Wnt信號通路成分Wnt-5a和β-連接蛋白在卵巢癌組織中的表達及意義

楊莉，楊志宏(唐山工人醫院分院，河北唐山306000;唐山職業技術學院)

Wnt信號通路成分Wnt-5a和β-連接蛋白在卵巢癌組織中的表達及意義

楊莉1，楊志宏2
(1唐山工人醫院分院，河北唐山306000;2唐山職業技術學院)

摘要:目的探討Wnt信號通路成分Wnt-5a和β-連接蛋白(β-catenin)在卵巢癌發生、發展中的作用。方法應用免疫組織化學二步法檢測60份卵巢癌組織中Wnt-5a和β-catenin表達;分析其表達與卵巢癌臨床病理特征、預后的關系以及兩者表達的相關性。結果Wnt-5a在卵巢癌組織中陽性表達率為61.7%(37/60)，其陽性表達與卵巢癌患者年齡、腫瘤大小、組織學類型、病理分級無明顯相關性(P均＞0.05)，與腫瘤轉移相關(P＜0.05)。β-catenin在卵巢癌組織中陽性表達率為71.7%(43/60)，其陽性表達與腫瘤的分期和轉移相關(P均＜0.05)。Wnt-5a和β-catenin陽性表達患者生存時間明顯低于陰性表達患者(P＜0.05)。Spearman法分析顯示兩者表達呈正相關(r =0.344，P = 0.011)。在發生轉移的患者中Wnt-5a與β-catenin共同陽性表達率高達70%(24/ 34)。結論Wnt-5a和β-catenin通過非經典和經典Wnt通路在卵巢癌發展中發揮重要作用，兩者高表達可能協同促進腫瘤轉移，提示預后不良。

關鍵詞:卵巢腫瘤; Wnt信號通路; Wnt-5a;β-連接蛋白;免疫組織化學二步法

卵巢癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤之一，是病死率最高的婦科惡性腫瘤。卵巢癌患者早期一般無明顯癥狀及體征，約75%的患者發現時腫瘤已有遠處轉移，失去最佳手術治療時機，晚期患者5年生存率僅為20%～30%。卵巢癌的病因學研究還不十分明確，其中Wnt信號途徑的異常激活與腫瘤的發生、發展密切相關，而Wnt信號轉導通路的改變在卵巢癌的發生、發展過程中具有重要意義［1，2］。本研究觀察了Wnt信號通路中Wnt-5a蛋白和β-連接蛋白(β-catenin)在卵巢癌組織中的表達情況，探討其在卵巢癌進展中的作用。

1　材料與方法

1.1材料收集2000年1月～2010年12月唐山工人醫院經手術切除的卵巢癌組織標本60份。腫瘤直徑1～18 cm、平均4.9 cm，其中＜5 cm 31例，≥5 cm 29例; FIGO分期:Ⅰ期19例，Ⅱ期12例，Ⅲ期25例，Ⅳ期4例;組織學類型:漿液性癌44例，黏液性癌6例，子宮內膜樣癌10例;遠處轉移34例。患者年齡30～75歲、中位年齡61歲，術前均未行化療和放療。末次隨訪時間為2014年1月1日，失訪6例，存活18例，死亡36例。患者生存時間3～135個月、平均65.42個月。

1.2卵巢癌組織Wnt-5a及β-catenin表達檢測

采用免疫組織化學二步法。卵巢癌組織采用福爾馬林固定，石蠟包埋，標本進行4 μm連續切片。石蠟切片常規脫蠟至水，枸櫞酸鹽微波爐熱修復抗原，

0.3% H2O2阻斷內源性過氧化物酶室溫20min。正常山羊血清室溫封閉20min后加一抗: Wnt-5a(1∶100，R＆D Biosystems，Minneapolis，MN，USA)，βcatenin(1∶100，鼠抗人蛋白單克隆抗體，北京中杉金橋)。4℃過夜，PBS洗3遍后，加入二抗(多聚物酶標二抗，北京中杉金橋)37℃孵育60min，DAB顯色5～10min，蘇木素復染、脫水、透明、中性樹脂封片。Wnt-5a主要定位于細胞質和細胞核內;β-catenin胞膜陽性為正常表達，胞質或胞核陽性為異位表達(即陽性表達)。結果判定采用半定量積分法。光鏡下每張切片中隨機選取5個高倍視野，每個視野計數100個細胞，根據陽性細胞比例及著色程度記分:①陽性細胞比例記分:＜5%為1分，5～10% 為2分，＞10%為3分;②著色程度記分:無著色為0分，淺棕色為1分，棕色為2分，深棕色為3分。根據計分的乘積≥2定義為陽性表達。

1.3相關性分析分析Wnt-5a及β-catenin表達與卵巢癌臨床病理特征的關系及Wnt-5a與β-catenin蛋白表達的相關性。分析Wnt-5a及β-catenin蛋白表達與患者預后的關系。

1.4統計學方法采用SPSS15.0統計軟件。Wnt-5a和β-catenin表達與卵巢癌組織臨床病理學特征之間的關系采用c2檢驗，Wnt-5a及β-catenin蛋白表達相關性采用Spearman相關分析，生存分析采用Kaplan-Meier法。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1卵巢癌組織Wnt-5a及β-catenin表達卵巢癌組織Wnt-5a陽性表達率為61.7%(37/60)，βcatenin陽性表達率為71.7%(43/60)。見插頁Ⅱ圖7。

2.2 Wnt-5a及β-catenin表達與卵巢癌臨床病理特征的關系在卵巢癌組織中，Wnt-5a陽性表達與腫瘤轉移相關(P＜0.05)，與患者年齡、腫瘤大小、組織學類型、病理分級、腹水等無關(P均＞0.05);βcatenin陽性表達與腫瘤轉移、FIGO分期相關(P均＜0.05);見表1。

2.3Wnt-5a與β-catenin表達的相關性Wnt-5a 與β-catenin蛋白在卵巢癌中的表達呈正相關(r = 0.344，P =0.011)。

2.4 Wnt-5a及β-catenin表達與患者預后的關系Wnt-5a及β-catenin表達均與患者的預后相關，陽性表達者病死率高于陰性表達者(Wnt-5a: c2=5.324，P =0.021;β-catenin: c2= 4.265，P = 0.039)。見插頁Ⅱ圖8。

表1　Wnt-5a及β-catenin表達與卵巢癌臨床病理特征的關系［例(%)］

3　討論

Wnt信號可通過β-catenin依賴性通路(經典Wnt信號)和β-catenin非依賴性通路(非經典Wnt信號)轉導，Wnt-5a及β-catenin蛋白作為非經典和經典Wnt信號通路中的關鍵分子，可能在卵巢腫瘤進展中發揮重要作用［3］。

Wnt-5a是非經典Wnt信號通路家族中的重要一員，因其可結合不同的受體，激活或抑制Wnt/βcatenin通路，既可發揮抑癌基因作用，也可以發揮致癌基因作用［4，5］。如在轉移性神經母細胞瘤中，Wnt-5a表達較原發性神經母細胞瘤低，發揮抑癌基因作用，而在乳腺癌、黑色素瘤和胃癌等多種癌癥中過表達，提示其為促癌因子［6］。Badiglian等［1］研究發現，Wnt-5a蛋白在卵巢癌中表達明顯高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織，Wnt-5a高表達的卵巢癌患者預后較差、生存時間短，提示Wnt-5a參與了卵巢癌的進展。而Bitler等［7］研究認為，Wnt-5a在卵巢癌組織中表達明顯低于正常卵巢組織，提示Wnt-5a可能作為抑癌基因抑制細胞凋亡。本研究相關性分析分析發現，Wnt-5a陽性表達與卵巢癌患者年齡、腫瘤大小、組織學類型、病理分級沒有明顯相關性，而與腫瘤轉移有關。存在轉移者Wnt-5a表達較高，且Wnt-5a表達與預后有關。

Wnt/β-catenin通路是高等動物發育過程中關鍵的信號通路之一，主要參與細胞的增殖、分化、凋亡等，在多種癌癥中可發現其不同程度的過表達。

Yao等［8］研究發現，Wnt/β-catenin通路在卵巢發育過程中起到了關鍵性的作用。β-catenin是一個重要的細胞質蛋白，當促癌信號激活時可以導致胞質β-catenin異位進入胞核，促進與腫瘤有關基因的轉錄［3］。β-catenin不僅是Wnt信號傳導途徑中的轉錄激活因子，而且是細胞間重要的黏附分子，參與細胞間的黏附、生長、增殖和轉移等過程。作為Wnt通路中的下游分子，其介導的Wnt信號傳導通路的異常激活與腫瘤的發生密切相關，其可能涉及到卵巢癌的發生、發展［9～11］。本研究發現，β-catenin在卵巢癌組織中存在異位表達，提示卵巢癌中存在著Wnt/β-catenin通路的異常激活。卵巢癌如果發生轉移，轉移部位細胞膜的β-catenin的表達量明顯高于原發部位［12，13］。本研究發現，卵巢癌組織β-catenin陽性表達率達85%，可見β-catenin異常表達是促使卵巢癌發生轉移的一個重要因素;且其表達還與卵巢癌的分期有關，說明β-catenin作為經典Wnt信號通路的關鍵組成部分參與了卵巢癌的發生和發展。

Wnt-5a既能活化經典的Wnt信號通路又能活化非經典Wnt信號通路，而且非經典信號通路與經典信號通路相互作用，非經典信號通路的活化又可以阻斷經典信號通路，發揮抑癌作用。本研究發現Wnt-5a和β-catenin表達呈正相關，并且均與腫瘤的轉移相關，在有轉移的患者中共同陽性表達高達70%，提示在卵巢癌患者癌癥轉移過程中經典Wnt信號通路與非經典Wnt信號通路可能起協同調控作用。而Miller等［14］認為，Wnt-5a不通過募集細胞內β-catenin激活相關轉錄因子，促進腫瘤細胞增殖和侵襲，兩者在卵巢癌中具體的調控機制仍需進一步研究。

綜上所述，腫瘤的浸潤轉移是一個多階段的復雜過程，首先腫瘤細胞間黏附能力喪失，導致腫瘤細胞脫落，細胞間的黏附作用決定組織形態學發生，并調節細胞的生長、分化及存活等多個過程。Wnt信號傳導通路包括經典通路和非經典通路兩種，前者主要參與機體的正常生長發育和細胞增殖，一般處于非激活狀態，當該信號通路非正常激活或者βcatenin異常表達時，就與多種腫瘤的發生、組織學分級、轉移等相關。研究卵巢癌組織中經典與非經典Wnt信號通路的異常改變機制及其信號通路之間的關系，可為卵巢癌的治療提供新思路。

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收稿日期:( 2014-10-11)

文章編號:1002-266X(2015)36-0061-03

文獻標志碼:B

中圖分類號:R737.31

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.36.024