家畜布氏桿菌病的檢疫方法

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家畜布氏桿菌病的檢疫方法

楊曌斌

( 黑龍江省牡丹江市畜牧獸醫(yī)局157000)

布氏桿菌病是家畜的一種慢性傳染病，主要侵害生殖系統(tǒng)。感染后，以母畜發(fā)生流產(chǎn)和公畜發(fā)生睪丸炎為特征，可應用血清學方法檢出血清中有抗體存在，則說明被檢動物為布氏桿菌病畜。動物感染布氏桿菌以后首先出現(xiàn)的是凝集抗體，再過一段時間才出現(xiàn)補體結(jié)合抗體，最后產(chǎn)生變態(tài)反應性。補體結(jié)合反應是一種高度特異性的，其陽性反應與感染的符合率，比血清凝集試驗與感染的符合率高。此種方法用來鑒別注苗后和自然感染所引起的血清學反應很有價值，如4～8個月犢牛注射19號菌苗，經(jīng)過6個月后補體結(jié)合反應為陰性，而血清凝集反應仍為陽性或可疑。我國的家畜布氏桿菌病檢疫應用的免疫生物學方法主要是凝集試驗，補體結(jié)合試驗及變態(tài)反應試驗。本試驗按《家畜布氏桿菌病試管凝集反應技術(shù)操作規(guī)程及判定標準》進行。

1材料準備

抗原由獸醫(yī)生物藥品廠生產(chǎn)供應。使用時用0.5%石炭酸生理鹽水作1∶20稀釋，長霉或出現(xiàn)凝集塊的抗原不能應用。被檢血清必須新鮮無明顯蛋白凝固，無溶血現(xiàn)象和腐敗氣味。陽性血清和陰性血清由獸醫(yī)生物藥品廠生產(chǎn)供應。稀釋液為0.5%石炭酸生理鹽水，用化學純石炭酸與氯化鈉配制，經(jīng)高壓滅菌后備用。檢疫羊用稀釋液用0.5%石炭酸、10%氯化鈉溶液。

2操作步驟

牛、馬、駱駝用1∶50、1∶100、1∶200、1∶400四個稀釋度；豬、山羊、綿羊和犬用1∶25、1∶50、1∶100、 1∶200四個稀釋度。稀釋血清和抗原加入方法:取5支小試管先加入稀釋液0.5%石炭酸生理鹽水，第一管加2.3mL，從第二管不加，第3、4、5管加0.5mL。取被檢血清0.2mL加入到第一管中，混勻，分別取0.5mL加入2、3管中。將第三管混勻，吸0.5mL加入第四管，混勻，吸0.5mL加入第五管。血清最后稀釋度為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200，震蕩使血清和抗原充分混合，放入37℃溫箱18~20h，取出后室溫靜置2h，記錄每管的反應情況，出現(xiàn)50%以上凝集的最高稀釋度就是這份血清的凝集價。 實驗應該設(shè)立陰性血清對照、陽性血清對照和抗原對照。陰性血清對照:操作步驟與被檢血清相同。陽性血清對照:陽性血清稀釋到原有滴度，其他同上。抗原對照:已稀釋抗原0.5mL，稀釋液0.5mL。

牛、馬、駱駝血清凝集價在1∶100以上；豬、山羊、綿羊和犬在1∶50以上，判定為陽性。牛、馬、駱駝血清凝集價在1∶50以上；豬、山羊、綿羊和犬在1∶25以上，判定為可疑。可疑家畜經(jīng)過3~4周重檢，牛、羊重檢仍然為可疑，可判定為陽性，豬、馬重檢仍然為可疑，但是無臨床癥狀判定為陰性。試管凝集試驗也可用簡便方式進行，即以0.2mL吸管將被檢血清以0.08、0.04、0.02及0.01分別加人4支小試管內(nèi)，然后每管加人1∶40稀釋的抗原1mL，充分搖勻，這樣4管血清的最后稀釋度分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶2000。

牛、馬和駱駝的血清稀釋和加抗原的方法與前述者一致，不同的僅第一管加稀釋液2.4mL及被檢血清0.1mL。加抗原后從第2~5管血清稀釋度依次為1∶50、1∶100、1∶200和1∶400。

每次試驗須作三種對照，陰性血清對照的操作步驟與被檢血清者相同。陽性血清對照須將血清稀釋到其原有滴度，其他步驟同上。抗原對照即將當時使用的乙稀釋抗原0.5mL，稀釋液0.5mL。每次試驗須制備比濁管，以為記錄結(jié)果的依據(jù)，配制方法即以當時使用的已稀釋抗原加等量稀釋液，

全部試管充分振蕩后，置37～38℃溫箱中，22～24h后用比濁管對照檢查記錄結(jié)果。出現(xiàn)50%以上凝集的最高稀釋度就是這份血清的凝集價，因此50%亮度的比濁管很重要。

3結(jié)果判定

牛、馬和駱駝血清凝集價為1∶100以上，豬、羊和犬1∶50以上者，判為陽性。牛、馬和駱駝血清凝集價為1∶50，豬、羊和犬為1∶25者判為可疑。可疑反應的家畜經(jīng)3～4周重檢，牛、羊重檢時仍為可疑，判為陽性。豬和馬重檢時仍為可疑，但農(nóng)場中未出現(xiàn)陽性反應及無臨診癥狀的家畜，判為陰性。

鑒于豬血清常有個別出現(xiàn)非特異性凝集反應在試驗時須結(jié)合流行病學判定結(jié)果。如果出現(xiàn)個別弱陽性，但豬群中均無臨診癥狀，可以考慮此種反應為非特異性，經(jīng)3～4周可采血重檢。