冠心病血瘀證患者與健康人血清蛋白質表達的差異

劉 燁

（山東省濟寧市第一人民醫(yī)院 醫(yī)學檢驗科，山東濟寧272000）

·論 著·

冠心病血瘀證患者與健康人血清蛋白質表達的差異

劉 燁

（山東省濟寧市第一人民醫(yī)院 醫(yī)學檢驗科，山東濟寧272000）

目的：研究冠心病瘀血證患者與健康人在血清蛋白質表達方面存在的差異。方法：選取8例冠心病血瘀證患者以及8名健康人士作為本次實驗的研究對象，分析兩組患者血清蛋白質存在的差異。結果：冠心病血瘀證患者與健康人士相差12個蛋白質點。結論：冠心病血瘀證患者的相關蛋白主要集中在脂質代謝與炎癥反應方面，并且發(fā)現(xiàn)了具有進一步研究價值的黃醇結合蛋白4。

冠心病血瘀證；健康人士；血清蛋白；表達差異

血瘀證是冠心病中比較常見的一類疾病。在中醫(yī)領域中蛋白質組學技術的應用，給中醫(yī)研究提供了實質性的研究新方法［1］。為了進一步提高冠心病血瘀證的治療技術，本院采用蛋白質組學相關技術對關系并血瘀證患者與健康人士的血清蛋白進行了對比分析，希望能夠找到冠心病血瘀證患者的相關特異性蛋白。現(xiàn)將本次實驗做如下詳細報道。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：選取我院2014年3月～2015年3月所診治的8例冠心病血瘀證患者以及8例健康人士作為本次實驗的研究對象，冠心病血瘀證患者有男性患者4例，女性患者4例，平均年齡為（32.897±1.58）歲，健康人士中有男性5例，女性3例，平均年齡為（33.567±1.63）歲。兩組對象在年齡與性別分布方面不存在明顯差異，（P＜0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清標本的采集與電泳：（1）清晨采集兩組人群的外周靜脈血，標準3mL，然后將采集的血液放置于非抗凝的真空采血管中，使用3000rpm對血清進行分離，10min后將其放置在－80℃的環(huán)境中存儲，備用。（2）使用Bradford法測定兩組人群的血清樣本的蛋白質濃度，并進行雙向的凝膠電泳。時間30min。（3）每塊膠使用17W的恒定功率進行電泳，指導溴酚藍的指示線達到凝膠底邊，2－DE凝膠固定以后，使用G－250考馬斯亮藍進行染色。

1.2.2 圖像分析：使用ImageScanner和LabScan對凝膠脫色后的血清樣本進行透射掃描，然后使用PD－Quest軟件對凝膠圖譜的蛋白質點進行檢查，并進一步進行統(tǒng)計、分析，尋找兩組人群的平均蛋白質點差異。

1.3 統(tǒng)計學分析：將數(shù)據(jù)納入SPSS19.0統(tǒng)計軟件中進行分析，計數(shù)資料比較采用χ2比較，以率 （%）表示，計量資料比較采用t檢驗，并以 （±s）表示，若（P＜0.05）則差異顯著，有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 2－DE結果：對所采集的兩組中的任一單個血清樣本分別進行雙向得到凝膠電泳分離，每個血清樣本都獲得了8個凝膠圖譜，圖一為典型的雙向凝膠電泳圖。使用PDQuest軟件對圖譜信息進行分析，健康人士的平均蛋白質點數(shù)為（153.27±21.63），冠心病血瘀證患者的平均蛋白質點數(shù)為（146.28±19.84），通過匹配分析和背景消減，得出冠心病血瘀證患者與健康人士的蛋白質點差異為12個。2.2 質譜鑒定結果：對12個蛋白質點進行質譜分析，得到每一個蛋白質點的肽質量指紋譜，使用NCBInr數(shù)據(jù)庫和進行搜索，11個蛋白質點為陽性，然后通過整合重復蛋白質點后，確認6個差異的蛋白質點。對兩組的蛋白質點進行比較，表達上調(diào)的有結合珠蛋白、血清蛋白和視黃醇結合蛋白4，表達下調(diào)的有載脂蛋白AI。還有兩個差異蛋白質點，由于沒有充分的證據(jù)，因此在此暫不進行說明。

3 討論

相關研究表明，結合珠蛋白是一種急性相蛋白，在多種應急反應過程中，結合珠蛋白的表達會明顯的增加，并且其在炎癥、減少細胞損傷以及抗氧化反應中也有非常重要的作用［2］。血清蛋白是在人體的血清中含量最豐富，其濃度對于冠心病的發(fā)現(xiàn)與預后有非常重要的預測價值。視黃醇結合蛋白4與血清水平的升高和脈粥樣硬化有緊密聯(lián)系［3］。冠心病血瘀證患者的相關蛋白主要集中在脂質代謝與炎癥反應方面，存在的6個差異的蛋白質點中，結合珠蛋白、血清蛋白以及視黃醇結合蛋白4為表達上調(diào)，載脂蛋白AI為表達下調(diào)，還有兩個差異蛋白質點未得到準確診斷，并且發(fā)現(xiàn)了具有進一步研究價值的視黃醇結合蛋白4，為尋找冠心病血瘀證患者的相關蛋白提供了依據(jù)。但是本次研究是得出了部分與冠心病血瘀證相關的蛋白質的信息，為了進一步的將信息完善，還應該進行更深層次的探索。

［1］蔣躍絨，李雪峰，高鑄燁，等.冠心病血瘀證患者血小板骨架蛋白差異表達分析［J］.中國循環(huán)雜志，2014，（z1）：193－194.

［2］薛梅，陳可冀，馬曉娟，等.血府逐瘀口服液對冠心病血瘀證患者血液流變學的影響及其與人類血小板抗原3基因多態(tài)性的相關性 ［J］.中西醫(yī)結合學報，2008，6（11）：1129－1135.

［3］戴澤龍，陳慧，吳小盈，等.冠心病血瘀證患者細胞色素P4502C19*17基因型分布與氯吡格雷治療后血小板聚集率及出血風險的關系 ［J］.中西醫(yī)結合學報，2012，10（6）：647－654.

Coronary heart disease（CHD）patients and healthy peop le of blood stasis syndrome of serum protein expression differences

LIU Ye
The first people＇s Hospital of Jining City，Shandong Province，Jining Shandong 272000

Objective：to study the blood stasis syndrome in patientswith coronary heart disease and healthy people in terms of serum protein expression differences.M ethods：8 patientswith coronary heart disease，blood stasis and eight healthy people as the research object of this experiment，the analysis of two groups of patients with serum protein differences.Results：the coronary heart disease（CHD）patients and healthy people of blood stasis syndrome differ 12 point of protein.Conclusion：blood stasis syndrome in patients with coronary heart disease related proteins aremainly concentrated on lipid metabolism and inflammatory reaction，and found that the yellow alcohol has further research value binding protein 4.

coronary heart disease；blood stasis；Healthy people；serum protein；expression differences

R541

A

1002－2376（2015）09－0005－02

2015－07－04