尼美舒利對豚鼠心乳頭肌動作電位和收縮力的影響

吳建萍 胡 燕 金滿文 劉玲華 劉海霞

1.湖北中醫(yī)藥高等專科學(xué)校藥理教研室，湖北荊州 434020；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥理系，湖北武漢 430030

尼美舒利（Nimesulide，Nim）化學(xué)名為4-硝基-2-苯氧基甲磺酰苯胺是磺酰苯胺的衍生物，是一種選擇性抑制環(huán)氧化酶（COX-2）的非甾體抗炎藥，最新的研究表明尼美舒利還有抗氧化、抑制增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡、抑制血管生成等作用，對腫瘤有一定的預(yù)防和治療作用[1-2]。目前，非甾體抗炎藥（NSAIDs）是全球處方量最大的藥物之一，在內(nèi)、外、婦、兒科使用廣泛。尼美舒利因其獨(dú)特的藥理作用機(jī)制曾被認(rèn)為是一種有良好發(fā)展前景的胃腸道反應(yīng)少、安全性好的非甾體抗炎藥。近期國內(nèi)外關(guān)于COX-2抑制劑引起心血管不良反應(yīng)的事件時有報道[3-5]，但有關(guān)COX-2抑制劑對心肌電生理的影響鮮有報道。本研究采用標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極技術(shù)、同步記錄收縮力的方法，比較分析Nim和吡那地爾（Pinacidil，Pin）對豚鼠心乳頭肌收縮力和細(xì)胞動作電位的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及模型制作

選取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實驗動物學(xué)部提供的符合實驗標(biāo)準(zhǔn)的普通級健康豚鼠54只（合格證號：00005907），體質(zhì)量（300±50）g，雌雄不限，室內(nèi)動物房分籠飼養(yǎng)，統(tǒng)一飼料，自由采食和飲水。實驗隨機(jī)分為6個組：溶劑對照組，即DMSO組（Dimethyl sulphoxide，二甲基亞砜）、Pin 1 μmol/L 組、Pin 10 μmol/L 組，Nim 1 μmol/L 組、Nim 3 μmol/L 組、Nim 10 μmol/L 組，每組均為9只。

1.2 主要試劑和儀器

Tyrode液成分：NaCl 137 mmol/L，CaCl21.8 mmol/L，KCl 5.4 mmol/L，NaHCO311.9 mmol/L，MgCl21.05 mmol/L，葡萄糖溶液 5.5 mmol/L，NaH2PO40.42 mmol/L。pH：7.2～7.4。實驗前新鮮配制Tyrode液1000 mL：首先在容器中加入約600 mL的雙蒸水，將容器置于磁力攪拌器上持續(xù)攪拌。分別稱取葡萄糖溶液和NaHCO3各1.0 g，將其陸續(xù)加入持續(xù)攪拌的容器中。準(zhǔn)確量取儲存液Ⅰ40 mL、儲存液Ⅱ10 mL、儲存液Ⅲ10 mL，分別依次緩慢加入容器中，加雙蒸水定容至1 L。配成的營養(yǎng)液一般保存24 h。Nim、Pin購于SIGMA公司（純度≥99%），用DMSO配成儲備液，DMSO在浴槽中的終濃度控制在0.1%以內(nèi)。儀器及設(shè)備離體心肌玻璃浴槽裝置采用超級恒溫器（HSS-1B型）、程控電刺激器（YC2）、WD-1型微電極拉制儀、微電極放大器、輸入記錄系統(tǒng) （RM6240C型多道生理信號采集處理系統(tǒng)）為成都儀器廠產(chǎn)品。

1.3 實驗方法

豚鼠心室乳頭肌標(biāo)本的制備[6]：將各組的豚鼠擊昏致死，經(jīng)頸總動脈放血后，迅速取出的心臟，置入經(jīng)95%O2＋5%CO2混合氣體飽和的Tyrode液中。分離右心室乳頭肌，兩端用3-0絲線結(jié)扎后水平放入1 mL的恒溫浴槽中，一端套在張力換能器的小鉤上，另一端固定在標(biāo)本池中的站柱上。溫度控制在（37±1）℃，用30mL氧飽和的Tyrode液持續(xù)表面灌流，流速4 mL/min。給予標(biāo)本0.5 g的前負(fù)荷，以波寬3 ms，頻率1 Hz，110%～150%閾電壓的刺激驅(qū)動標(biāo)本，記錄乳頭肌的收縮力，平衡30 min后進(jìn)行實驗，分別用不同濃度的Nim（1、3、10 μmol/L）和 Pin（1、10 μmol/L）進(jìn)行灌流其間換液1次。Nim 10 μmol/L組在給藥后再用無藥Tyrode液進(jìn)行沖洗，觀察APD恢復(fù)時間。

動作電位時程 （action potential duration，APD）的記錄用有芯毛細(xì)管在WD-1型微電極拉制儀進(jìn)一步拉制成玻璃微電極，電極電阻約為10 MΩ，用3 mol/L的KCl溶液充灌。將充灌好的微電極固定在三維操縱器上，插入鉑金絲引導(dǎo)電極。電極入水后調(diào)零，緩慢插入電極，直至引出穩(wěn)定的APD。APD信號經(jīng)微電極放大器輸入記錄系統(tǒng)。在引出穩(wěn)定的APD圖形30 min后加藥，觀察30 min，每5 min記錄1次。同時記錄各組豚鼠心肌張力及0相最大速度（Vmax）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Nim、Pin對豚鼠APD和收縮力的影響

Pin 10 μm 組的 APD20、APD50、APD90較 DMSO 組明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Nim 3 μm組、Nim 10 μm組與DMSO組相比明顯降低，差異均有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。Nim、Pin對豚鼠收縮力和Vmax均無明顯變化（P>0.05）。結(jié)果提示，Nim 3 μmol/L、Nim 10 μmol/L和Pin 10 μmol/L可顯著縮短豚鼠心乳頭肌細(xì)胞 APD20、APD50、APD90的時間， 而對 Vmax和收縮力均無明顯影響。見表1、圖1。

2.2 Nim對豚鼠心乳頭狀肌APD縮短的作用可逆

豚鼠心乳頭狀肌在給予Nim 10 μmol/L后，用無藥的Tyrode液進(jìn)行了沖洗，沖洗結(jié)果顯示，APD縮短的各指標(biāo)經(jīng)過沖洗120 min后，基本恢復(fù)到給藥前水平。這表明了Nim對豚鼠心乳頭狀肌APD縮短的這一作用是可逆的，是可以洗脫的。見圖2。

表1 Nim、Pin對豚鼠 APD、收縮力和 Vmax的影響（±s）

表1 Nim、Pin對豚鼠 APD、收縮力和 Vmax的影響（±s）

注：與 DMSO 組比較，*P<0.05；與 DMSO 組比較，**P<0.01；DMSO：溶液對照；Nim：尼美舒利；Pin：吡那地爾；APD：動作電位時程；APD20：動作電位復(fù)極20%；APD50：動作電位復(fù)極50%；APD90：動作電位復(fù)極90%；APA：動作電位幅度；Vmax：0相最大上升速度

DMSO 組（n=9）Pin 1 μm 組（n=9）Pin 10 μm 組（n=9）Nim 1 μm 組（n=9）Nim 3 μm 組（n=9）Nim 10 μm 組（n=9）101±13 87±9 56±18*95±9 55±17**35±20**101±9 84±14 72±16*94±5 70±12**48±17**100±7 86±15 78±18*95±4 78±7**57±17**100±2 99±5 100±2 98±5 99±5 90±10 94±13 98±18 88±25 97±10 83±15 84±20 98±20 97±20 107±8 94±18 99±17 96±12組別 APD20（ms） APD50（ms） APD90（ms） APA（mV） 張力（g） Vmax（V/s）

圖1 Nim、Pin對豚鼠APD和收縮力的影響

圖2 無藥Tyrode液沖洗后APD的變化

3 討論

Nim屬非甾體抗炎藥，據(jù)美國食品藥品管理局報道[7-8]：針對多種COX-2選擇性或非選擇性非甾體類抗炎藥持續(xù)時間達(dá)3年的臨床試驗顯示，Nim可能引起嚴(yán)重的不良事件、中風(fēng)和心肌梗塞的風(fēng)險增加，且其風(fēng)險性可能是致命的。所有的非甾體類抗炎藥，都可能有相似的風(fēng)險[9]。其中有心血管疾病危險因素或心血管疾病的患者，會有更大的風(fēng)險。即使患者既往沒有心血管癥狀，醫(yī)生和患者也要警惕該類事件的發(fā)生發(fā)展。醫(yī)生應(yīng)告知患者嚴(yán)重心血管安全性的癥狀、體征以及如果發(fā)生應(yīng)采取的措施、步驟；患者應(yīng)警惕諸如胸痛、無力、氣短、言語含糊等癥狀和體征，而且當(dāng)有任何上述癥狀或體征發(fā)生后應(yīng)立刻尋求醫(yī)生幫助。

本實驗研究了Nim與Pin對豚鼠心乳頭肌動作電位和收縮力的影響。結(jié)果為Nim 3 μmol/L和Nim 10 μmol/L均顯著縮短豚鼠心室肌細(xì)胞的 APD20、APD50、APD90，對 APA、Vmax、收縮力均無明顯影響。Pin 10 μmol/L 顯著縮短豚鼠心室肌細(xì)胞的 APD20、APD50、APD90，對APA、Vmax、收縮力均無明顯影響并且Nim對豚鼠心乳頭肌APD縮短這一作用，可以用無藥的Tyrode液洗脫。

心室肌細(xì)胞動作電位時程主要取決于2期和3期的復(fù)極[10-11]，電生理研究表明，心肌APD復(fù)極過程主要是K+外流，同時也有Na+和Ca2+的參與[12]。其中2期形成的機(jī)制是內(nèi)向電流與外向電流平衡的結(jié)果。內(nèi)向離子流主要是Ca2+負(fù)載的，外向離子流是K+攜帶的；若2期Ca2+內(nèi)流被阻斷，則2期時程縮短，若K+外流被阻斷，則2期時程延長。任何影響細(xì)胞內(nèi)外電流平衡的機(jī)制均會使APD發(fā)生變化。APD受心肌各種離子流，內(nèi)向鈉鈣電流和外向鉀電流等綜合作用的影響[13-14]。由于APA反應(yīng)Na+內(nèi)流的總量，Vmax主要取決于0期激活的Na+通道的數(shù)量[15-16]。Nim對Vmax、APA無明顯影響，提示Nim對心肌細(xì)胞Na+通道無明顯作用，其對APD的作用是通過對Ca2+、K+電流的影響實現(xiàn)的。

Nim使豚鼠心乳頭肌細(xì)胞的APD明顯縮短，提示可能具有一定的K+通道開放作用和/或Ca2+通道阻滯作用，且此作用是否與其抑制環(huán)氧合酶有關(guān)均待進(jìn)一步研究。

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