尼美舒利對豚鼠心乳頭肌動作電位和收縮力的影響

吳建萍 胡 燕 金滿文 劉玲華 劉海霞

1.湖北中醫藥高等專科學校藥理教研室，湖北荊州 434020；2.華中科技大學同濟醫學院藥理系，湖北武漢 430030

尼美舒利（Nimesulide，Nim）化學名為4-硝基-2-苯氧基甲磺酰苯胺是磺酰苯胺的衍生物，是一種選擇性抑制環氧化酶（COX-2）的非甾體抗炎藥，最新的研究表明尼美舒利還有抗氧化、抑制增殖、誘導細胞調亡、抑制血管生成等作用，對腫瘤有一定的預防和治療作用[1-2]。目前，非甾體抗炎藥（NSAIDs）是全球處方量最大的藥物之一，在內、外、婦、兒科使用廣泛。尼美舒利因其獨特的藥理作用機制曾被認為是一種有良好發展前景的胃腸道反應少、安全性好的非甾體抗炎藥。近期國內外關于COX-2抑制劑引起心血管不良反應的事件時有報道[3-5]，但有關COX-2抑制劑對心肌電生理的影響鮮有報道。本研究采用標準玻璃微電極技術、同步記錄收縮力的方法，比較分析Nim和吡那地爾（Pinacidil，Pin）對豚鼠心乳頭肌收縮力和細胞動作電位的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及模型制作

選取華中科技大學同濟醫學院實驗動物學部提供的符合實驗標準的普通級健康豚鼠54只（合格證號：00005907），體質量（300±50）g，雌雄不限，室內動物房分籠飼養，統一飼料，自由采食和飲水。實驗隨機分為6個組：溶劑對照組，即DMSO組（Dimethyl sulphoxide，二甲基亞砜）、Pin 1 μmol/L 組、Pin 10 μmol/L 組，Nim 1 μmol/L 組、Nim 3 μmol/L 組、Nim 10 μmol/L 組，每組均為9只。

1.2 主要試劑和儀器

Tyrode液成分：NaCl 137 mmol/L，CaCl21.8 mmol/L，KCl 5.4 mmol/L，NaHCO311.9 mmol/L，MgCl21.05 mmol/L，葡萄糖溶液 5.5 mmol/L，NaH2PO40.42 mmol/L。pH：7.2～7.4。實驗前新鮮配制Tyrode液1000 mL：首先在容器中加入約600 mL的雙蒸水，將容器置于磁力攪拌器上持續攪拌。分別稱取葡萄糖溶液和NaHCO3各1.0 g，將其陸續加入持續攪拌的容器中。準確量取儲存液Ⅰ40 mL、儲存液Ⅱ10 mL、儲存液Ⅲ10 mL，分別依次緩慢加入容器中，加雙蒸水定容至1 L。配成的營養液一般保存24 h。Nim、Pin購于SIGMA公司（純度≥99%），用DMSO配成儲備液，DMSO在浴槽中的終濃度控制在0.1%以內。儀器及設備離體心肌玻璃浴槽裝置采用超級恒溫器（HSS-1B型）、程控電刺激器（YC2）、WD-1型微電極拉制儀、微電極放大器、輸入記錄系統 （RM6240C型多道生理信號采集處理系統）為成都儀器廠產品。

1.3 實驗方法

豚鼠心室乳頭肌標本的制備[6]：將各組的豚鼠擊昏致死，經頸總動脈放血后，迅速取出的心臟，置入經95%O2＋5%CO2混合氣體飽和的Tyrode液中。分離右心室乳頭肌，兩端用3-0絲線結扎后水平放入1 mL的恒溫浴槽中，一端套在張力換能器的小鉤上，另一端固定在標本池中的站柱上。溫度控制在（37±1）℃，用30mL氧飽和的Tyrode液持續表面灌流，流速4 mL/min。給予標本0.5 g的前負荷，以波寬3 ms，頻率1 Hz，110%～150%閾電壓的刺激驅動標本，記錄乳頭肌的收縮力，平衡30 min后進行實驗，分別用不同濃度的Nim（1、3、10 μmol/L）和 Pin（1、10 μmol/L）進行灌流其間換液1次。Nim 10 μmol/L組在給藥后再用無藥Tyrode液進行沖洗，觀察APD恢復時間。

動作電位時程 （action potential duration，APD）的記錄用有芯毛細管在WD-1型微電極拉制儀進一步拉制成玻璃微電極，電極電阻約為10 MΩ，用3 mol/L的KCl溶液充灌。將充灌好的微電極固定在三維操縱器上，插入鉑金絲引導電極。電極入水后調零，緩慢插入電極，直至引出穩定的APD。APD信號經微電極放大器輸入記錄系統。在引出穩定的APD圖形30 min后加藥，觀察30 min，每5 min記錄1次。同時記錄各組豚鼠心肌張力及0相最大速度（Vmax）。

1.4 統計學方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Nim、Pin對豚鼠APD和收縮力的影響

Pin 10 μm 組的 APD20、APD50、APD90較 DMSO 組明顯降低，差異均有統計學意義（P<0.05）；Nim 3 μm組、Nim 10 μm組與DMSO組相比明顯降低，差異均有高度統計學意義（P<0.01）。Nim、Pin對豚鼠收縮力和Vmax均無明顯變化（P>0.05）。結果提示，Nim 3 μmol/L、Nim 10 μmol/L和Pin 10 μmol/L可顯著縮短豚鼠心乳頭肌細胞 APD20、APD50、APD90的時間， 而對 Vmax和收縮力均無明顯影響。見表1、圖1。

2.2 Nim對豚鼠心乳頭狀肌APD縮短的作用可逆

豚鼠心乳頭狀肌在給予Nim 10 μmol/L后，用無藥的Tyrode液進行了沖洗，沖洗結果顯示，APD縮短的各指標經過沖洗120 min后，基本恢復到給藥前水平。這表明了Nim對豚鼠心乳頭狀肌APD縮短的這一作用是可逆的，是可以洗脫的。見圖2。

表1 Nim、Pin對豚鼠 APD、收縮力和 Vmax的影響（±s）

表1 Nim、Pin對豚鼠 APD、收縮力和 Vmax的影響（±s）

注：與 DMSO 組比較，*P<0.05；與 DMSO 組比較，**P<0.01；DMSO：溶液對照；Nim：尼美舒利；Pin：吡那地爾；APD：動作電位時程；APD20：動作電位復極20%；APD50：動作電位復極50%；APD90：動作電位復極90%；APA：動作電位幅度；Vmax：0相最大上升速度

DMSO 組（n=9）Pin 1 μm 組（n=9）Pin 10 μm 組（n=9）Nim 1 μm 組（n=9）Nim 3 μm 組（n=9）Nim 10 μm 組（n=9）101±13 87±9 56±18*95±9 55±17**35±20**101±9 84±14 72±16*94±5 70±12**48±17**100±7 86±15 78±18*95±4 78±7**57±17**100±2 99±5 100±2 98±5 99±5 90±10 94±13 98±18 88±25 97±10 83±15 84±20 98±20 97±20 107±8 94±18 99±17 96±12組別 APD20（ms） APD50（ms） APD90（ms） APA（mV） 張力（g） Vmax（V/s）

圖1 Nim、Pin對豚鼠APD和收縮力的影響

圖2 無藥Tyrode液沖洗后APD的變化

3 討論

Nim屬非甾體抗炎藥，據美國食品藥品管理局報道[7-8]：針對多種COX-2選擇性或非選擇性非甾體類抗炎藥持續時間達3年的臨床試驗顯示，Nim可能引起嚴重的不良事件、中風和心肌梗塞的風險增加，且其風險性可能是致命的。所有的非甾體類抗炎藥，都可能有相似的風險[9]。其中有心血管疾病危險因素或心血管疾病的患者，會有更大的風險。即使患者既往沒有心血管癥狀，醫生和患者也要警惕該類事件的發生發展。醫生應告知患者嚴重心血管安全性的癥狀、體征以及如果發生應采取的措施、步驟；患者應警惕諸如胸痛、無力、氣短、言語含糊等癥狀和體征，而且當有任何上述癥狀或體征發生后應立刻尋求醫生幫助。

本實驗研究了Nim與Pin對豚鼠心乳頭肌動作電位和收縮力的影響。結果為Nim 3 μmol/L和Nim 10 μmol/L均顯著縮短豚鼠心室肌細胞的 APD20、APD50、APD90，對 APA、Vmax、收縮力均無明顯影響。Pin 10 μmol/L 顯著縮短豚鼠心室肌細胞的 APD20、APD50、APD90，對APA、Vmax、收縮力均無明顯影響并且Nim對豚鼠心乳頭肌APD縮短這一作用，可以用無藥的Tyrode液洗脫。

心室肌細胞動作電位時程主要取決于2期和3期的復極[10-11]，電生理研究表明，心肌APD復極過程主要是K+外流，同時也有Na+和Ca2+的參與[12]。其中2期形成的機制是內向電流與外向電流平衡的結果。內向離子流主要是Ca2+負載的，外向離子流是K+攜帶的；若2期Ca2+內流被阻斷，則2期時程縮短，若K+外流被阻斷，則2期時程延長。任何影響細胞內外電流平衡的機制均會使APD發生變化。APD受心肌各種離子流，內向鈉鈣電流和外向鉀電流等綜合作用的影響[13-14]。由于APA反應Na+內流的總量，Vmax主要取決于0期激活的Na+通道的數量[15-16]。Nim對Vmax、APA無明顯影響，提示Nim對心肌細胞Na+通道無明顯作用，其對APD的作用是通過對Ca2+、K+電流的影響實現的。

Nim使豚鼠心乳頭肌細胞的APD明顯縮短，提示可能具有一定的K+通道開放作用和/或Ca2+通道阻滯作用，且此作用是否與其抑制環氧合酶有關均待進一步研究。

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