抗內皮細胞抗體檢測對老年ANCA相關性小血管炎病情活動程度的影響

抗內皮細胞抗體檢測對老年ANCA相關性小血管炎病情活動程度的影響

蔣茵唐開獎宋星慧覃玉花韋陽妙

(廣西醫科大學第四附屬醫院，廣西柳州545000)

摘要〔〕目的探討抗內皮細胞抗體(AECA)檢測對老年抗中性粒細胞胞質抗體(ANCA)相關性小血管炎病情活動程度的預測價值。方法選取56例老年抗中性粒細胞胞漿抗體相關性小血管炎(AASV)患者作為觀察組，60例健康獻血者作為對照組，全部研究對象采集固定的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)為抗原，細胞酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清AECA，比較兩組患者AECA陽性率的差異，分析AASV患者AECA與臨床病情活動性指標的相關性。結果觀察組血清AECA陽性率明顯高于對照組(P<0.05)，不同類型AASV患者中的血清AECA陽性率比較發現，變應性肉芽腫性血管炎血清AECA陽性率明顯高于顯微鏡下多血管炎和肉芽腫性多血管炎，肉芽腫性多血管炎血清AECA陽性率明顯高于顯微鏡下多血管炎(P<0.05)，AASV病情活動期血清AECA陽性率、血清AECA和血沉(ESR)水平均明顯高于病情緩解期(P<0.05)，且AECA陽性組BVAS分值和ESR水平明顯高于AECA陰性組患者(P<0.05)。結論抗內皮細胞抗體在AASV診斷和鑒別診斷、病情活動程度預測中具有重要的價值。

關鍵詞〔〕抗內皮細胞抗體；抗中性粒細胞胞漿抗體；小血管炎

中圖分類號〔〕R593〔

通訊作者：唐開獎(1968-)，男，副主任醫師，主要從事風濕免疫學研究。

第一作者：蔣茵(1981-)，女，主治醫師，主要從事風濕免疫學研究。

抗中性粒細胞胞質抗體(ANCA)相關性小血管炎(AASV)是自身免疫性炎癥反應造成的中小血管炎癥性疾病，呈暫時緩解性或復發性，同時病情呈持續發展的免疫系統疾病〔1〕。AASV 疾病主要是指變應性肉芽腫性血管炎(EGPA)、顯微鏡下多血管炎(MPA)和肉芽腫性多血管炎(GPA)〔2〕。EGPA、MPA和GPA患者血液ANCA陽性表達率超于80%〔3〕，因此被稱之為AASV。AASV常累及全身多臟器損傷，臨床癥狀復雜，目前尚缺乏有效的病情活動程度的評價指標。AECA是血管炎癥性疾病的重要生物學標志，AECA在血管性炎癥患者中的變化及其臨床意義的研究較多〔4〕，但關于抗內皮細胞抗體檢測對老年AASV病情活動程度的預測價值研究較少。

1資料與方法

1.1臨床資料選取2009年1月至2014年1月我院住院部或門診部老年AASV患者56例作為觀察組，納入標準：年齡>60歲，均符合美國風濕病學會老年AASV活動期的診斷標準〔5〕，其ANCA陽性率>80%。同期選取60例健康獻血者作為對照組。觀察組男44例，女12例，年齡：60～74〔平均(67.42±6.31)〕歲，其中EGPA 10例，病程(77.01±13.06)個月，MPA 16例，病程(13.09±5.21)個月，GPA 30例，病程(10.31±3.11)個月；對照組男46例，女14例，年齡61～77〔平均(76.34±10.77)〕歲；兩組患者性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經通過本醫院倫理委員會批準，并獲取全部研究對象的知情同意。

1.2檢測方法全部研究對象空腹采集靜脈血，離心操作收集血清，采用細胞酶聯免疫吸附試驗測定AECA。具體步驟：抗原獲取通過體外分離和培養人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)，抗原鑒定通過人Ⅷ因子相關抗原免疫組化鑒定HUVEC符合內皮細胞的組織學特點。細胞酶聯免疫吸附試驗(Cyto-ELISA)法檢測：體外分離和培養HUVEC混合培養，形成單層內皮細胞，同時將其轉移至96孔細胞培養板繼續反復細胞培養種植。37℃、5%CO2環境下孵育，2 d后形成單層內皮細胞，磷酸鹽緩沖液(PBS)反復沖洗3次，采用0.5%Triton-X-100、0.2%戊二醛固定15 min，37℃環境下采用2%牛血清白蛋白封閉120 min，37℃環境下放入1∶50待檢測血清，120 min后放入酶標羊抗人IgM型抗體(Sigma 公司)，采用四甲基聯苯胺(TMB)顯色劑顯色，終止，讀取數值(P/N)，P(檢測值)/N(陰性對照數值)= P(檢測值)-B(空白對照數值)/N(陰性對照數值)-B(空白對照數值)。P/N數值大于正常對照組平均數值3個標準差則作為陽性。

1.3觀察指標比較AASV患者和健康獻血者、不同類型AASV(EGPA、MPA和GPA)、不同AASV病情活動程度間的AECA陽性率的差異。比較不同病情活動程度患者血清AECA陽性率的差異，其中治療前，血管炎癥狀較重，嚴重影響正常生活提示病情活動期，患者經有效治療后，血管炎癥狀明顯減輕，不影響正常生活提示病情緩解期。參照明翰血管炎臨床病情活動(BVAS)評分標準〔6〕，比較AECA陽性AASV患者和AECA陽性AASV患者間BVAS分值的差異，同時比較AECA陽性AASV患者和AECA陽性AASV患者間血沉(ESR)水平的差異，其中BVAS分值越高，ESR水平越高，病情活動程度越嚴重。

2結果

2.1組間血清AECA陽性率比較觀察組血清AECA陽性率(62.50%，35例)明顯高于對照組(3.33%，2例)(P<0.05)。EGPA血清AECA陽性率〔8例(80.00%)〕明顯高于MPA(43.75%，7例)和GPA(66.67%，20例)，GPA陽性率明顯高于MPA(P<0.05)。治療前病情活動期血清AECA陽性率(62.50%，35例)明顯高于緩解期(25.00%，14例)(P<0.05)。

2.2不同病情活動程度血清AECA和ESR水平比較治療前病情活動期血清AECA(1.75±0.61)和〔ESR(45.62±10.11)mm/h〕水平均明顯高于緩解期〔(1.08±0.14)，(16.52±8.01)mm/h〕(P<0.05)。

2.3AASV患者AECA與臨床病情活動程度的相關性AECA陽性組BVAS分值〔(18.32±6.21)分〕和ESR水平〔(58.31±11.31)mm/h〕明顯高于AECA陰性組〔(8.56±4.32)分，(24.47±8.21)mm/h〕(P<0.05)。

3討論

AASV是中小血管炎癥的類型之一，以血管壁炎癥為主要病理發病機制，導致了血管炎癥發生和器官組織供血異常、組織缺血壞死。由于多種臟器受累及，尚缺乏特異性的AASV診斷及其鑒別診斷、評價病情活動程度、治療效果和預后的有效方法。國內數據統計中小血管炎的發生率約20/100萬〔7〕，并呈逐年上升，但國內尚缺乏有效的統計學數據。臨床上根據其炎癥累及血管大小，病理特點、部位和類型評估其病情活動程度，病情較輕者可能表現為皮膚輕微病變，但病情較重的可能影響患者的視力，肺、腎、腦等重要臟器，導致多器官功能異常甚至是嚴重威脅患者的生命健康。AECA自Lindquist發現以來，其在血管炎癥性疾病中的作用機制成為熱門研究領域〔8〕。相關研究顯示AECA在血管炎癥性疾病中呈高表達狀態，是血管炎癥性病變和血管受損的重要標志，其高表達具有促進系統性血管炎癥疾病的發生和發展〔9〕。

本研究揭示了血清AECA陽性率在AASV的診斷和分類診斷中具有重要的意義，在不同AASV類型中血清AECA陽性率差異顯著，與文獻報道結果相一致〔10〕。另外血清AECA在病情程度的評估中具有重要的價值，與相關文獻報道具有高度相符性〔11〕。相關研究表明，緩解期AASV患者AECA陰性，且隨著病情的不斷緩解，其血清AECA水平不斷下降并逐漸趨于正常水平〔12〕。另有研究〔13〕表明，AASV疾病復發前期，其血清AECA呈升高趨勢，AECA持續陽性與復發風險明顯相關。在臨床治療期間，如發現AECA呈持續性陽性，則應維持性給予有效的臨床治療，AECA在指導臨床治療中亦具有重要的作用〔14〕。另一方面， 研究結果證實了AECA與AASV患者病情活動程度緊密相關。因此，AECA在AASV患者病情活動程度的預測中具有重要的價值。

4參考文獻

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〔2014-04-15修回〕

(編輯袁左鳴)