實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)對(duì)HCV抗體弱陽(yáng)性標(biāo)本的確認(rèn)價(jià)值

張美華 徐清芳 楊敏

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測(cè)對(duì)HCV抗體弱陽(yáng)性標(biāo)本的確認(rèn)價(jià)值

張美華 徐清芳 楊敏

目的 探討和分析實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) 檢測(cè)對(duì)丙型肝炎病毒(HCV)抗體弱陽(yáng)性標(biāo)本的確認(rèn)價(jià)值。方法 50例谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)指標(biāo)正常, 無(wú)惡心、嘔吐、乏力、發(fā)熱等臨床癥狀, 但行胃腸組織檢查的患者。使用熒光劑定量PCR對(duì)其HCV抗體弱陽(yáng)性進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果 對(duì)于ALT指標(biāo)正常且抗陽(yáng)性在1～20 S/CO的患者行熒光劑定量PCR檢測(cè)的過(guò)程中, 發(fā)現(xiàn)2例(4%)患者檢測(cè)結(jié)果高于最低檢測(cè)值。對(duì)患者使用熒光定量PCR的方法對(duì)于HCV陽(yáng)性血清進(jìn)行檢測(cè), 并且對(duì)于ALT指標(biāo)正常的患者, 行HCV抗體檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)3例(6%)丙肝陰性抗體。結(jié)論 對(duì)于HCV抗體弱陽(yáng)性的檢測(cè),雖然在一定程度上存在局限性, 對(duì)于HCV-RNA含量較低的情況下存在一定的失誤性, 但能夠較為準(zhǔn)確的對(duì)患者HCV抗體弱陽(yáng)性進(jìn)行檢測(cè)。具有較高的臨床醫(yī)學(xué)價(jià)值, 值得在HCV抗體檢測(cè)領(lǐng)域得到進(jìn)一步的完善、推廣和應(yīng)用。

熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；檢測(cè)；丙型肝炎病毒抗體；谷丙轉(zhuǎn)氨酶

在當(dāng)今社會(huì)生活中, 雖然人們的生活水平得到了一定的提升, 但由于人們對(duì)于生活質(zhì)量的忽視, 丙型肝炎在生活中出現(xiàn)的頻率也越來(lái)越高。丙型肝炎作為一種傳染性極強(qiáng)的疾病, 在人體內(nèi)部變異性也極強(qiáng), 現(xiàn)在醫(yī)學(xué)中還未見(jiàn)對(duì)其特效藥, 這就在很大程度上要求人們加強(qiáng)對(duì)于HCV的預(yù)防, 為了很好的對(duì)其預(yù)防, 應(yīng)該提高HCV的檢測(cè)準(zhǔn)確度［1］。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究中, 對(duì)于HCV的診斷多為綜合診斷, 在臨床醫(yī)學(xué)中, HCV抗體弱陽(yáng)性的檢測(cè)多采用熒光定量的方法, 在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中對(duì)于HCV的檢測(cè)上, 熒光定量PCR的使用作出了卓越的貢獻(xiàn), 大大提高了HCV抗體弱陽(yáng)性的檢測(cè)精準(zhǔn)度, 具有較為深遠(yuǎn)的意義。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對(duì)象選取本院2009年4～11月收治50例ALT指標(biāo)正常, 無(wú)惡心、嘔吐、乏力、發(fā)熱等臨床癥狀,但行胃腸組織檢查的患者。患者年齡45～63歲, 平均年齡(51.65±4.69)歲。

1.2 方法 由于患者胃腸功能較差, 在檢查前需要對(duì)HCV進(jìn)行檢測(cè), 使用熒光定量PCR的方式對(duì)于HCV-RNA陽(yáng)性血清進(jìn)行必要的檢測(cè), 進(jìn)而實(shí)行對(duì)于HCV抗體的檢測(cè)。定量熒光PCR檢測(cè)使用的儀器是由美國(guó)應(yīng)用生物公司制造的PCR Prism7500型儀器, 使用由上海捷瑞生物工程有限公司生產(chǎn)的熒光定量檢測(cè)試劑盒。經(jīng)患者及其家屬知情同意后進(jìn)行 HCV抗體檢測(cè)。

2 結(jié)果

對(duì)于ALT指標(biāo)正常且抗陽(yáng)性在1～20 S/CO的患者行熒光定量PCR檢測(cè)的過(guò)程中, 發(fā)現(xiàn)2例(4%)患者檢測(cè)結(jié)果高于最低檢測(cè)值。對(duì)患者使用熒光定量PCR的方法對(duì)于HCV陽(yáng)性血清進(jìn)行檢測(cè), 并且對(duì)于ALT 指標(biāo)正常的患者, 行HCV抗體檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)3例(6%)丙肝陰性抗體。雖檢測(cè)結(jié)果個(gè)別存在失誤性, 但對(duì)于絕大多數(shù)HCV抗體的檢測(cè)都較為準(zhǔn)確。

3 討論

隨著時(shí)代的進(jìn)步和發(fā)展, HCV抗體的檢測(cè)技術(shù)由常規(guī)PCR檢測(cè)發(fā)展為現(xiàn)今熒光定量PCR檢測(cè)［2］。新興的PCR檢測(cè)技術(shù)相較于常規(guī)PCR檢測(cè)而言, 存在極大的檢測(cè)優(yōu)勢(shì), 使其檢測(cè)精準(zhǔn)度得到了大幅度的提升。具有特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、靈敏度極高等各方面優(yōu)點(diǎn), 已然成為了國(guó)內(nèi)外對(duì)于HCV抗體檢測(cè)的生物研究活動(dòng)中的主流技術(shù)［3］。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng), 主要是充分的利用了熒光信號(hào)隨著PCR產(chǎn)物增加而增加的技術(shù)原理。在PCR產(chǎn)物不斷增加和擴(kuò)大的過(guò)程中, 對(duì)于反應(yīng)系統(tǒng)中有關(guān)熒光信號(hào)的變化進(jìn)行有效和精準(zhǔn)的檢測(cè), 是實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)的核心內(nèi)容。根據(jù)在反應(yīng)系統(tǒng)中的熒光信號(hào)在不斷的變化過(guò)程中得出的平均值以及其平均標(biāo)準(zhǔn)差, 并且在99.7%的置信度的具體情況下所計(jì)算出來(lái)的熒光值數(shù)據(jù)在定量熒光PCR進(jìn)行HCV檢測(cè)過(guò)程中顯得十分重要。在HCV抗體檢測(cè)過(guò)程中選取實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)與傳統(tǒng)常規(guī)的PCR技術(shù)而言, 能夠在很大程度上增加抗體定量檢測(cè)的精準(zhǔn)度［4］。

在試驗(yàn)過(guò)程中, 選取的50例ALT指標(biāo)正常, 并無(wú)惡心、嘔吐、乏力、發(fā)熱反應(yīng)的患者使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)其HCV-RNA陽(yáng)性血清進(jìn)行精確的檢測(cè)和分析。存在2例(4%)患者檢測(cè)出HCV-RNA的含量高于最低檢出限, 48例(96%)患者見(jiàn)檢測(cè)低于最低檢出限, 為陰性。造成這種現(xiàn)象的原因可能是既往感染帶來(lái)的免疫反應(yīng), 由于患者自身機(jī)能抵抗力強(qiáng), 體內(nèi)病毒少量存在, 未出現(xiàn)任何臨床反應(yīng), 病毒逐步消失, 但抗體仍然存在于體內(nèi)。由國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究和查閱相關(guān)文獻(xiàn)得知, 熒光定量PCR檢測(cè)的敏感度極強(qiáng), 降低了檢測(cè)過(guò)程中RNA的耗費(fèi)。在一定意義上, 熒光定量PCR檢測(cè)方法作為只用于被確診為攜帶HCV的患者的好辦法, 在醫(yī)學(xué)研究上也做出了卓越貢獻(xiàn)。另外在檢測(cè)結(jié)果中, 存在3例(6%)患者檢測(cè)結(jié)果表明HCV抗體呈陰性, 其余47例(94%)患者在檢測(cè)后得出的HCV抗體具體數(shù)值均在80～150 S/CO的正常范圍之內(nèi)。由于試驗(yàn)選取的患者具體情況存在一定的差異,并且選取患者例數(shù)有限, 不排除部分患者HCV-RNA血清呈陽(yáng)性但并未產(chǎn)生HCV抗體的情況。

綜上所述, 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)在國(guó)內(nèi)外HCV抗體弱陽(yáng)性的檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)展尤為迅速, 也在不斷的完善。但在HCV抗體弱陽(yáng)性的檢測(cè)過(guò)程中, 還需對(duì)HCV-RNA進(jìn)行一定的檢測(cè), 并根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)對(duì)丙肝抗體病毒進(jìn)行綜合評(píng)定。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法不失為一種好辦法,值得得到廣泛應(yīng)用。

［1］ 范文勇.實(shí)時(shí)熒光定量-PCR和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)巨細(xì)胞病毒-IgM抗體的比較.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2011, 8(2):83-84.

［2］ 劉義慶, 鄒建文, 田文君, 等.化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測(cè)抗-HCV抗體與HCV-RNA的關(guān)聯(lián)研究.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 35(13): 1749-1750.

［3］ 邵芳.HCV抗原、HCV抗體及HCV-RNA聯(lián)合檢測(cè)與ALT的相關(guān)性及其臨床意義.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志, 2014, 22(2): 80-82.

［4］ 姚仁南, 陳復(fù)興, 陳玲, 等.化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測(cè)獻(xiàn)血者HCV抗體的應(yīng)用評(píng)價(jià).中華全科醫(yī)學(xué), 2011, 9(3):450-453.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.019

2015-01-20］

463000 駐馬店市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(張美華徐清芳)；駐馬店市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(楊敏)