禽痘的實(shí)驗(yàn)室診斷與免疫

禽痘的實(shí)驗(yàn)室診斷與免疫

劉忠秀

(吉林省通榆縣新發(fā)鄉(xiāng)畜牧站137200)

1病毒的分離與鑒定

禽類接種：通過(guò)劃冠、刺翼和大腿毛囊接種可將感染病料組織懸液中的禽痘病毒傳播給易感鳥類。禽痘病毒(FPV)很容易在雞群間傳播，5~7d可產(chǎn)生特征性皮膚病灶。對(duì)非典型病例，建議對(duì)病變標(biāo)本進(jìn)行鏡檢，給禽進(jìn)行接種。

禽胚接種：將皮膚型或白喉型疑似病變材料的懸液通過(guò)絨毛尿囊膜(CAM)途徑接種于9~12日齡SPF雞胚，接種后5~7d可發(fā)現(xiàn)痘斑。

細(xì)胞培養(yǎng)：并非所有的毒株都能在初次接種后產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，因此必須先使病毒適應(yīng)宿主系統(tǒng)。研究分離株的抗原性和遺傳特征時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)比CAM增殖病毒更方便。

血清學(xué)與保護(hù)試驗(yàn)：自然感染康復(fù)或疫苗接種可產(chǎn)生針對(duì)禽痘病毒的主動(dòng)免疫。自然感染康復(fù)或疫苗接種后產(chǎn)生的細(xì)胞免疫和體液免疫均具有保護(hù)作用。細(xì)胞免疫反應(yīng)早于體液免疫。雞接種禽痘病毒后可出現(xiàn)淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。可通過(guò)血清學(xué)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)禽痘病毒的免疫反應(yīng)，如ELISA、病毒中和試驗(yàn)或保護(hù)試驗(yàn)。根據(jù)生產(chǎn)廠商的要求，至少應(yīng)免疫接種20只SPF雞，而將另外20只來(lái)源和日齡相同的非免疫雞隔離飼養(yǎng)作為對(duì)照。免疫后3周，用不同的FPV毒株對(duì)免疫組和對(duì)照組進(jìn)行攻毒，可在大腿無(wú)毛囊處攻毒，或采用刺冠途徑攻毒，或在免疫接種翅的另一側(cè)翅進(jìn)行刺翼攻毒。

免疫擴(kuò)散：免疫擴(kuò)散可用于鑒別雞痘和鴿痘病毒，也可用于區(qū)分雞痘和其他禽類病毒性疾病引起的抗體反應(yīng)。這個(gè)試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，但敏感性低，不宜進(jìn)行交叉反應(yīng)抗原的鑒別診斷。由于沉淀抗體在感染后持續(xù)時(shí)間較短，所以采血時(shí)機(jī)應(yīng)恰當(dāng)，通常在已感染后的第15~20天。

被動(dòng)血凝試驗(yàn)：被動(dòng)血凝試驗(yàn)檢測(cè)到FPV感染血清中抗體的時(shí)間早于免疫擴(kuò)。該方法非常敏感，但由于其需要可溶性痘病毒抗原致敏的綿羊或馬紅細(xì)胞，其應(yīng)用受到了限制。

中和試驗(yàn)：可在培養(yǎng)細(xì)胞或雞胚上進(jìn)行病毒中和試驗(yàn)，但該方法一般不用于常規(guī)診斷。

免疫印跡：可采用免疫印跡對(duì)雞痘疫苗株和野毒株的免疫原性蛋白進(jìn)行比較。雖然毒株間具有共同的抗原成分，但根據(jù)某些特異性蛋白質(zhì)的不同毛泳遷移率可以在一定程度上對(duì)毒株進(jìn)行鑒別。

2分子生物學(xué)方法

禽痘病毒DNA的限制性內(nèi)切酶分析：限制性斗段長(zhǎng)度多態(tài)性可通過(guò)檢查病毒DNA限制性內(nèi)切酶產(chǎn)生片段的相對(duì)遷移率來(lái)比較禽痘病毒基因組。雖然大部分FPV毒株可通過(guò)1個(gè)或2個(gè)DNA片段的有無(wú)加以區(qū)分，但這些毒株的基因圖譜相似，并有較大部分的共遷移片斷。限制性內(nèi)切酶酶切DNA的特征性電泳圖譜，也可用于比較禽痘病毒屬的其他成員。

基因片段作為診斷探針：根據(jù)已發(fā)表的FPV的序列來(lái)選擇基因片段或放計(jì)寡核苷酸作為探針，以檢測(cè)樣品中FPV特異性DNA。將皮膚型或白喉型病灶中粗提的DNA轉(zhuǎn)移到固相表面，然后與放射性標(biāo)記的或非放射性標(biāo)記克隆片段或寡核苷酸進(jìn)行雜交。這種方法敏感、特異，可用于混合感染的診斷。例如用病毒特異的基因探針確診雞痘和傳染性喉氣管炎的雙重感染。

3鑒別診斷

由于雞痘和傳染性喉氣管炎病毒引起的氣管病變相似，所以有呼吸道癥狀的白喉型雞痘必須與傳染性喉氣管炎進(jìn)行區(qū)分。患傳染性喉氣管炎時(shí)，可在氣管上皮中檢測(cè)到核內(nèi)包涵體。雛雞的泛酸和生物素缺乏或T-2毒素引起的病變與痘病毒病變?nèi)菀谆煜Ｒ傍澓图银澋陌缀硇筒∽兣c格子毛滴蟲引起的病變不易區(qū)分，后者可通過(guò)涂片進(jìn)行微生物檢查或通過(guò)培養(yǎng)進(jìn)行診斷。

4免疫

為了預(yù)防禽痘病的發(fā)生，應(yīng)在可能發(fā)病前對(duì)易感禽進(jìn)行免疫接種。在秋冬季多發(fā)本病的地區(qū)，通常在春夏進(jìn)行免疫接種。不同日齡禽混養(yǎng)的大型飼養(yǎng)場(chǎng)或四季均有本病發(fā)生，應(yīng)因地制宜，隨時(shí)進(jìn)行免疫接種。一般在下列三種情況下進(jìn)行預(yù)防接種：往年發(fā)生過(guò)病的養(yǎng)殖場(chǎng)，孵出的所有幼雛或從其他地方引入的幼雛應(yīng)進(jìn)行雞痘苗免疫；因?yàn)殡u痘免疫持續(xù)時(shí)間不夠長(zhǎng)，所以如果往年發(fā)生過(guò)痘病且免疫過(guò)鴿痘苗時(shí)，應(yīng)再接種一次雞痘苗；在痘病流行地區(qū)，應(yīng)接種雞痘苗以預(yù)防臨近禽群的感染。