冬春兩季應加強豬流行性腹瀉的綜合防控

劉 釗，曾智勇，王偉丞，代振江

（1.貴州大學 動物科學學院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省動物疫病研究室，貴州 貴陽 550025）

冬春兩季應加強豬流行性腹瀉的綜合防控

劉 釗1，曾智勇2*，王偉丞2，代振江2

（1.貴州大學 動物科學學院，貴州 貴陽 550025；2.貴州省動物疫病研究室，貴州 貴陽 550025）

冬春兩季常是“冬痢”的高發季節，近2年來該病呈現出僅以豬流行性腹瀉病毒（PEDV）感染為主，而非之前的傳染性胃腸炎病毒（TGEV）或TGEV和PEDV共感染為主，臨床上主要表現為嚴重腹瀉、脫水和急劇消瘦死亡為主要特征，現已給中國、美國、日本等國家的養豬業造成了巨大的損失，歐盟目前也已責令嚴防PEDV的傳入。盡管該病在我國主要于2012前后呈現暴發流行，現多為散發，但入冬后仍需引起重視，采取積極措施予以綜合防控。

豬流行性腹瀉；冬痢；綜合防控

冬春兩季常是“冬痢”的高發季節，造成“冬痢”的主要原因是由傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）和輪狀病毒(RV)等單獨或混合感染引起的，但目前主要是由豬流行性腹瀉病毒引起[1]。豬流行性腹瀉在世界范圍內流行極為廣泛，如韓國、泰國、越南、日本等均有本病發生的報道。2010—2013年PEDV在中國各地呈暴發流行，造成大量哺乳仔豬的死亡，嚴重影響了我國養豬業的健康發展。霍金耀等人對采集于河南、山西、安徽和河北4個省份的82家豬場的糞樣進行雙重RT-PCR檢測，結果表明PEDV陽性率高達62.2%[2]。2010—2012年，采自華中地區11個城市的182家豬場的腹瀉糞樣，經RT-PCR檢測，PEDV陽性率高達60.44%[3]；截至2014年6月16日，豬流行性腹瀉（PED）疫情在日本已擴散至38個道縣的766家農場，共暴發766起疫情，98萬多頭豬感染，28萬多頭豬死亡；該病自2013年4月在美國首次發現以來，截至 2014 年6月11日，美國已有30個州的實驗室在7 250個豬群中檢測到PEDV陽性病例，僅2013年因PED就造成約300萬頭仔豬死亡，持續到2014年預計可造成700萬頭仔豬的死亡[4]。目前，美國及歐盟相關國家正在積極應對PEDV擴散，并對PEDV進行了大量的研究。冬春季節正值該病的高發期，盡管該病在我國主要于2012年前后呈現暴發流行，現多為散發，但仍需引起重視，采取積極措施予以綜合防控。

1??病原學特征

PEDV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，為球形囊膜病毒(95～190 nm)。該病毒基因組是單股正鏈RNA，基因組長為27 000～33 000個核苷酸(nt)，靠近3′端5 kb區域內有5個主要的開放閱讀框(ORF)，可編碼4種結構蛋白，即S蛋白(spike protein)、E蛋白(Envelope protein)、M蛋白(membrane protein)和N蛋 白(nucleo protein)。PEDV引起的嚴重腹瀉脫水是導致病豬死亡的主要原因。仔豬在感染PEDV時，PEDV在仔豬空腸中后段、回腸、盲腸黏膜絨毛柱狀上皮細胞內復制、增殖，由于病毒增殖首先造成細胞器的損傷，繼而出現細胞功能障礙，破壞腸黏膜柱狀上皮細胞，引起腸絨毛裸露、斷裂、融合及腸上皮細胞內各種酶類活性降低或失活，導致營養物質吸收障礙、呈現滲透性腹瀉，造成豬只脫水、腹瀉，甚至衰竭、死亡[5]。

2??診斷方法

豬流行性腹瀉常發于寒濕較重的季節，近年來多呈地方性流行。不同年齡段的豬對該病毒均易感，病毒感染后對初生仔豬的危害最大，常致其整窩發病，病死率極高。由于PEDV、TGEV以及RV感染所致的臨床癥狀、流行特點和病理變化極其相似，難以根據臨床表現予以準確區分，所以應用實驗室手段對“冬痢”病原，尤其對PEDV進行快速準確的確診，對于目前該類疫病的防控具有重要意義。

目前，針對上述病原有多種檢測方法，如病毒的分離鑒定、反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）、熒光定量RT-PCR和膠體金免疫技術等。其中，反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）方法已成為應用最為廣泛的方法之一。

王偉丞等[6]根據分離到的GZ-ZY株的M基因序列建立了PEDV的RTPCR檢測方法，根據GenBank中登錄的PEDV參考毒株M基因序列，利用PrimePremier 6.0設計1對特異性引物，擴增目的片段大小約為681 bp。上游引物：5’-TCGGAATTCATGTCTA ACGGTTCT-3’，下游引物：5’-ACGC TCGAGTTAGACTAAATGAAG-3’，用所設計的特異性引物進行RT-PCR擴增，反應體系為50μL，其中2 ×1Step Buffer25μL，總RNA 5μ L，PrimeScriptTMOne Step Enzyme Mix 2μL，PEDV上下游引物各1μ L，RNase Free H2O 16μL。反應條件：50 ℃ 40 min；94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃延伸10 min。此法可有效檢出糞樣及細胞中的PEDV。此 外，D.S.Song等建 立的PEDV、TGEV、RV的多重RT-PCR方法檢測157份仔豬臨床腹瀉病料，PEDV、TGEV、RV陽性率分別為26.3%、2.7%和13.2%，該方法敏感性高、特異性強，具有較高的臨床實用價值[7]。

盡管病毒分離鑒定是疫病確診的經典方法，但由于PEDV的分離培養敏感細胞主要系Vero傳代細胞，且培養條件較為苛刻，難以實現臨床樣品的快速準確診斷。

3??綜合防控

該病的發生主要是冬春交替之際，寒濕困于脾胃，機體抵抗力下降，病毒侵入機體而引起，因仔豬脾胃發育不全故最易發病[8]。當前豬流行性腹瀉的防治仍無特效方法，所以加強飼養管理，加強防疫和對癥治療顯得尤為重要。

3．1 加強飼養管理

3.1.1 完善消毒措施

加強常規清洗與消毒。若豬場暴發豬流行性腹瀉，應首先迅速隔離發病豬只，并嚴密觀察對癥治療防止脫水；對豬舍進行徹底的清洗和消毒。病死豬需經深埋、潑灑燒堿或生石灰等進行無害化處理。

3.1.2 注意氣候變化

該病多發于冬春季節。原因是冬春季節氣溫變化頻繁、氣溫比較低，如果此時豬舍保溫措施不夠，導致仔豬機體抵抗力下降，很容易誘發仔豬的流行性腹瀉，因此一定要注意豬舍保溫。

3.1.3 防止交叉感染

應嚴格控制豬場內外的豬和人員流動，進出車輛要進行嚴格消毒。禁止生產區工作人外出，嚴禁飼養員之間串舍。新引進的種豬，必須隔離飼養30 d以上，確認健康后才能入群飼養，最好是實行“全進全出”的飼養方式。

3.1.4 提高豬群的營養水平

飼喂優質飼料，適當提高豬群日糧的蛋白質、氨基酸、維生素和微量元素等水平；給仔豬飼料添加檸檬酸，改善仔豬腸道微生態平衡，保證仔豬充足的飲水，可以在一定程度上降低PED的發生率[9]。

3．2 免疫預防

3.2.1 疫苗免疫

告別了依賴國外高價疫苗的時代，目前國內有很多生物制品公司都已經研制出免疫豬流行性腹瀉病毒的疫苗，多為基于CV777株的豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯滅活疫苗。一般主動免疫接種后7 d產生免疫力，免疫期為6個月。仔豬被動免疫的免疫期至斷奶后7 d。使用方法為按說明書上的頭份、劑量配制好疫苗后，后海穴位注射，進針時保持與直腸平行或稍偏上。妊娠母豬于產仔前20～30 d每頭注射1.5 mL；其所生仔豬于斷奶后7～10 d每頭注射0.5 mL。未免疫母豬所產3日齡以內仔豬每頭注射0.2 mL。體重25～50 kg育成豬每頭注射1 mL，體重50 kg以上成豬每頭注射1.5 mL。進針深度：3日齡仔豬0.5 cm，隨豬齡增大而加深，成豬4 cm。

3.2.2 關于免疫預防的一點思考

1）返飼的問題。很多學者在暴發 PED 后主張采用返飼的方法，但很多人并沒有掌握正確的方法。返飼只是個緊急應對措施，必須在短期內集中進行，使種豬群盡快度過帶毒和排毒期，千萬不能把返飼當作一種免疫方法應用[10]。鑒于其危險度，目前筆者不建議使用返飼進行PEDV的免疫。

2）疫苗免疫效果的檢測。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是世界衛生組織（WHO）推薦使用的檢測病毒的標準方法。此法具有敏感性強、特異性強、簡便、快速等優點，每次可測多個樣品，特別適于基層豬場大批豬血清樣品抗體水平的普查。但是目前市面上還沒有商業化的豬流行性腹瀉的ELISA試劑盒以供使用，亟待研究開發。

3．3 治療與保健

本病無特效藥，主要是對癥治療。豬只被感染后，如果不予以相應能量物質的補充，會導致豬只消耗自體營養儲備，加劇機體免疫水平下降，因此，應當對有癥狀和無癥狀的豬都進行補液，補充易消化、適口性好的飼料，增加營養，增強體質。

4??“血漿蛋白粉”傳播源的不確定性

2011年起至今，豬流行性腹瀉并未離開我們的視野，它暴發在大洋彼岸。2013年5月，豬流行性腹瀉在美國、加拿大先后暴發。加拿大食品檢驗局(CFIA)發布公告稱，血漿蛋白粉有可能是引發豬流行性腹瀉的罪魁禍首。血漿蛋白粉營養全價、平衡，富含多種功能性蛋白和未知促生長因子，能提高消化酶的分泌量和活性，提高飼料利用率，并且可以在一定程度上緩解應激。但是也有學者認為：飼料中的蛋白質含量已經足夠，如果再添加血漿蛋白粉，會造成機體蛋白質攝入量過多，蛋白質在體內的分解產物聚積也會影響正常的肝腎功能，增加肝腎負擔，同時還會造成免疫力低下；過多還容易造成仔豬腹瀉；血漿蛋白粉如果滅活不徹底，很有可能帶有某些病毒，造成疾病傳播。因此，為了規范使用血漿蛋白粉，中國農業部制定了《飼料原料目錄》并于2013年1月1日起施行，其中明確規定：以屠宰食用動物得到的新鮮血液分離出的血漿為原料，經滅菌、噴霧干燥獲得的產品。原料應來源于同一動物種類，不得使用發生疫病和變質的動物血液。

[1] 徐汝憲，吳柳鋒，張世廣，等. 冬春季仔豬腹瀉的病因及防控措施[J]. 中國畜牧獸醫文摘， 2014(3)： 156.

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[10] 陳志林，衛恒習，李 莉，等. 返飼對仔豬流行性腹瀉的防控效果[J].豬業科學， 2014，31(5)： 132-135.

2014-11-21）

劉釗（1989-），男，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學。E-mail:491486510@qq.com

曾智勇（1978-），男，教授，博士，碩士生導師，從事動物傳染病病原分子生物學研究。