液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查在痰液肺癌細(xì)胞篩查中的價(jià)值

林淑端，陳石橋，潘啟森

（佛山市南海經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院，廣東 528234）

液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查在痰液肺癌細(xì)胞篩查中的價(jià)值

林淑端，陳石橋，潘啟森

（佛山市南海經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院，廣東 528234）

目的探討液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）在痰液癌細(xì)胞篩查中的應(yīng)用及價(jià)值。方法選取2011年1月1日至2013年12月30日該院呼吸內(nèi)科收治的肺癌患者共300例，按照檢查方法不同分為觀察組（100例）和對(duì)照組（200例）。觀察組采用TCT法進(jìn)行檢測，對(duì)照組采用痰液傳統(tǒng)涂片檢查進(jìn)行檢測，比較兩組患者陽性診斷率。結(jié)果對(duì)照組陽性診斷率[51.5%（103/200）]低于觀察組[74.0%（74/100）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論肺癌采用TCT檢查診斷率高，且顯著優(yōu)于傳統(tǒng)檢查方法。

肺腫瘤； 活組織檢查； 細(xì)胞學(xué)技術(shù)； 痰； 液基薄層細(xì)胞學(xué)

痰細(xì)胞學(xué)檢查是臨床上肺癌普查及診斷的一種簡便有效的方法，相關(guān)細(xì)胞學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肺癌患者痰液中存在脫落的癌細(xì)胞，通過痰液檢查可進(jìn)行初步診斷并具有較高的診斷率[1]。臨床上常見的檢查方法為傳統(tǒng)涂片檢查，但檢查中因受到多重因素（如涂片中存在大量血細(xì)胞、黏液等雜質(zhì)，易對(duì)檢查結(jié)果造成干擾）的影響，導(dǎo)致陽性診斷率較低，且檢測中需要拋棄大部分的樣本細(xì)胞，易造成標(biāo)本浪費(fèi)[2]。液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）作為一種新型的細(xì)胞學(xué)檢查方法，已在臨床癌細(xì)胞檢查中廣泛應(yīng)用并取得較好效果。本研究選取本院呼吸內(nèi)科收治的肺癌患者共300例，重點(diǎn)觀察并探討TCT、傳統(tǒng)涂片方法在痰液癌細(xì)胞篩查中的應(yīng)用，現(xiàn)將相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月1日至2013年12月30日本院呼吸內(nèi)科收治的肺癌患者共300例，其中男200例，女100例；年齡25～75歲，平均（44.7±2.7）歲。所有患者均經(jīng)外科手術(shù)切除病理或纖維支氣管鏡活檢診斷證實(shí)。其中肺鱗癌104例，肺腺癌102例，小細(xì)胞肺癌94例。所有患者均接受痰細(xì)胞學(xué)檢查，按照檢查方法不同分為觀察組（100例）和對(duì)照組（200例）。對(duì)照組中男108例，女92例；年齡23～76歲，平均（43.5±2.4）歲。觀察組中男54例，女46例；年齡25～75歲，平均（44.7±2.7）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法 檢測前進(jìn)行標(biāo)本采集（住院患者早上進(jìn)食前咳痰取樣），要求所有患者咳痰前清水漱口，清除口腔內(nèi)的唾液、食物殘?jiān)３挚谇粷崈簟Ｈ∈軝z者咳出痰液1～2口并保存于痰標(biāo)本瓶中，保存過程中避免“口水樣”泡沫痰及鼻吸痰，填寫好申請單送檢。

1.2.1 傳統(tǒng)痰液染色及TCT檢查方法 對(duì)照組采用傳統(tǒng)痰液染色進(jìn)行檢查，檢查前將使用的玻璃器具清洗干凈、烘干備用，用1支滴管吸取10～20 mL痰液作濃集法用，采用抗酸染色液配制，將痰液制成傳統(tǒng)涂片4張（痰涂片時(shí)優(yōu)先選擇帶有血絲或蛋清樣透明黏液痰），巴氏染色，樹脂膠封固后顯微鏡下閱片[3]。觀察組采用TCT進(jìn)行檢測，儀器為美國新柏氏超薄細(xì)胞檢測儀。TCT的制片方法：將痰液的一小部分直接加入40 mL清洗液中，并吸取7～8滴消化液混勻振蕩，約10 min后進(jìn)行2 500 r/min離心處理，時(shí)間為5 min。根據(jù)標(biāo)本黏液量加入黏液稀釋液，混勻靜置30 min，充分震蕩，確保黏液完全消化離心后放置進(jìn)行沉淀，并采集沉淀物進(jìn)行保存，然后用Thin Prep制成薄層細(xì)胞涂片進(jìn)行檢查（過濾黏液絲，通過樣本轉(zhuǎn)移機(jī)轉(zhuǎn)移樣本；2次離心，清洗，收集細(xì)胞，然后棄上清液，沉渣涂片）。95%乙醇固定10 min，巴氏染色[4-5]。

1.2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 通過傳統(tǒng)涂片及TCT仍不能分型的病例標(biāo)本進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，具體方法及流程為：石蠟切片（4 μm）后脫蠟水化。滴加過氧化物酶阻斷溶液（試劑A），放置室溫孵育10 min后用PBS沖洗；滴加非免疫性動(dòng)物血清（試劑B），室溫孵育10 min；滴加一抗，室溫孵育90 min，PBS沖洗；滴加生物素標(biāo)記的二抗（試劑C），室溫孵育20～30 min，PBS沖洗；滴加鏈霉素抗生物素-過氧化物酶溶液（試劑D），室溫孵育20～30min，PBS沖洗；最后二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，使用梯度乙醇進(jìn)行脫水處理，二甲苯透明，中樹膠封固[6]。

1.2.3 閱片及分析 2種涂片制備方法均由同一組細(xì)胞學(xué)專家閱片，對(duì)痰涂片細(xì)胞進(jìn)行分級(jí)、分型診斷。采用3級(jí)分類診斷法將結(jié)果分為陰性、可疑、陽性。分析時(shí)將可疑、陰性合并為一組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組陽性診斷率比較 對(duì)照組200例患者中103例發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞，細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果為陰性76例，可疑21例，陽性診斷率為51.5%；觀察組100例患者中74例發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞，細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果為陰性20例，可疑6例，陽性診斷率為74.0%。兩組陽性診斷率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 兩組中共有34例患者無法通過痰液檢查進(jìn)行判斷，進(jìn)一步通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行檢查，結(jié)果顯示，30例為陽性，其中鱗癌7例，腺癌5例，小細(xì)胞肺癌9例，細(xì)胞增生9例，另外4例因細(xì)胞含量過少無法進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色。

3 討 論

痰脫落細(xì)胞學(xué)檢查在臨床上的應(yīng)用至今已有80多年，其在非損傷途徑早期診斷肺癌中具有較好的效果，是診斷肺癌的有效手段之一。以往多采用傳統(tǒng)方法進(jìn)行檢查，但傳統(tǒng)方法痰涂片受標(biāo)本采集、處理方法，制片等諸多因素影響，因?yàn)橐讓?dǎo)致病變細(xì)胞可能未被涂片，同時(shí)涂片黏液成分相對(duì)較多，一些細(xì)胞層不均勻或過厚，使過多的黏液、血液或炎癥細(xì)胞遮蓋了不正常細(xì)胞，從而使細(xì)胞容易腫脹變性，而且結(jié)構(gòu)不清會(huì)直接影響診斷結(jié)果。臨床調(diào)查顯示，假陰性率高達(dá)40%左右，從而嚴(yán)重地影響了臨床治療，使其臨床應(yīng)用價(jià)值降低。

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，TCT由美國FDA批準(zhǔn)，作為一種改善的制片技術(shù)，根據(jù)制片原理不同TCT一般可分為液基薄層制片技術(shù)和液基離心沉淀式薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)。檢查原理是將標(biāo)本采集到有特殊緩沖固定液的容器中，緩沖固定液中收集的細(xì)胞，通過渦輪震蕩和混勻后用梯度離心的方法進(jìn)行處理，有效去除非上皮細(xì)胞成分，采集具有診斷價(jià)值的細(xì)胞集中于試管底部。將采集的試管底部的細(xì)胞再次混勻后自動(dòng)移入沉降管，通過自然重力作用使細(xì)胞黏附在載玻片上形成直徑1.3 cm的細(xì)胞薄層，該方法是目前液基細(xì)胞技術(shù)中對(duì)病變細(xì)胞檢出率較高的技術(shù)之一。

痰液細(xì)胞學(xué)篩查對(duì)于早期肺癌的診斷具有重要意義，并逐漸成為臨床診斷的主要方法之一，但常用的傳統(tǒng)痰涂片檢查因?yàn)樵跇?biāo)本采集、處理及制片過程中影響因素過多而導(dǎo)致檢測結(jié)果有效率下降，出現(xiàn)假陰性的情況（因?yàn)檠装Y或血液遮蓋住不正常細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹變性或結(jié)構(gòu)不清）。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，TCT作為一種新型的檢測方法已在臨床廣泛應(yīng)用，并取得較好效果，其工作原理是將采集的痰液標(biāo)本加入緩沖固定液中，混勻后進(jìn)行離心處理，然后收集具有診斷價(jià)值的細(xì)胞并置入沉降管中，進(jìn)而形成細(xì)胞薄層。操作過程中，TCT在痰液制備和染色中易于控制，方便快捷，是當(dāng)前肺癌普查的有效方式之一，在肺癌早期診斷中具有重要的臨床價(jià)值[7-9]。對(duì)于影像學(xué)無法準(zhǔn)確判斷的患者，聯(lián)合TCT和傳統(tǒng)痰液涂片檢查可顯著提高臨床診斷率。

在傳統(tǒng)涂片取材及其檢測過程中，臨床醫(yī)生主要憑借經(jīng)驗(yàn)來挑取少量標(biāo)本進(jìn)行制片，但這種情況易出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞遺漏。相對(duì)于傳統(tǒng)涂片檢測，液基制片能解決傳統(tǒng)涂片存在的以上問題。液基細(xì)胞學(xué)制片主要是將所有痰標(biāo)本均收集起來，去除其部分雜質(zhì)成分，然后先混勻和轉(zhuǎn)移。為提高痰液基制片的陽性率，具體檢測過程中需要了解患者咳出的痰標(biāo)本中是否有腫瘤細(xì)胞。通過液基制片技術(shù)進(jìn)行痰液腫瘤細(xì)胞的篩選，檢測中其背景干凈、雜質(zhì)成分少、細(xì)胞均勻平鋪，有利于更好地進(jìn)行觀察，檢測細(xì)胞無退變，細(xì)胞體積與傳統(tǒng)涂片比較稍微縮小，采用沉降式技術(shù)，腺癌的三維立體結(jié)構(gòu)非常明顯[10-12]。

本次研究對(duì)比了TCT和傳統(tǒng)痰液涂片2種檢測方法的效果，結(jié)果顯示，TCT的陽性診斷率為74.0%，顯著高于傳統(tǒng)痰液涂片檢查的51.5%。相對(duì)于傳統(tǒng)痰液涂片檢查，TCT法能廣泛收集腫瘤細(xì)胞并根據(jù)需求獲取多張圖片，同時(shí)細(xì)胞涂膜面積小，涂片背景干凈，陽性細(xì)胞不易出現(xiàn)漏診，檢測結(jié)果清晰，層次分明，可清楚顯示核膜、核仁及染色質(zhì)等細(xì)微結(jié)構(gòu)。

綜上所述，在肺癌患者臨床檢查診斷過程中，采用TCT診斷率高，其在制片、染色等方面具有很多優(yōu)勢，是值得推廣的新技術(shù)，其應(yīng)用于肺癌的診斷具有陽性率高、無創(chuàng)傷、簡便、安全的優(yōu)點(diǎn)，在臨床上具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.08.038

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：1009-5519（2015）08-1215-03

2014-09-16

2014-11-05）

林淑端（1967-），女，廣東大埔人，主治醫(yī)師，主要從事外科病理工作；E-mail：457747794@qq.com。