手足口病患兒血清細胞因子及自然殺傷細胞表達的變化及臨床意義

路 燕

(江蘇省南通市第一人民醫院 兒科，江蘇 南通，226001)

手足口病(HFMD)是兒童常見病，以發熱和手、足、口腔等部位出現皮疹或皰疹為主要臨床特征，由腸道病毒(EV)感染引起，少數患兒可出現嚴重并發癥，甚至死亡［1-2］。最近10 多年來，HFMD 在亞太地區多次出現大規模流行，受到廣泛關注［3］。目前，重癥HFMD 尚無特效治療方案，早期診斷、識別危重癥患兒，及時給予呼吸、循環支持及防治腦損傷是降低病死率的關鍵［4］。目前尚未發現重癥HFMD 的特異性檢測指標，但有研究表明，病情嚴重程度不同的EV71 感染患兒，其免疫功能存在差異［5］。因此，本研究檢測了56例HFMD 患兒血清細胞因子及自然殺傷細胞(NK 細胞)的表達水平，分析不同病情患兒免疫功能的差異，以期為臨床診治重癥HFMD 提供參考，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2014年12月在江蘇省南通市第一人民醫院兒科就診的HFMD 患兒56例，均根據臨床表現、實驗室檢查等確診，根據病情輕重分為輕癥組31例和重癥組25例，病情診斷參考衛生部指南［6］相關標準:患兒表現為手、足、口腔、臀部皮疹，伴或不伴發熱為輕癥;出現嗜睡、譫妄、肢體抖動、驚厥、腦膜刺激征等神經系統受累表現為重癥。輕癥組男17例，女14例;年齡8 個月～8歲，平均(29.65±3.14)個月。重癥組男12例，女13例;年 齡9 個月～8歲，平 均(28.73±4.06)個月。另選取同期健康體檢兒童30例設為對照組，其中男14例，女16例;年齡7個月～9歲，平均(30.11±3.85)個月。3組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

3組均于入組第2 天清晨抽取肘靜脈血，以酶聯免疫吸附法檢測血清白介素(IL)-6、IL-12、腫瘤壞死因子?α(TNF?α)水平，試劑盒購自美國Panomics 公司;以流式細胞儀檢測NK(以CD16+CD56+表示)比例，儀器購自美國Becton Dickinson公司。

1.3 觀察指標

觀察3組血清IL-6、IL-12、TNF?α 水平及CD16+CD56+含量差異，并分析各指標與病情的相關性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0 軟件包處理數據，計量資料以均數±標準差()表示，組間比較采用t 檢驗，生化指標與病情的相關性采用Spearman 等級相關性分析。

2 結果

2.1 3組細胞因子及NK 含量比較

輕癥組血清IL-6、IL-12、TNF?α 水平顯著高于重癥組及對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)，重癥組僅IL-12 水平高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)，而IL-6 和TNF?α 水平與對照組差異無統計學意義(P＞0.05);重癥組CD16+CD56+細胞含量顯著高于輕癥組和對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)，而輕癥組和對照組之間差異無統計學意義。見表1。

表1 3組細胞因子及NK 含量比較()

表1 3組細胞因子及NK 含量比較()

與對照組比較，＊＊P＜0.01;與輕癥組比較，##P＜0.01。

2.2 各指標與病情的相關性分析

經spearman 等級相關性分析，結果表明IL-6和TNF?α 表達水平與病情嚴重程度呈負相關(r=－0.467，－0.518，P＜0.01)，IL-12 表達水平和CD16+CD56+含量與病情無顯著相關性(P＞0.05)，見表2。

3 討論

HFMD 已在全球多個國家和地區暴發或流行，近年來在中國的發病率呈升高趨勢，呈現全年散發和季節性流行趨勢。引起HFMD的病毒屬于小RNA 病毒科EV 屬，以EV71 和CVA16 最常見［7－8］。HFMD 是自限性疾病，目前對癥和支持治療是其主要治療方案，多數患兒可痊愈，但個別重癥患兒病情進展迅速，可出現腦炎、無菌性腦膜炎、神經源性肺水腫等嚴重并發癥，甚至死亡［9］。

表2 各指標與病情的相關性分析

近年來大量研究［10］表明，HFMD 患兒血清細胞因子水平發生顯著變化，且與病情嚴重程度存在一定關系。唐漢慶等［11］報道，HFMD 患兒血清IL-17、IL-22、IL-23 及TNF?α 水平均較健康幼兒升高。謝金純等［12］報道，重癥和輕癥HFMD 患兒血清IL-10、IL-6、TNF?α 等多種細胞因子表達水平高于健康組。本研究選取IL-6、IL-12 及TNF?α這3 個前炎癥性細胞因子為觀察指標，結果表明，輕癥組血清IL-6、IL-12、TNF?α 水平顯著高于重癥組及對照組，重癥組僅IL-12 水平高于對照組，與李春玲等［13］報道相似，分析其原因可能是:病毒感染機體后，刺激吞噬細胞等非特異性免疫反應，大量分泌IL-6、IL-12、TNF?α 等前炎癥細胞因子，為疾病的快速自限提供免疫環境，屬于全身炎癥反應時相，而隨著炎癥發展，這些炎癥因子的合成逐漸減少或逐漸被消耗，其表達水平會趨于下降，接近正常。

除炎性細胞因子外，淋巴細胞含量發生變化也是HFMD 常見的臨床特征［14］。曾慧慧等［15］報道，HFMD 患兒T 淋巴細胞亞群的均數顯著低于正常參考值。NK 細胞是機體抗抗病毒等微生物的第一道免疫防線，其可在免疫應答早期就發揮生物學活性［16］。當疫球蛋白A(IgA)與靶細胞結合，并與NK 細胞CD16結合，即可發揮對靶細胞的殺傷作用［17］。本研究結果表明，隨著病情的加重，HFMD 患兒NK 細胞的含量逐漸下降，提示重癥患兒免疫功能紊亂，與付丹等［5］報道一致。此外，相關性分析表明，IL-6 和TNF?α 表達水平與病情嚴重程度呈負相關，提示前炎癥因子在疾病起始階段處于分泌亢進狀態，而重癥患兒可能處于代償性抗炎癥狀態，臨床治療時應分階段調節患兒的免疫功能，實施個體化治療。

［1］Fujimoto T，Iizuka S，Enomoto M，et al.Hand，foot，and mouth disease caused by coxsackievirus A6，Japan，2011［J］.Emerg Infect Dis，2012，18(2):337.

［2］Chong C Y，Chan K P，Shah V A，et al.Hand，foot and mouth disease in Singapore:a comparison of fatal and non-fa-tal cases［J］.Acta Paediatr，2003，92(10):1163.

［3］孫軍玲，張靜.手足口病流行病學研究進展［J］.中華流行病學雜志，2009，30(9):973.

［4］劉春峰，熊小雨.小兒重癥手足口病診治進展［J］.實用兒科臨床雜志，2012，27(18):1377.

［5］付丹，李成榮，何顏霞，等.腸道病毒71 型感染患兒免疫功能探討［J］.中華兒科雜志，2009，47(11):829.

［6］中華人民共和國衛生部.手足口病診療指南(2010年版)［J］.國際呼吸雜志，2010，30(24):1473.

［7］Hosoya M，Kawasaki Y，Sato M，et al.Genetic diversity of enterovirus 71 associated with hand，foot and mouth disease epidemics in Japan from 1983 to 2003［J］.Pediatr Infect Dis J，2006，25(8):691.

［8］Yu P，Gao Z，Zong Y，et al.Distribution of enterovirus 71 RNA in inflammatory cells infiltrating different tissues in fatal cases of hand，foot，and mouth disease［J］.Arch Virol，2015，160(1):81.

［9］黎念，雷偉.手足口病研究進展，重慶醫學，2011，41(1):93.

［10］Zhang Y，Liu H，Wang L，et al.Comparative study of the cytokine/chemokine response in children with differing disease severity in enterovirus 71-induced hand，foot，and mouth disease［J］.PloS one，2013，8(6):e67430.

［11］唐漢慶，盧蘭，黃月艷，等.手足口病患兒T 淋巴細胞亞群和相關細胞因子水平變化的臨床意義分析［J］.實用臨床醫藥雜志，2014，18(21):92.

［12］謝金純，林廣裕，陸學東，等.手足口病患兒血清細胞因子水平及其與病情的相關性［J］.中華實用兒科臨床雜志，2013，28(10):756.

［13］李春玲，劉玉田，張美英，等.手足口病患兒血清白介素與腫瘤壞死因子變化的護理干預［J］.中華醫院感染學雜志，2015，25(2):452.

［14］Zeng M，Zheng X，Wei R，et al.The cytokine and chemokine profiles in patients with hand，foot and mouth disease of different severities in Shanghai，China，2010［J］.PLoS Negl Trop Dis，2013，7(12):e2599.

［15］曾慧慧，顧燕，段雪飛，等.手足口病患兒外周血T 淋巴細胞亞群的臨床研究［J］.中華傳染病雜志，2010，28(2):82.

［16］Zhu K，Yang J，Luo K，et al.TLR3 Signaling in Macrophages Is Indispensable for the Protective Immunity of Invariant Natural Killer T Cells against Enterovirus 71 Infection［J］.PLoS Pathog，2015，11(1):e1004613.

［17］李健美，孫慧.兒童手足口病中白細胞CD 分子表達與異型淋巴細胞比值改變的臨床應用價值［J］.中國婦幼保健，2013，28(25):4147.