抗磷脂綜合征患者補體、抗心磷脂抗體和炎性因子檢測的臨床意義

楊春華 杜榮花 張金文

抗磷脂綜合征是血清中持續性抗磷脂抗體或β2糖蛋白I陽性引起臨床癥狀，且以性反復動、靜脈血栓或習慣性流產為主要表現的綜合征。其病理表現為小葉間動脈閉塞，纖維蛋白血栓，內膜纖維增生，灶性皮質萎縮假性腎小球和血栓性微血管病［1］。抗磷脂綜合征作為一種自身免疫疾病，其發病與血漿補體、自身抗體有一定關系［2，3］。王海波等［4］研究表明，白介素-6 (IL-6)、白介素-8(IL-8)和腫瘤壞死因子(TNF-α)等炎性因子表達參與了抗磷脂綜合征的發病。本研究對抗磷脂綜合征血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子進行檢測，觀察上述指標在抗磷脂綜合征的發病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年9月至2014年11月在河北醫科大學第二醫院就診的抗磷脂綜合征患者32例，入選患者均符合中華醫學會風濕病學會分會制定的“抗磷脂綜合征診斷和治療指南”［5］中的相關標準，其中男11例，女21例;年齡16～72歲，平均年齡(44 ±11)歲;病程5～229個月，平均病程(68±42)個月;合并疾病:系統性紅斑狼瘡24例，類風濕性關節炎3例，干燥綜合征2例，銀屑病2例，強直性脊柱炎1例; 27例發生血栓事件(發生腦梗死12例)，其中靜脈血栓15例，動脈血栓7例，動靜脈血栓3例，微血栓2例。選取同期在我院體檢的健康人30例作為對照組，其中男10例，女20例;年齡23～68歲，平均年齡(45±10)歲。本研究通過醫院醫學研究倫理委員會批準。2組性別比、平均年齡比較，差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 入選與排除標準

1.2.1 入選標準:①患者符合“抗磷脂綜合征診斷和治療指南”中的診斷標準;②患者意識清楚，能夠配合檢查;③患者或家屬知情同意，并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準:①腫瘤患者;②嚴重肝、腎和心臟功能不全者;③精神疾病患者，不能配合檢查。

1.3 方法 使用真空采血管抽取受檢者清晨空腹周靜脈血5 ml，2 500 r/min，離心10 min，取血漿、血清備檢。

1.3.1 血漿補體檢測:采用美國貝克庫曼爾特實驗系統(蘇州)有限公司生產的C3、C4、C4d、C5b-9試劑盒，采用Elisa方法進行檢測。檢測時首先將標準品進行稀釋，然后在酶標板進行加樣，使用封板膜封板37℃溫育30 min，同時將濃縮洗滌液進行稀釋，揭掉封板膜，棄去液體甩干，每孔加入襲擊也靜置后棄去，重復5次，拍干后加入酶標試劑，再次進行溫育和洗滌，加入顯色劑，振蕩混勻后，避光顯色，然后加入終止液，在450 nm波長測定吸光光度值，以標準誤濃度為橫坐標，吸光光度值為縱坐標，繪制標準曲線，計算實際濃度。

1.3.2 血清抗心磷脂抗體檢測:檢測患者IgA、IgG、IgM水平，檢測試劑盒購自上海撫生實業有限公司，采用ELISA方法進行檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.3.3 血漿炎性因子檢測:檢測患者TNF-α、IL-6、白介素-1β(IL-1β)和血管內皮生長因子(VEGF)水平，檢測試劑盒購自上海閎巨實業有限公司，采用ELISA方法進行檢測，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，患者血漿補體、炎性因子均為正態分布的計量資料，以±s表示，采用t檢驗，血清抗心磷脂抗體陽性率為計數資料，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組血漿補體水平比較 抗磷脂綜合征組患者C3、C4水平低于對照組，而C4d和C5b-9水平高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 2組血漿補體水平比較 ±s

表1 2組血漿補體水平比較 ±s

注:與抗磷脂綜合征組比較，*P＜0.05

組別 C3(g/L) C4(g/L) C4d (μg/ml) C5b-9 (μg/ml)抗磷脂綜合征組(n=32)0.91±0.29 0.19±0.06 5.5±2.3 2 750±657對照組(n=30) 1.31±0.44*0.28±0.05*1.8±1.3* 711±325*

2.2 2組血清抗心磷脂抗體陽性率比較 抗磷脂綜合征組IgA、IgG和IgM陽性率均高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 2組血清抗心磷脂抗體陽性率比較 例(%)

2.3 2組血漿炎性因子水平比較 抗磷脂綜合征組TNF-α和 IL-1β水平顯著高于對照組，而 IL-6和VEGF水平低于對照組，2組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表3 2組血漿炎性因子水平比較 pg/ml，±s

表3 2組血漿炎性因子水平比較 pg/ml，±s

注:與抗磷脂綜合征組比較，*P＜0.05

組別 TNF-α IL-6 IL-1βVEGF抗磷脂綜合征組(n=32)29±6 1.89±0.26 5.3±2.3 67±15對照組(n=30) 23±3* 2.95±1.31* 2.1±1.4* 110±42*

3 討論

抗磷脂綜合征是一種自身免疫性疾病，其特點為抗磷脂抗體引起的血栓栓塞事件和(或)流產。Prinz等［6］研究表明，抗磷脂綜合征患者的3種人單克隆抗磷脂抗體與IgG組分可增加漿細胞樣樹突狀細胞細胞內Toll樣受體和單核細胞TLR8的mRNA表達。同時，它們也可誘導TLR7或TLR8從內質網易位至內體。王芳［2］對文獻資料整理發現，補體系統的過度激活是抗磷脂綜合征患者發生流產和血栓的關鍵因素。孔祥民等［7］發現，抗β2GPⅠ-β2GPⅠ復合物能夠促進小鼠腹腔巨噬細胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達，而β2GPⅠ是抗磷脂抗體的主要靶抗原［8］。本研究對抗磷脂綜合征血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子進行檢測，觀察上述指標在抗磷脂綜合征的發病中的作用。

3.1 抗磷脂綜合征與血漿補體的關系 機體內的補體可以輔助和補充特異性抗體，介導免疫溶菌、溶血作用，C3在補體系統活化過程中起連接作用，C4主要參與C3經典激活途徑中C3轉化酶的形成，與免疫識別和維持免疫穩定有關。C4d可以與細菌、免疫復合物等結合，促進吞噬細胞吞噬。C5b-9是一種末端效應產物，可以促使多種細胞表達蛋白、產生炎性因子等。在系統性紅斑狼瘡患者體內C3、C4水平降低，可能與補體系統過度激活，消耗大量補體有關［9］。本研究表明，抗磷脂綜合征組患者C3、C4水平低于對照組，而C4d和C5b-9水平高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。C4d和C5b-9為補體降解產物，而上述指標的升高說明補體激活失控，研究發現，血栓形成與補體活化產物增多，沉積到血管內皮細胞有關［10］。

3.2 抗磷脂綜合征與抗心磷脂抗體的關系 郭虹等［11］對反復流產的患者進行研究發現，抗心磷脂抗體陽性率明顯高于對照組(P＜0.05)。王喜春等［12］發現腦梗死患者抗心磷脂抗體陽性率高于正常人群(P＜0.05)。上述研究表明，抗心磷脂抗體與流產和血栓形成有密切關系，其主要作用機制可能是(1)抗心磷脂抗體能與血小板和(或)血管內皮細胞膜磷脂發生反應，抑制前列環素的產生，同時損傷內皮細胞后，使纖溶酶原激活物水平降低，血小板發生聚集，從而發生血栓;(2)抗心磷脂抗體可以使子宮PG12水平降低，胎盤發生梗塞，也可以損傷胎盤血管內皮發生血管炎，導致胎兒發生宮內窘迫或者死亡。本研究表明，抗磷脂綜合征組IgA、IgG和IgM陽性率均高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。

3.3 抗磷脂綜合征與炎性因子的關系 張鵬等［13］對靜脈血栓栓塞患者進行研究發現，血栓患者TNF-α、IL-6水平與對照組比較，顯著升高(P＜0.05)，TNF-α、IL-6與凝血因子相互作用從而發生血栓。而王暉等［14］研究表明，反復流產的患者IL-6水平反而降低。動物實驗發現VEGF在血栓溶解和血管再通中發揮積極作用，本研究中抗磷脂綜合征患者VEGF水平明顯低于對照組(P＜0.05)。說明抗磷脂綜合征患者發生血栓的幾率較大。

綜上所述，抗磷脂綜合征患者血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子與正常人群比較，均有不同程度的改變，說明血漿補體、抗心磷脂抗體和血清炎性因子可能參與了抗磷脂綜合征的發病過程。

1 張源潮，楊清銳.抗磷脂綜合征的免疫病理機制.山東醫藥，2001，41:51-52.

2 王芳.補體激活在抗磷脂綜合征中的作用.中國醫療前沿，2010，5: 19.

3 張蜀斕，李永哲.抗磷脂抗體檢測的現狀及展望.中華檢驗醫學雜志，2014，37:564-566

4 王海波，周紅，謝鴻翔，等.抗β2GPI/β2GPI復合物激活THP-1細胞表達炎性相關因子.臨床檢驗雜志，2012，30:347-350.

5 中華醫學會風濕病學分會.抗磷脂綜合征診斷和治療指南.中華風濕病學雜志，2011，15:407-410.

6 Prinz N，Clemens N，Strand D，et al.Antiphospholipid antibodies induce translocation of TLR7 and TLR8 to the endosome in human monocytes and plasmacytoid dendritic cells.Blood，2011，118:2322-2332.

7 孔祥民，周紅，謝鴻翔，等.Toll樣受體4在抗β2GPⅠ-β2GPⅠ復合物誘導小鼠腹腔巨噬細胞表達炎癥因子中的作用.臨床檢驗雜志，2014，32:934-938.

8 張寅，劉湘源，鄧曉莉.β2糖蛋白I、抗β2GP I抗體與抗磷脂綜合征.中國臨床研究，2011，24:2-4.

9 樊春紅，楊鐵生，王琴.抗心磷脂抗體(ACA)、抗dsDNA抗體、尿蛋白、C3、C4聯合檢測與系統性紅斑狼瘡(SLE)的臨床意義.中國實驗診斷，2008，12:783-786.

10 孟銀蘋，付蓉.補體活化與血栓性微血管病血栓形成關系的研究進展.中華血液學雜志，2014，35:767-770.

11 郭虹，楊華，王維鵬.反復自然流產中封閉抗體、抗心磷脂抗體檢測的臨床意義.國際檢驗醫學雜志，2013，34:773.

12 王喜春，馬沖.膽紅素、C反應蛋白和抗心磷脂抗體與腦梗死關系的臨床思路探討.中國實用醫藥，2014，9:87-88.

13 張鵬，艾力曼·馬合木提，霍亞鳳.靜脈血栓栓塞患者炎性因子于凝血指標的臨床意義及相關性.新疆醫科大學學報，2010，33:1405-1407.

14 王暉，余朝文，李博，等.血管內皮生長因子在兔急性后腔靜脈血栓形成中的表達及意義.山東醫藥，2013，53:29-30.