甲醇20 mL稱定重量超聲處理20 min，放冷。再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，置100 mL錐形瓶中，加甲醇10 mL，25%鹽酸溶液5 mL，搖勻，置水浴中加熱回流30 min，迅速冷卻至室溫轉移至50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微子（濾膜0.45 mm）濾過，去濾液，既得。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 mL注入液相色譜儀，測定。分別計算檞皮素，山奈素，和異鼠李素的含量，測定出總黃酮醇苷的含量。

1.2.2 用高效液色譜儀再對萜類內酯含量進行測定。高效液色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑以正丙醇-四氫呋喃-水（1∶15∶84）為流動相，用蒸發光散射檢測器檢測，理論塔板數按白果內酯峰計算應不低于2500，白果內酯峰與銀杏內酯C峰的分離度應＞1.5。

對照品溶液的制備：分別精密稱取白果內酯，銀杏內酯A銀杏內酯B和銀杏內酯C對照品適量加甲醇制成每1 mL含銀杏內酯A 1 mL，銀杏內酯B 1 mL銀杏內酯C 1 mL的混合溶液既得。

供試品溶液的制備：取銀杏葉20 g，除去雜質，精密稱定，研細，取相當于總黃酮醇苷的76.8 mg、萜內酯19.2 mg的粉末，精密稱定。精密加入甲醇50 mL稱定重量，超聲處理20 min，放冷再稱重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20 mL回收甲醇殘渣加水10 mL，置水浴中溫熱使溶散加2%鹽酸溶液2滴，用乙酸乙酯振搖提取4次（15、10、10、10 mL）合并提取液，用5%醋酸鈉溶液20 mL洗滌，分取醋酸鈉液，再用醋酸乙酯10 mL洗滌。合并醋酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次20 mL，合并水洗液，用醋酸乙酯10 mL洗滌，合并醋酸乙酯液，回收醋酸乙酯至干，殘渣用丙酮溶解并轉移至5 mL量瓶中，加丙酮至刻度，搖勻，既得。

用測定法：分別精密吸取對照品溶液10、15 μL，供試品液10 μL，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程分別計算白果內酯，銀杏內酯A銀杏內脂B銀杏內酯C的含量。既得。本品每片含萜類內酯以白果內酯（CH15H18O8），銀杏內酯A（C20H24O9）銀杏內酯B（C20H24O10）銀杏內酯C（C20H24O11）的含量之和記。

2 銀杏葉屬性

2.1 銀杏葉屬綱：銀杏葉屬銀杏綱Ginkgopsida植物為落葉喬木，枝條有長短枝之分。單葉，扇形，先端二裂，葉脈二叉狀分枝。花雌雄異株，精子具多纖毛。種子核果狀[2]。

2.2 銀杏葉屬科：銀杏葉屬銀杏科Ginkgoaceae：它的形態特征是落葉喬木，營養性長枝頂生，葉螺旋狀排列，稀疏，有較長的葉柄：生殖性短枝側生，葉簇生。葉片扇形，2裂。雄球花葇荑花序狀，雄蕊多數具短柄，花藥2室：雌球花具長柄，柄端有兩個杯狀心皮，又稱珠托，其上各生一直立胚珠，長一個發育。種子核果狀：外種皮肉質，成熟時橙黃色：中種皮白色，骨質：內種淡紅色，紙質。胚乳肉質。

3 性狀鑒別

葉片多皺折或破碎，完整呈扇形，長4～8 cm，寬5～10 cm，上緣有不規則波狀缺刻，有的中央凹入，基部楔形，葉脈細密，為多數二叉狀平行脈；葉柄長2～7 cm。紙質，易縱向撕裂。氣微，味微澀。以色黃綠、完整者為佳。分布：僅有一屬一種和幾個變種，產于中國及日本。

4 化學成分

銀杏葉的有效成分為黃酮類：其中有3種雙黃酮：①單黃酮類主要為槲皮素，山奈酚和異鼠李素及它們形成的苷類物質。②雙黃酮類化合物主要有銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、去甲銀杏雙黃酮、穗花衫黃酮、金松雙黃酮及1-5甲氧基去甲銀杏雙黃酮等。③茶素類主要有兒茶素、表二茶素、沒食子酸兒茶素和表沒食子酸兒茶素等[3]。除此之外，還有苦味質，酸性化合物，萜內酯主要有銀杏內酯A、B、C、M、J和白果內酯等。

5 銀杏葉的藥理作用

①對心血管系統的作用：從銀杏葉中提取的黃酮醇對豚鼠離體心臟灌流能引起冠狀血管擴張；注射給藥對豚鼠后肢血管亦有擴張作用。葉的粗提物（每毫升含總黃酮甙4.263 mg）可對抗腎上腺素所致離體兔耳的血管收縮作用，總甙的作用較弱；對麻醉兔肌肉注射臨床用量的20～40倍，對血壓、呼吸均無影響。②對腦血管系統的影響：葉的提取制劑口服或靜脈注射，可使帕金森病患者的腦血流量增加，改善腦的營養[4]。銀杏葉制劑（CBE）能增加腦血流量，對腦細胞缺血缺氧，腦水腫有保護作用。③對血小板聚集，血栓形成的影響：銀杏內酯可濃度依賴性地仰制血小板活化因子（PAF）誘導的血小板聚集，但對花生四烯酸及adp誘導的血小板聚集幾無影響。④對呼吸系統的影響：槲皮素具有良好的祛痰作用，能促進痰液分泌和氣管纖毛運動β-谷甾醇有鎮咳祛痰的作用。⑤鎮痛：皮下注射銀杏葉總黃酮可顯著減少醋酸所致小鼠扭動次數，皮下注射和側腦室注射銀杏葉總黃酮均可顯著提高小鼠熱板法祛痛。

6 銀杏葉的臨床運用

銀杏葉可廣泛用于帕金森病、腦血管病、冠心病、心絞痛、高膽固醇血癥等癥的治療[5-8]。

7 總 論

本實驗通過銀杏葉高效液色譜法，所建立的基于高效液相色譜法進行化學分析同時，測定銀杏葉提取物中總黃酮醇苷和萜類內酯的含量及鑒別應用，具有快速、高效、簡單、準確的特點，該方法為提高銀杏葉提取物及其制劑的質量控制水平，準確全面地評價其內在品質提供了有力的技術數據。保證了療效使臨床用藥更加安全有效。

參考資料

[1]梁生旺.中藥制劑分析[M].北京:中國中醫藥出版社,2002:135.

[2]姚振生.藥用植物學[M].北京:中國中醫藥出版社,2002:215.

[3]匡海學.中藥化學[M].北京:中國中醫藥出版社,2002:178.

[4]侯佳玉.中藥藥理學[M].北京:中國中醫藥出版社,2002:151.

[5]李靜玲,林小鳳,馮鵬,等.銀杏葉提取物保護心肌缺血再灌注損傷的研究進展[J].臨床合理用藥雜志,2013,6(25):180-181.

[6]劉馨雨,鄭詠秋,劉建勛.銀杏葉有效成分抗腦缺血再灌注損傷作用的機制研究進展[J].世界中醫藥,2013,8(10):1142-1146.

[7]呂錫亮.中藥治療帕金森病方法及其藥理作用研究[J].亞太傳統醫藥,2013,9(7):62-63.

[8]孫秀玲.銀杏葉制劑的臨床應用[J].中國醫藥指南,2014,12(35):262-263.