硫化氫對肥胖小鼠肝脂質(zhì)蓄積的影響

鄭乃汭，張優(yōu)敬，吳東棟，劉　彬，吉愛玲，李彥章，皇甫超申(.河南大學(xué)護(hù)理學(xué)院，河南開封　475000;.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，河南開封　475004)

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硫化氫對肥胖小鼠肝脂質(zhì)蓄積的影響

鄭乃汭1，2，張優(yōu)敬2，吳東棟2，劉彬1，吉愛玲2，李彥章2，皇甫超申2
(1.河南大學(xué)護(hù)理學(xué)院，河南開封475000;2.河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，河南開封475004)

中國圖書分類號: R-332; R322.47; R344; R575. 5; R589. 2; R916. 4; R977. 3

摘要:目的探討硫化氫對肥胖小鼠肝臟脂質(zhì)蓄積的影響。方法C57BL/6J小鼠，隨機(jī)分為對照組、模型組、硫化氫干預(yù)組。對照組喂普通飼料，模型組和硫化氫干預(yù)組喂高脂飼料。從第13周開始，硫化氫干預(yù)組注射硫氫化鈉，劑量為50 μmol·kg－1·d－1，模型組注射等量生理鹽水，16周末處死動物。肝臟組織勻漿，取上清，做生化檢測，測量各組小鼠肝組織中甘油三酯、膽固醇含量;肝臟石蠟切片做H＆E染色觀察肝組織一般形態(tài);冷凍切片，油紅染色觀察肝組織脂質(zhì)蓄積情況;肝臟新鮮冰凍組織提取RNA，PCR檢測小鼠肝臟中CPT-1、FAS的基因表達(dá)情況，并用ELISA法檢測CPT-1、FAS的活性。結(jié)果模型組、硫化氫干預(yù)組小鼠體重明顯高于對照組。與模型組相比，硫化氫干預(yù)組小鼠體重減輕;肝組織內(nèi)甘油三酯、膽固醇含量明顯下降;肝組織病理變化程度減輕，脂質(zhì)蓄積減少;肝臟CPT-1表達(dá)及活性增高，F(xiàn)AS表達(dá)及活性降低。結(jié)論硫化氫可以降低肥胖小鼠肝組織脂肪含量，減輕肝脂肪變性程度，其機(jī)制可能與肝組織CPT-1表達(dá)增加、FAS表達(dá)下降有關(guān)。

關(guān)鍵詞:硫化氫;肥胖;脂肪肝;脂肪酸合成酶;肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶-1;小鼠

網(wǎng)絡(luò)出版時間:2015－6－5 11:22網(wǎng)絡(luò)出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20150605.1122.012.html

皇甫超申(1964－)，男，碩士，教授，研究方向:環(huán)境醫(yī)學(xué)，Tel:0378-3880585，E-mail: chaoshen6403@ henu.edu.cn.

隨著人們生活水平的提高，生活方式的改變，肥胖患病率呈逐年上升趨勢。肥胖的發(fā)生原因主要是不合理的膳食結(jié)構(gòu)，特別是高脂飲食造成的。約50%的肥胖癥患者合并有非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)，由此引發(fā)非酒精性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)、肝硬化甚至肝癌。有研究表明，肥胖程度與非酒精性脂肪肝、非酒精性肝炎的病變程度明顯相關(guān)［1］。高脂飲食造成高脂血癥，進(jìn)而脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)異常蓄積，導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變性是肝細(xì)胞遭受高血脂的第一次打擊。發(fā)生脂肪變性的肝細(xì)胞功能下降，對氧化應(yīng)激、炎癥因子損傷的敏感性增強，當(dāng)高脂血癥時，體內(nèi)氧自由基和過氧化脂質(zhì)水平增加，抗氧化能力下降，極易造成高血脂對肝細(xì)胞的二次打擊，從而導(dǎo)致非酒精性肝炎的發(fā)生和病變的進(jìn)展。

有研究證實，高脂血癥患者血漿內(nèi)硫化氫(hydrogen sulfide，H2S)含量下降［2］。高脂飼養(yǎng)的小鼠血漿或肝組織內(nèi)硫化氫含量也降低［3］。硫化氫是一種氣體信號分子，發(fā)揮穩(wěn)定血壓、舒張血管、調(diào)節(jié)胃腸道功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)興奮和腎臟保護(hù)作用。過去，硫化氫一直被認(rèn)為是一種無色、具有臭雞蛋氣味的有毒氣體，過量吸入會對身體很多器官造成嚴(yán)重的損害，直到20世紀(jì)90年代，Abe、Kimura發(fā)現(xiàn)硫化氫作為一種神經(jīng)活性物質(zhì)而存在，因此硫化氫被認(rèn)為是繼NO、CO之后的第3種氣體信號分子［4］。在哺乳動物體內(nèi)，硫化氫以半胱氨酸為底物，在5’磷酸－吡哆醛依賴性酶的胱硫醚-β-合酶(cystathionine-β-synthase，CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)，以及非5’-磷酸－吡哆醛依賴性酶3-巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase，3-MST)的催化下產(chǎn)生［5］。肝臟是體內(nèi)生成H2S的主要部位，H2S可以調(diào)節(jié)正常大鼠及肝硬化大鼠的肝內(nèi)微循環(huán)，改善肝硬化［6］。內(nèi)源性硫化氫和硫化氫供體在生理?及病理生理條件下都有潛在的維持正常脂代謝的作用［7］。外源性給予硫化氫，是否有阻止或減輕肝細(xì)胞脂質(zhì)蓄積，減輕或逆轉(zhuǎn)肝細(xì)胞損傷的作用，目前尚未見文獻(xiàn)報道。因此，本課題運用高脂飲食誘導(dǎo)小鼠肥胖，制作非酒精性脂肪肝模型，體外補充硫化氫，觀察其是否會減輕肥胖小鼠肝脂質(zhì)蓄積。

1　材料與方法

1.1主要試劑與儀器

1.1.1主要試劑飼料購自江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司，飼料能量來源見Tab 1;硫氫化鈉(NaHS)購自美國Sigma-aldrich公司;無水乙醇、異丙醇等均購自天津市德恩化學(xué)試劑有限公司;油紅O購自生工生物工程(上海)股份有限公司; RNA提取試劑盒、RNA純化試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自康為世紀(jì)生物科技有限公司;甘油三酯(TG)和膽固醇(TC)試劑盒購自南京建成生物工程研究所;脂肪酸合成酶(fatty acid synthase，F(xiàn)AS)和脂肪酸分解酶肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶-1(carnitine palmitoyltransferase-1，CPT-1)的引物由蘇州金唯智生物科技有限公司合成(Tab 2); ELISA試劑盒購自鄭州天馳生物試劑公司。

Tab 1　Energy comparison of different diets

Tab 2　Sequences of primers used in study

1.1.2主要儀器Eppendorf高速臺式冷凍離心機(jī); Multiskan MK3型酶標(biāo)儀(賽默飛世爾儀器有限公司);梯度PCR儀(Thermo公司，美國); BX51熒光顯微鏡(日本Olympus公司);超低溫保存箱(Haier); WD-9413B凝膠成像分析儀、DYY-6C型電泳儀(北京市六一儀器廠)。

1.2方法

1.2.1實驗動物分組和處理C57 BL/6J 6周齡健康♂小鼠30只，購自南京大學(xué)模式動物研究所，動物合格證號: 201401337，檢疫合格，體質(zhì)量: 18～22 g。室溫控制在(20－25)℃，相對濕度60%－70%，定期更換墊料并進(jìn)行消毒處理。隨機(jī)選取8只小鼠飼喂普通飼料作為對照組，22只小鼠飼喂高脂飼料制作肥胖模型，至第12周末，根據(jù)文獻(xiàn)，將體重超過對照組20%的小鼠作為肥胖小鼠［8］，共有21只。將21只肥胖小鼠隨機(jī)分模型組(10只)、硫化氫干預(yù)組(11只)。硫化氫干預(yù)組從第13周開始，每天早上9點腹腔注射硫氫化鈉(50 μmol·kg－1·d－1，相當(dāng)于2. 8 mg·kg－1·d－1)，模型組注射等體積的生理鹽水。對照組繼續(xù)喂普通飼料，模型組和硫化氫干預(yù)組繼續(xù)喂高脂飼料，飲用水選用自來水，自由進(jìn)食。每周一下午測量并記錄小鼠體重。所有動物在第16周末處死，取肝組織進(jìn)行生化和病理形態(tài)學(xué)等檢測。

1.2.2肝組織生化指標(biāo)的檢測取新鮮冰凍肝臟組織，勻漿、離心，取上清，按試劑盒說明書，用酶標(biāo)儀測甘油三酯、膽固醇含量。

1.2.3肝臟病理組織學(xué)檢測取每只小鼠相同部位的一小塊肝組織，用4%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，蘇木素－伊紅(HE)染色，光鏡下觀察形態(tài)。另取每只小鼠相同部位的一小塊肝組織，做冰凍切片，切片厚度為6 μm，油紅O染色，光鏡下觀察肝組織脂肪蓄積情況。

1.2.4 RT-PCR分析TRIzol試劑提取肝臟組織總RNA，Nanodrop檢測RNA含量，Dnase處理，并用RNA試劑盒進(jìn)行純化。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行cDNA第一鏈的合成，按說明書操作，總體積為20 μL。CPT-1的PCR擴(kuò)增條件為: 95℃預(yù)變性2 min，循環(huán)40次(94℃變性35 s，59. 8℃退火35 s，72℃延伸35 s)，72℃終延伸10 min。FAS的PCR擴(kuò)增條件為: 95℃預(yù)變性2 min，循環(huán)40次(94℃變性35 s，54℃退火35 s，72℃延伸40 s)，72℃終延伸10 min。18S rRNA的PCR擴(kuò)增條件為: 95℃預(yù)變性1 min，循環(huán)30次(94℃變性35 s，51. 9℃退火35 s，72℃延伸40 s)，72℃終延伸10 min。

1.2.5酶活性檢測按ELISA試劑盒說明書，酶標(biāo)儀檢測小鼠肝組織CPT-1、FAS活性。

2　結(jié)果

2.1一般情況觀察所有動物在實驗過程中，每天計量小鼠進(jìn)食和飲水量，觀察小鼠活動情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組小鼠進(jìn)食量和飲水量以及活動情況無明顯差別。對照組小鼠毛色正常，精神佳，與對照組相比，模型組和硫化氫干預(yù)組小鼠體型肥胖，毛色發(fā)亮。

2.2小鼠體重變化Fig 1A所示，從第5周開始，高脂組體重明顯比普通飼料組增高(P＜0. 05)，到第12周末，體重平均比普通飼料組高(10. 0±1. 1)g。Fig 1B所示，從第13周末開始，與對照組相比，模型組和硫化氫干預(yù)組小鼠體重明顯增高(P＜0. 01)，硫化氫干預(yù)組與模型組相比，體重明顯下降(P＜0. 01)。

2.3硫化氫干預(yù)對小鼠肝組織甘油三酯、膽固醇含量的影響Fig 2A所示，與對照組相比，模型組小鼠甘油三酯含量增高(P＜0. 01)。與模型組相比，硫化氫干預(yù)組甘油三酯含量明顯下降(P＜0. 01)。Fig 2B所示，與對照組相比，模型組肝組織膽固醇含量明顯升高(P＜0. 05)。與模型組相比，硫化氫干預(yù)組肝組織膽固醇含量明顯下降(P＜0. 05)。

Fig 1　Effects of NaHS on body weight gain in mice(±s)

Male C57BL/6J mice(5 weeks old)were fed a normal-fat diet(NFD)or a high-fat diet(HFD)for 16 weeks.After 12 weeks of dietary manipulation to induce obesity，NaHS group received the high-fat diet with NaHS(2.8 mg·kg－1·d－1.ip).*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs control;#P＜0.05，##P＜0.01 vs model.

Fig 2　Effects of NaHS on levels of liver triglyceride(TG)and total cholesterol(TC)in mice(±s)*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs control;#P＜0. 05，##P＜0. 01 vs model.

2.4硫化氫干預(yù)對小鼠肝臟結(jié)構(gòu)的影響Fig 3顯示肝組織HE染色，對照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈和肝血竇清晰;模型組小鼠肝小葉模糊，肝索排列紊亂，肝竇狹窄，肝細(xì)胞內(nèi)可見大量脂肪空泡;與模型組相比，硫化氫干預(yù)組肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，肝竇清晰，肝細(xì)胞內(nèi)脂肪空泡明顯減少。

Fig 3　Effects of NaHS on tissue morphology of liver in obese mice(HE staining　×400)

Fig 4　Effects of NaHS on lipid accumulation of liver in obese mice(ORO staining　×100)

2.5硫化氫干預(yù)對小鼠肝細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的影響

Fig 4所示為肝組織油紅O染色切片，在光鏡下肝組織內(nèi)脂質(zhì)呈紅色。對照組肝組織的細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)正常，個別肝細(xì)胞內(nèi)有脂質(zhì)沉積;模型組肝細(xì)胞內(nèi)有大量脂質(zhì)蓄積，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞;與模型組相比，硫化氫干預(yù)組脂質(zhì)蓄積明顯減少，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞程度減輕。

2.6硫化氫干預(yù)對小鼠肝臟CPT-1、FAS基因表達(dá)的影響Fig 5A所示為肝組織CPT-1和FAS基因表達(dá)電泳圖。Fig 5B所示為電泳圖灰度分析結(jié)果。與對照組相比，模型組CPT-1基因表達(dá)水平明顯下降(P＜0. 05)。與模型組相比，硫化氫干預(yù)組小鼠肝組織CPT-1基因表達(dá)明顯增高(P＜0. 01)。與對照組相比，模型組小鼠肝臟FAS基因表達(dá)水平有所增高(P＜0. 05)。與模型組相比，硫化氫干預(yù)組小鼠肝組織FAS基因表達(dá)水平明顯降低(P＜0. 01)。

Fig 5　Effects of NaHS on mRNA expression levels of CPT-1 and FAS of liver in obese mice(±s)A: The mRNA expression levels of CPT-1 and FAS of liver were examined by RT-PCR; B:*P＜0.05 vs control;##P＜0.01 vs model.

2.7硫化氫干預(yù)對小鼠肝臟CPT-1、FAS活性的影響Fig 6A所示為肝組織CPT-1活性檢測結(jié)果，與對照組相比，模型組CPT-1活性明顯降低(P＜0. 01);與模型組相比，硫化氫干預(yù)組CPT-1活性明顯升高(P＜0. 01)。Fig 6B所示為肝組織FAS活性檢測結(jié)果，與對照組相比，模型組FAS活性有所增高(P＜0. 01);與模型組相比，硫化氫干預(yù)組FAS活性明顯降低(P＜0. 01)。

Fig 6　Effects of NaHS on activity of CPT-1 and FAS of liver in obese mice(±s)A: The activity of CPT-1 was detected by ELISA; B: The activity of FAS was detected by ELISA.＊＊P＜0. 01 vs control;##P＜0. 01 vs model.

3　討論

營養(yǎng)過剩可導(dǎo)致體重增加，其主要表現(xiàn)是體內(nèi)過量脂質(zhì)蓄積，身體肥胖。現(xiàn)在認(rèn)為，肥胖是一種慢性代謝性疾病，可引發(fā)肝脂肪變性、非酒精性肝炎、肝硬化、糖尿病和心血管病。阻斷脂肪在體內(nèi)蓄積是預(yù)防和治療肥胖的一種有效措施。許多研究發(fā)現(xiàn)，肥胖患者血漿中硫化氫含量下降與高膽固醇血癥正相關(guān)［9］，動物實驗也證實肥胖可導(dǎo)致肝組織內(nèi)硫化氫內(nèi)源性合成減少，高脂飲食可抑制肝組織合成硫化氫。這些實驗結(jié)果提示，硫化氫很可能參與肥胖時脂質(zhì)的代謝。

硫化氫是近年來繼發(fā)現(xiàn)一氧化氮和一氧化碳信號分子外，又一種被重新認(rèn)識的氣體信號分子。作為一種脂溶性的氣體信號分子，硫化氫不借助任何細(xì)胞膜載體和通道，能自由進(jìn)出細(xì)胞，從而對細(xì)胞發(fā)揮生理性調(diào)節(jié)作用。目前已發(fā)現(xiàn)，生理水平的硫化氫發(fā)揮穩(wěn)定血壓、擴(kuò)張血管、調(diào)節(jié)神經(jīng)興奮等作用。在病理情況下，硫化氫還具有抗氧化、抗炎、抗凋亡的作用［10］。正常情況下，體內(nèi)硫化氫水平保持動態(tài)平衡，它主要由含硫氨基酸為底物，在CSE和CBS等關(guān)鍵酶的催化下形成，形成的硫化氫又負(fù)反饋調(diào)節(jié)這些硫化氫合成的關(guān)鍵酶［11］。肝臟是內(nèi)源性硫化氫產(chǎn)生的主要場所。肝組織來源的硫化氫有舒張血管、緩解門靜脈高壓、抗炎、抗氧化和肝細(xì)胞保護(hù)作用［12］。

本實驗用高脂飼料飼喂小鼠12周，小鼠體重明顯比飼喂普通飼料的對照組增加，說明小鼠肥胖模型誘導(dǎo)成功。從13周開始，腹腔注射硫氫化鈉，外源性補充硫化氫，與模型組相比，小鼠飲食飲水量無差別，而體重逐漸下降，到16周末實驗結(jié)束時，體重明顯下降。初步實驗結(jié)果提示，外源性補充硫化氫有減輕肥胖，降低小鼠體重的作用，且這種作用與動物食欲改變無關(guān)。課題組分析認(rèn)為，硫化氫降低高脂飲食小鼠體重的機(jī)制很可能是參與體內(nèi)脂質(zhì)代謝，減少脂質(zhì)在體內(nèi)蓄積造成的。為此，本實驗檢測了小鼠肝組織甘油三酯和膽固醇的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，外源性補充硫化氫可使已經(jīng)肥胖的小鼠肝組織甘油三酯和膽固醇含量下降。組織切片HE染色結(jié)果顯示，肥胖小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，肝索擴(kuò)大，肝血竇狹窄，肝細(xì)胞內(nèi)大量空泡，部分區(qū)域炎癥細(xì)胞浸潤，提示肥胖小鼠發(fā)生了非酒精性肝炎。外源性補充硫化氫4周，小鼠肝組織結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，肝細(xì)胞內(nèi)空泡明顯減少，炎癥細(xì)胞少見。結(jié)果提示，外源性補充硫化氫可以逆轉(zhuǎn)高脂飲食造成的肝臟脂肪蓄積。肝組織切片油紅O染色進(jìn)一步證實，高脂飲食造成的肝細(xì)胞空泡主要是大量脂質(zhì)蓄積引起的，外源性補充硫化氫4周后，肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積明顯減少，實驗結(jié)果進(jìn)一步證實了外源性補充硫化氫可以明顯減少脂質(zhì)在肝內(nèi)的蓄積。

硫化氫對肝脂質(zhì)代謝影響的機(jī)制目前還不清楚。一般在基礎(chǔ)飼料中添加0. 5%～1. 0%膽固醇即可形成小鼠高膽固醇血癥，同時肝臟甘油三酯(TG)含量也成倍增加，形成肝脂肪變性［13］。CPT-1是線粒體內(nèi)脂肪酸β-氧化反應(yīng)的限速酶，是反映脂肪分解的指標(biāo);反映脂肪酸合成的指標(biāo)FAS是脂肪酸合成最后環(huán)節(jié)的限速酶。肝組織脂肪合成增多，分解減少是造成肝臟脂肪蓄積的直接原因。有文獻(xiàn)證實高脂飲食可以導(dǎo)致小鼠肝細(xì)胞脂肪氧化酶CPT-1活性和mRNA表達(dá)減少，從而引起肝脂肪蓄積［14］。也有文獻(xiàn)證實，高脂飲食導(dǎo)致小鼠脂肪酸合成酶FAS活性和mRNA表達(dá)量下降與肝脂肪蓄積相關(guān)［15］。脂肪酸合成和分解受細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)影響。硫化氫是公認(rèn)的還原劑，可影響細(xì)胞內(nèi)NAD+/NADH平衡，控制脂代謝［16］。高脂飲食可以導(dǎo)致肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化應(yīng)激，硫化氫水平升高，維持肝組織谷胱甘肽水平不變，從而保持氧化還原水平處于平衡狀態(tài)［17］。本實驗結(jié)果也顯示，高脂飲食導(dǎo)致小鼠肝組織CPT-1 mRNA表達(dá)水平及酶活性明顯下降，F(xiàn)AS mRNA表達(dá)水平及活性明顯增加;外源性補充硫化氫，很可能通過調(diào)節(jié)高脂組小鼠肝細(xì)胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)，抑制脂肪酸合成，促進(jìn)脂肪酸分解，從而減輕肝脂肪蓄積。

硫化氫像一氧化氮和一氧化碳一樣，其生物學(xué)作用也存在雙向劑量效應(yīng)關(guān)系，即高劑量有害，低劑量發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用［18］。硫化氫的毒性作用主要表現(xiàn)為，動物從呼吸道吸入大劑量硫化氫，造成呼吸道上皮損傷;每天腹腔注射超過200 μmol·kg－1體重，會造成肺損傷［19－20］。正常哺乳動物組織和血漿硫化氫濃度達(dá)到1－160 μmol·L－1，硫化氫在小鼠體內(nèi)約1/3以氣體硫化氫形式存在，2/3以硫氫化鈉形式存在［21］。硫氫化鈉是常用的硫化氫供體，遇水后快速分解為鈉離子和硫氫根離子，后者再與體內(nèi)氫離子結(jié)合形成相等分子濃度的硫化氫。從本實驗室預(yù)實驗和文獻(xiàn)來看，每天腹腔注射50 μmol· kg－1體重的硫氫化鈉屬于小鼠生理范圍的劑量，沒有發(fā)現(xiàn)對小鼠有毒副作用。

給大鼠腹腔注射硫氫化鈉1 h后，大鼠血漿中硫化氫濃度達(dá)到高峰值80 μmol·L－1，約6 h后下降到20 μmol·L－1［22］。本實驗每天通過腹腔注射1次硫氫化鈉，可以推測，動物體內(nèi)硫化氫濃度波動是很大的，在這種情況下補充的硫化氫依然對肥胖引起的肝組織脂肪蓄積有治療作用。用緩釋型的硫化氫供體，保持動物體內(nèi)硫化氫濃度處于相對穩(wěn)定狀態(tài)，對肥胖誘發(fā)的肝脂肪蓄積是否有更好的治療作用需要進(jìn)一步研究。

(致謝:感謝河南大學(xué)分子醫(yī)學(xué)實驗室提供實驗條件和技術(shù)支持!)

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Effect of hydrogen sulfide on hepatic lipid accumulation in obese mice

ZHENG Nai-rui1，2，ZHANG You-jing2，WU Dong-dong2，LIU Bin1，JI Ai-ling2，LI Yan-zhang2，HUANGFU Chao-shen2
(1.Nursing College of Henan University，Kaifeng Henan 475000，China;2.Institute of Environmental Medicine，Medical College of Henan University，Kaifeng Henan 475004，China)

Abstract: Aim To investigate the effect of hydrogen sulfide on hepatic lipid accumulation in obese mice.

Methods C57BL/6J mice were randomly divided into control group，model group，and NaHS group.The mice of the control group were fed with normal diet.The mice of the model group and the NaHS group were

fed with high-fat diet.From the thirteenth week，the mice of NaHS group were injected intraperitoneally with NaHS(H

2

S donor)in a dose of 50 μmol·kg

－1

per day for 4 weeks and the mice of the model group were injected with the same volume of saline.All mice were sacrificed at the end of the 16th week.The tissues of liver were homogenized and centrifugated.The supernatants were used for the determination of triglyceride and cholesterol in liver.The morphology of liver was tested by H＆E staining.Liver lipid accumulation was determined by oil red staining.Total RNA was extracted from frozen tissue of liver.PCR was used to detect CPT-1，F(xiàn)AS gene expression and ELISA method was used to detect CPT-1，F(xiàn)AS activity in mice liver.

Results The body weight of the mice from NaHS group and model group was bigger than that of the mice from control group.Compared with the model group，the body weight of the mice from NaHS group was less; the content of triglyceride and cholesterol in liver was lower; the degree of liver tissue pathological changes and lipid accumulation were alleviated; CPT-1 expression and activity were increased; FAS expression and activity were decreased.Conclusions These data indicate that hydrogen sulfide can reduce the lipid content of liver tissue in obese mice and alleviate fatty liver.The mechanism may be associated with the increased expression of CPT-1 and the decreased expression of FAS in liver.

Key words:hydrogen sulfide; obesity; fatty liver; fatty acid synthase; carnitine palmitoyltransferase-1; mice

作者簡介:鄭乃汭(1988－)，女，碩士生，研究方向:環(huán)境醫(yī)學(xué)，E-mail: nairui0125@163.com;

基金項目:河南省科技發(fā)展計劃項目(No 132300410012)

收稿日期:2015－02－15，修回日期:2015－04－02

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號:1001－1978(2015)07－0945－07

doi:10.3969/j.issn.1001－1978.2015.07.012