不同地區的東北龍膽根中獐牙菜苦苷含量分析

高娟，姜華

(1. 黑龍江農業經濟職業學院，黑龍江牡丹江157041；2. 牡丹江醫藥技工學校，黑龍江牡丹江157000)

不同地區的東北龍膽根中獐牙菜苦苷含量分析

高娟1，姜華2

(1. 黑龍江農業經濟職業學院，黑龍江牡丹江157041；2. 牡丹江醫藥技工學校，黑龍江牡丹江157000)

研究不同地區的東北龍膽，組間獐牙菜苦苷的含量差異。采用高效液相色譜法。結果表明：生長在不同地區的東北龍膽，獐牙菜苦苷的含量差異顯著，即生長環境不同，東北龍膽根中有效成分龍膽苦苷含量差異顯著。土壤類型因素對條葉龍膽根中獐牙菜苦苷含量的影響達到顯著水平。

東北龍膽；獐芽菜苦苷；含量分析

東北龍膽(GentianamanshuricaKitag.)，龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬(Gentiana)多年生草本植物，以中藥“龍膽”入藥，是一種常用中藥，具“瀉肝火，清濕熱，健胃”功能。東北龍膽主要藥效成分為龍膽苦苷和獐牙菜苦苷，其含量差異受遺傳和環境的共同作用，因此本論文設計不同的環境條件下，比較東北龍膽個體間有效成分含量的差異大小；比較在不同的土壤條件下個體間根中獐牙菜苦苷的含量差異。

1 實驗材料與方法

1.1 材料

東北龍膽植株采集于黑龍江五常小嶺地區、鏡泊湖、三江平原植株。植物生長年限為3年生植株。

1.2 方法

本文鑒于對東北龍膽獐牙菜苦苷含量分析研究，所以主要選擇采用高效液相色譜法,測定東北龍膽根中次生代謝物獐牙菜苦苷含量。

1.3 儀器和試劑

1.3.1 主要儀器。Waters-1525高效液相色譜泵，Waters-2487紫外-可見檢測器，Empower Pro工作站，Nova-Pak C18色譜柱(3.9mm×150mm)，Sartoriua BS-210s電子天平，Water Code 5CH型柱溫箱，B-321型超聲波清洗器(美國Branson Cleaning Equipment公司)。

1.3.2 試劑。甲醇為色譜純(美國迪馬公司)和分析純，水為超純水；龍膽苦苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所；獐牙菜苦苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所。

2 東北龍膽根中獐牙苦苷含量測定

關于東北龍膽苦苷類成分的含量測定方法，有紙色譜-比色法、薄層色譜-比色法、薄層色譜-紫外分光光度法、薄層色譜-光密度法和高效液相色譜法等，本實驗用高效液相色譜法測量東北龍膽根中獐牙菜苦苷含量，此方法簡便、快速、準確、可重復性強。

2.1 獐牙菜苦苷含量測定

色譜條件：流動相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0mL/min；進樣運行時間為5min；獐牙菜苦苷保留時間為3.2min；進樣量5μL；紫外檢測波長237nm；論塔板數按獐牙菜苦苷計算不低于2500，柱溫39℃。

標準曲線的制備：精密稱取獐牙菜苦苷對照品5.1mg，置于10mL的容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度，搖勻制成濃度為0.51mg/mL的對照品，然后用0.22μm濾膜過濾，備用貯存液。精密吸取上述貯存液，以甲醇進行準確配置濃度分別為0.0、0.018、0.02550、0.03185、0.06375、0.12750 mg/mL。每一濃度平行進樣3次，進樣量為5 μL。以峰面積為縱坐標，對照品濃度為橫坐標繪制標準曲線。回歸方程為：Y=5.02e+006X+2.52e+003,r=0.999295，表明獐牙菜苦苷在0.0～0.6375 μg范圍內具有良好的線性關系。

樣品溶液的制備：精密稱取條葉龍膽根干燥粉約100mg，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇9 mL,超聲提取55 min, 提取溫度10℃，用純甲醇定容至刻度，混勻，放置20 min然后用0.22μm濾膜過濾后用于進樣。在選定的色譜條件下測量其獐牙菜苦苷含量，每份樣品進樣3次。

2.2 對照品與樣品的純度檢查

取對照品與樣品液各10μL，進樣，色譜分離，對照品與樣品中獐牙菜苦苷的峰純度指數均大于0.9999，即樣品峰無其他雜質干擾。

樣品溶液穩定性試驗:精密吸取已知含量的條葉龍膽樣品溶液，分別于配制后0、2、4、6、8、10、12 h進行進樣1次測定，測定峰面積,計算RSD為1.57%,表明供試品溶液在12 h內穩定。

精密度試驗：精密吸取同一樣品溶液5 μL，連續重復進樣6次，測定峰面積積分值， RSD為0.93%，表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批條葉龍膽樣品5份，精密稱定，按含量測定方法重復測定，計算RSD為2.41%表明該方法重復性良好。

回收率試驗：精密稱量已知含量的條葉龍膽樣品6份，每份100 mg，精密加入獐牙菜苦苷對照品溶液約1 mg，按前述樣品溶液的制備方法制備樣品，并進行測定，計算平均回收率和RSD分別為：97.8%和2.15%。

3 實驗結果與討論

3.1 取隨機采集于黑龍江五常小嶺地區的東北龍膽10株植株的根，放在60℃溫箱中烘干，進行獐牙菜苦苷含量測定。

通過方差分析結果表明：來自同一地區，黑龍江五常小嶺地區的東北龍膽，根中獐牙菜苦苷含量差異不顯著。說明了生長在相同環境中，根中有效成分獐牙菜苦苷含量差異不顯著。

3.2 取隨機采集于黑龍江五常小嶺地區的東北龍膽10株植株的根，放在60℃溫箱中烘干，進行獐牙菜苦苷含量測定。

通過方差分析結果表明：來自同一地區，黑龍江鏡泊湖地區的東北龍膽，根中獐牙菜苦苷含量差異不顯著。說明了生長在相同環境中，根中有效成分獐牙菜苦苷含量差異不顯著。

3.3 取隨機采集于黑龍江三江平原地區的東北龍膽10株植株的根，放在60℃溫箱中烘干，進行獐牙菜苦苷含量測定。

通過方差分析結果表明：來自同一地區，黑龍江三江平原地區的東北龍膽，根中獐牙菜苦苷含量差異不顯著。說明了生長在相同環境中，根中有效成分獐牙菜苦苷含量差異不顯著。

3.4 各取黑龍江五常小嶺地區、鏡泊湖地區、三江平原地區隨機采集的東北龍膽植株的根，進行獐牙菜苦苷含量測定平均值進行比較，利用SPSS13.0統計軟件做方差分析。

通過方差分析結果表明：生長在不同地區的東北龍膽，獐牙菜苦苷的含量差異顯著，即生長環境不同，東北龍膽根中有效成分龍膽苦苷含量差異顯著。

4 小結

本實驗結果表明：來自不同地區的東北龍膽，組間獐牙菜苦苷的含量差異較顯著。把同種的條葉龍膽，在不同類型土壤中進行栽培，土壤類型因素對條葉龍膽根中獐牙菜苦苷含量的影響達到顯著水平。

[1]國家藥典委員會.中國藥典1部[S].北京：中國醫藥科技出版社,2010.

[2] 江蔚新.三花龍膽和東北龍膽地上、地下器官中獐芽菜苦苷積累規律研究[J].中成藥，2005,27(4):459-460.

2014-12-24

高娟(1970-)，女，高級工程師，從事藥物制劑與分析，E-mail:gaojuan1970@126.com。

R284.1

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.03.017