羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值

劉玉榮

羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值

劉玉榮

目的 探討羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 178例具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦, 采用羊水細(xì)胞培養(yǎng)G顯帶技術(shù)進(jìn)行檢查。結(jié)果 有10例孕婦染色體異常核型, 檢出率為5.62%,其中有6例為數(shù)目異常.4例為結(jié)構(gòu)異常。結(jié)論 羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值高。

羊水細(xì)胞培養(yǎng)；產(chǎn)前診斷；染色體核型分析

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年4月～2013年4月在本院產(chǎn)科就診的具有產(chǎn)前診斷指征的178例孕婦, 年齡20～47歲, 孕周16～25周, 有70例孕婦唐氏綜合征篩查為陽(yáng)性.23例孕婦有異常生育史, 60例孕婦年齡≥35歲.14例婦女于早孕服藥, 6例孕婦神經(jīng)管急性篩查為陽(yáng)性.5例孕婦丈夫染色體異常。

1.2 方法

1.2.1 羊膜穿刺 經(jīng)B超定位后, 在無(wú)菌條件下, 用一次性羊水穿刺針行羊膜穿刺術(shù)。舍棄最開(kāi)始的2 ml羊水, 再抽取20～30 ml的羊水放入2支無(wú)菌離心試管中。

1.2.2 羊水細(xì)胞培養(yǎng) 以1000 r/min的離心速度將2支無(wú)菌試管中的羊水進(jìn)行離心處理達(dá)10 min, 舍棄上層清液, 保留管內(nèi)沉淀細(xì)胞和0.5 ml羊水, 加入20%胎牛血清及含張氏成分的5 ml F10培養(yǎng)基, 用細(xì)管使之混勻, 將其接種于T-25的無(wú)菌試管中, 在37℃有5%二氧化碳培養(yǎng)環(huán)境中進(jìn)行培育.5 d后觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況, 若發(fā)現(xiàn)纖維狀或者梭狀細(xì)胞生長(zhǎng)是, 則可更換5 ml新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行傳代培養(yǎng)［2］。

1.2.3 收獲細(xì)胞并進(jìn)行制片 在對(duì)羊水細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)6～7 d后, 在倒置的顯微鏡下對(duì)正在培養(yǎng)的羊水細(xì)胞進(jìn)行觀(guān)察, 觀(guān)察其生長(zhǎng)情況, 發(fā)現(xiàn)有不同大小的梭長(zhǎng)形細(xì)胞正在進(jìn)行克隆并生長(zhǎng), 每個(gè)克隆過(guò)的細(xì)胞其生長(zhǎng)狀態(tài)良好并且已經(jīng)形成細(xì)胞島。對(duì)培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液進(jìn)行定時(shí)的更換, 每天對(duì)細(xì)胞進(jìn)行觀(guān)察, 在觀(guān)察2～3 d后, 發(fā)現(xiàn)每個(gè)形成的細(xì)胞島已經(jīng)逐漸長(zhǎng)成為透亮細(xì)胞, 這些細(xì)胞較大, 細(xì)胞融合度達(dá)到70%～80%,并且數(shù)目不等, 形狀多呈圓形或類(lèi)圓形, 這時(shí)即可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行收獲。在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行收獲的前1 d, 更換新鮮培養(yǎng)液, 在培養(yǎng)液中加入秋水仙素, 使其濃度達(dá)到0.1 mg/ml, 在4～5 h后,使用顯微鏡觀(guān)察, 發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液中出現(xiàn)大量的呈魚(yú)眼狀的細(xì)胞時(shí), 即可對(duì)細(xì)胞終止培養(yǎng)并進(jìn)行收獲。加入0.25%的2 ml胰酶消化液, 在37℃的環(huán)境下放置5 min, 使得瓶壁上細(xì)胞脫落,再以1500r的轉(zhuǎn)速離心處理8 min, 棄上清液。加入1.5 ml的0.4%枸緣酸鈉和0.4%的氯化鉀混合液低滲7 min, 滴片, 常規(guī)G顯帶。每張玻片有20～30個(gè)細(xì)胞分裂相, 進(jìn)行染色體核型分析, 每例分析核型5個(gè)。

1.3 核型統(tǒng)計(jì)分析 使用顯微鏡對(duì)細(xì)胞核型進(jìn)行觀(guān)察, 常規(guī)技術(shù)分散良好的細(xì)胞核型有30個(gè)中期分裂相, 細(xì)胞核型計(jì)數(shù)發(fā)生異常的則有50個(gè)分裂相, 如出現(xiàn)≥2個(gè)細(xì)胞核型計(jì)數(shù)異常, 則對(duì)所有分裂相進(jìn)行計(jì)數(shù), 使用染色體核型分析軟件對(duì)核型圖像進(jìn)行采集, 對(duì)3～5個(gè)核型進(jìn)行分析, 并完成報(bào)告, 為遺傳咨詢(xún)提供意見(jiàn)。

2 結(jié)果

進(jìn)行羊水穿刺培養(yǎng)一次性成功的患者有178例, 成功率高達(dá)100%, 其中有11例患者進(jìn)行血性羊水培養(yǎng)并且取得成功。178例患者的培養(yǎng)時(shí)間為9～14 d。

本研究中178例孕婦有10例胎兒染色體異常者, 其中唐氏綜合征陽(yáng)性組占有1例結(jié)構(gòu)異常和1例數(shù)目異常, 占20%；高齡產(chǎn)婦組有3例數(shù)目異常, 占30%；異常生育史組有1例結(jié)構(gòu)異常, 占10%；夫婦一方染色體異常組有2例染色體結(jié)構(gòu)異常, 占20%；超聲檢查異常組有2例數(shù)目異常,占20%。10例染色體異常者中, 有6例數(shù)目異常.4例結(jié)構(gòu)異常。178例孕婦中10例胎兒染色體異常, 檢出率為5.62%。

3 討論

導(dǎo)致新生兒出生缺陷的重要原因之一就是染色體病, 然而, 這可以通過(guò)產(chǎn)前診斷進(jìn)行預(yù)防。在孕中期進(jìn)行羊水檢查,操作安全便捷, 細(xì)胞培養(yǎng)成功率相對(duì)較高, 及早發(fā)現(xiàn)異常情況能夠及時(shí)終止妊娠。

有研究表明, 胎兒染色體異常在對(duì)具有產(chǎn)前診斷指征孕婦中的異常檢出率在3.8%～7.7%［3］。本研究結(jié)果顯示該組胎兒異常檢出率為5.62%。據(jù)相關(guān)報(bào)道顯示.35歲以上的孕婦胎兒出現(xiàn)唐氏綜合征的幾率15%～31%, 大部分均出現(xiàn)在＞35歲的孕婦群體中。這說(shuō)明唐氏綜合征血清學(xué)篩查尤為重要。對(duì)于年齡≥35歲的孕婦出現(xiàn)非整倍體的幾率顯著高于年齡＜35歲的孕婦, 因此, 對(duì)高齡產(chǎn)婦進(jìn)行羊膜穿刺, 進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng)檢查必不可少［4］。

為了預(yù)防和減少染色體異常胎兒出生, 作者認(rèn)為產(chǎn)前診斷中進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng)意義重大。首先, 產(chǎn)前診斷中進(jìn)行羊水細(xì)胞培養(yǎng)能有效提高我國(guó)人口素質(zhì)。本研究結(jié)果顯示, 胎兒染色體異常檢出率為5.62%, 對(duì)于這類(lèi)胎兒, 可以提前建議孕婦進(jìn)行引產(chǎn)；其次, 通過(guò)對(duì)孕婦年齡、游離β人絨毛膜促性腺激素和血清甲種胎兒球蛋白(AFP)進(jìn)行篩查后, 有產(chǎn)前診斷指征的高風(fēng)險(xiǎn)孕婦在醫(yī)師的指導(dǎo)下對(duì)產(chǎn)前診斷知識(shí)有了更深入的認(rèn)識(shí), 更好地配合檢查, 提高檢出率；在羊水細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中, 對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng), 大大增加了羊水細(xì)胞培養(yǎng)的成功率, 為臨床上其他項(xiàng)目提供了便利。

綜上所述, 羊水細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用于產(chǎn)前診斷中, 操作便捷、創(chuàng)傷小、效果安全可靠, 還可分瓶進(jìn)行傳代培養(yǎng), 提高了細(xì)胞培養(yǎng)成功率, 值得臨床上廣泛推廣使用。

［1］ 魯莉萍, 陳意振, 張莉超.羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用——619例染色體核型分析.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志.2005.13(5):32-32.56.

［2］ 王麗娟, 段程穎, 傅文宇, 等. 902例產(chǎn)前診斷染色體核型分析.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版).2008.28(5):862-863.

［3］ 劉曉翌, 肖曉素, 樊尚榮, 等.羊水細(xì)胞培養(yǎng)用于染色體病產(chǎn)前診斷64例分析.中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志.2005.21(7):420-421.

［4］ 宋鳳俠, 龐泓, 張莉, 等.403例羊水細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)前診斷.中國(guó)婦幼保健.2004.19(22):25-26.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.20.082產(chǎn)前診斷方法中最為廣泛且可靠的方式是羊水脫落細(xì)胞培養(yǎng)和分析染色體核型分析［1］。本文旨在研究羊水細(xì)胞培養(yǎng)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價(jià)值, 現(xiàn)報(bào)告如下。

2015-02-03］

130021 吉林省人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室