UGT1A1 G71R突變、G6PD缺陷對新生兒光療率的影響

傅雯萍

天津武警后勤學院附屬醫院兒科,天津市　300162

UGT1A1 G71R突變、G6PD缺陷對新生兒光療率的影響

傅雯萍

天津武警后勤學院附屬醫院兒科,天津市300162

新生兒黃疸發生率高，但不一定均需光療干預，有光療干預指征時才需光療。本文主要研究UGT1A1常見編碼區G71R基因突變、G6PD缺陷的新生兒發生新生兒黃疸時光療率的變化。

1對象與方法

1.1對象回顧分析102例入住新生兒科及產科病房的廣西籍新生兒。全部為足月兒，胎齡(270.30±7.66)d，出生體重(3.16±0.46)kg，90%為母乳喂養。排除早產、低出生體重兒、缺氧窒息、敗血癥、頭顱血腫、肝功異常、21三體、紅細胞增多癥、低血糖、母妊娠合并其他疾病的新生兒。據UGT1A1基因型、G6PD狀態分為四組：A組： G6PD缺乏+G71R突變純合子或雜合子組；B組：G6PD缺乏+G71R正常野生型組；C組：G6PD正常+G71R突變純合子或雜合子組；D組：G6PD正常+G71R野生型組。男女例數之比、出生體重、胎齡、采樣時間、母乳喂養率、剖腹/陰式分娩方式、民族構成、催產素使用率及量在各比較組之間無統計學差別。

1.2方法

1．2.1標本采集：臍血或24h內新生兒血用于G6PD酶活性及血白細胞DNA提取。

1.2．2G6PD酶活性：四氮唑藍定量法-NBT法測定。

1.2.3UGT1A1 G71R突變檢測：PCR-ASO 法(聚合酶鏈反應-等位基因特異性寡核苷酸探針點雜交法)。探針：71A：5’-AGA GAC GGA GCA TT-3’；71T：5’-AGA GAC AGA GCA TT-3’。上游引物：5’-AAG TAG GAG AGG GCG AAC C-3’；下游引物：5’-GTC CCA CTC CAA TAC ACA C-3’。探針與引物設計參照Akaba[1]。其中選取10例進行直接測序驗證結果。

1.2.4膽紅素水平檢測：包括血清膽紅素值、經皮膽/微膽。每日至少檢測經皮膽或微膽1次，必要時靜脈取血檢測血清膽紅素水平。

1.2.5標準：根據2001年方案[2]，凡總膽值達考慮光療或光療值的足月新生兒均進行光療。G6PD缺陷：G6PD酶活性<6.6g/Hb。G6PD正常：G6PD酶活性為11.8~30g/Hb。黃疸新生兒為肉眼可看出存在皮膚、黏膜有黃染的新生兒。

1.3統計分析數據用SPSS10.0統計軟件，進行χ2檢驗。P<0.05為差異有顯著性。

2結果

2.1G6PD缺陷與正常組中，UGT1A1基因型分布情況102例新生兒中，59例為G6PD缺陷新生兒，G71R等位基因突變頻率為22.03%；43例為G6PD正常新生兒，G71R等位基因突變頻率為22.09%。等位基因突變頻率在組間無統計學差異。詳見表1。

表1　G6PD缺陷組與正常組新生兒中UGT1A1

2.2不同組間高膽紅素血癥發生率的比較從表2中可以看出，G6PD缺陷同時合并有UGT1A1 G71R突變純合子或雜合子的新生兒組高膽紅素血癥發生率高于G6PD正常且UGT1A1 G71R為正常野生型的新生兒組，說明G6PD缺陷同時合并UGT1A1 G71R突變對新生兒高疸紅素血癥的發生率有明顯的協同作用；而G6PD缺陷或UGT1A1 G71R突變單獨存在時對新生兒高膽紅素血癥的發生率影響不大。

表2　G6PD缺乏與G71R突變共存高膽發生率與

注：▲表示有統計學意義。

3討論

膽紅素排出體外，需要經肝酶葡萄糖醛酸轉移酶(UGT1)的作用，在肝細胞內與葡萄糖醛酸結合成水溶性膽紅素葡萄糖醛酸。UGT1酶的基因UGT1A1在編碼區出現突變，則導致UGT1酶的結構異常，從而使酶催化結合反應能力降低或缺失[3]。UGT1A1第一外顯子上的一個較常見的基因多態性為211號核苷酸 G→A突變，71位密碼子由GGA變成AGA，相應編碼的甘氨酸變成精氨酸即G71R突變，為亞洲人中常見的突變, 與新生兒高膽紅素血癥相關。對酶的體外研究表明G71R突變的純合子、雜合子基因表達分別僅為正常無此突變野生型的(32.2±1.6)%和(60.2±2.5)%[1]。

G6PD缺陷是全球最常見的一種遺傳病，中國南方人群中G6PD缺陷是新生兒高膽紅素血癥的主要病因之一。臺灣黃慶山[4]對212名G6PD 缺陷及232名正常對照組的男性新生兒進行UGT1A1基因全序列測定的研究，結果發現UGT編碼區突變純合子與G6PD缺乏共存時高膽紅素血癥的危險性增高。本研究也得出同樣的結論，G6PD缺陷與UGT1A1 G71R突變共存使新生兒黃疸的程度較重，需要光療的例數比對照組增加，且有統計學意義。單獨存在UGT1A1 G71R突變純合子或雜合子或單獨存在G6PD缺陷的黃疸新生兒組的光療率與對照組相比均無統計學意義。

因本文是回顧性分析，應用的是2001年新生兒黃疸干預推薦方案中的光療指征[2]，近期的新生兒黃疸診療原則的專家共識中提到：2001年制定的新生兒黃疸干預推薦方案仍適用于指導新生兒黃疸診斷與治療[5]。最新教材《兒科學》第8版中提出的光療指征[6]：各種原因導致的足月兒血清總膽紅素水平>205μmol/L，均可給予光療，另可參考2004年美國兒科學會新生兒黃疸診療指南中給出的光療干預列線圖進行光療，未述及我國原有的干預推薦方案，但國內目前仍在使用。所以，適合我國國情的新的細化的光療指征有待進一步研發和確定。

我國南方G6PD缺陷較多見，本研究提示：對G6PD缺陷新生兒，如同時存在UGT1A1 G71R突變更應重視，更需積極干預。

參考文獻

[1]Akaba K,Kimura T,Sasaki A,etal.Neonatal hyperbilirubinemia and mutation of the bilirubin uridine diphosphate-glucuronosyltransferase gene:a common missense mutation among Japanese, Koreans and Chinese〔J〕.Biochem Mol Biol Int,1998,46(1):21-26.

[2]中華醫學會兒科學分會新生兒學組.新生兒黃疸干預推薦方案〔J〕.中華兒科雜志,2001,39(3):185-187.

[3]Kaplan M,Hammerman C,Maisels MJ.Bilirubin genetics for the nongeneticist: Hereditary defects of neonatal bilirubin conjugation〔J〕.Pediatrics,2003,111(4):886-893.

[4]Huang CS,Chang PF,Huang MJ,etal.Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency,the UDP-glucoronosyl transferase transferase 1A1 gene,and neonatal hyperbilirubinemia〔J〕. Gastroenterology,2002,123(1):127-133.

[5]中華醫學會兒科學分會新生兒學組.新生兒黃疸診療原則的專家共識〔J〕.中華兒科雜志,2010,48(9):685-686.

[6]王衛平，主編.兒科學〔M〕.第8版.北京:人民衛生出版社,2013:125.

(編輯落落)

摘要目的：探討葡萄糖醛酸轉移酶UGT1A1 G71R突變、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)缺陷對黃疸新生兒光療率的影響。方法：測定102例黃疸新生兒臍血的G6PD活性(四氮唑藍定量法)及UGT1A1 G71R基因型(等位基因特異性寡核苷酸探針點雜交法)并予分組比較。結果：G6PD缺陷同時合并有UGT1A1 G71R突變純合子或雜合子的黃疸新生兒組的前3d光療率(100.0%)高于G6PD正常且UGT1A1 G71R為正常野生型的黃疸新生兒組(64.0%)，(χ2=6.16，P=0.01)。單獨存在UGT1A1 G71R突變純合子或雜合子或單獨存在G6PD缺陷的黃疸新生兒組的光療率與對照組相比均無統計學意義。結論：UGT1A1 G71R基因突變與G6PD缺陷共存時需光療的黃疸新生兒增多，故對二者共存的黃疸新生兒應積極干預。

關鍵詞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷癥新生兒黃疸UGT1A1基因

The Effect of the UDP-glucuronosyl Transferase Transferase 1A1 Gene Mutation and Glucose-6-phosphate Dehydrogenase Deficiency to the Ratio of Phototherapy of Jaundice Neonates

FU Wenping.DepartmentofPediatrics,theAffiliatedHospitalofLogisticsCollegeofChinesePeople’sArmedPoliceForce,TianjinCity300162

ABSTRACTObjective:This study was to investigate the effect of G71R mutation in the first exon of the uridine 5’-diphosphate-glucuronosyl transferase 1A1(UGT1A1) gene and glucose-6-phosphate dehydrogenase(G6PD) to the ratio of phototherapy of jaundice neonates.Methods:102 umbilical cord blood samples had been collected for neonatal screening of G6PD activity and identification of UGT1A1 G71R mutation by nitroblue tetrazolium (NBT) test and polymerase chain reaction combined with allele-specific oligonucleotide assay(ASO-PCR),respectively.Results:The ratio of phototherapy of jaundice neonates in three days after born for those neonates who bearing the homozygous or heterozygous variant of the UGT1A1 gene and G6PD-deficient at the same time was significantly higher than those who are normal wide-types of the UGT1A1 gene and G6PD-normal.No significant differences were noted for the ratio of phototherapy of jaundice neonates between G6PD-deficient group or bearing the homozygous or heterozygous variant of the UGT1A1 gene group and control group.Conclusion:UGT1A1 G71R gene mutation combined with G6PD-deficiency make more jaundice neonates who need phototherapy, therefore we suggest to active intervention to these neonates.

KEY WORDSGlucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency,Newborn, Jaundice,UGT1A1 gene

收稿日期2015-02-03

中圖分類號：R722.17

文獻標識碼：A

文章編號：1001-7585(2015)13-1700-02