血站實驗室梅毒抗體酶聯免疫吸附測定檢測試劑的評價及應用

隋麗麗，張　微,李琳琳，李天君

(北京市通州區中心血站，北京 101100)

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血站實驗室梅毒抗體酶聯免疫吸附測定檢測試劑的評價及應用

隋麗麗，張微,李琳琳，李天君※

(北京市通州區中心血站，北京 101100)

摘要：目的對本血站實驗室兩種梅毒抗體篩查酶聯免疫吸附測定(ELISA)試劑進行比較和評價。方法選擇2013年12月至2014年3月北京市符合《獻血者健康檢查要求》(GB18467-2001)的無償獻血者血液標本17 963例，進行梅毒抗體的ELISA篩查和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA) 確證。結果17 963例無償獻血者標本中，107例血樣呈ELISA法梅毒抗體反應性，反應性率為0.6%，TPPA確認反應性為83例，反應性率為0.5%，在本血站檢驗判斷規則下，梅毒抗體ELISA檢測靈敏度為100.0%，特異度為99.9%；其中兩種ELISA試劑均呈反應性的為88例，靈敏度為98.8%，特異度為100.0%。103例金豪ELISA試劑檢測反應性的標本中TPPA確認反應性數為82份，靈敏度為98.8%，特異度為100.0%，漏診率為1.2%；92例萬泰試劑檢測反應性的標本，確認反應性為83份，靈敏度為100.0%，特異度為99.9%，漏診率為0.0%。結論ELISA方法單一種試劑梅毒抗體反應性假陽性率高，建議相應血液報廢，獻血者進行歸隊允許再次獻血。

關鍵詞：獻血者；梅毒抗體；真陽性率

目前全世界梅毒發病率在逐漸增加，我國近年來發病率也在上升[1-4]。梅毒螺旋體是我國采供血機構血液采集后病毒篩查中的一項，采供血機構的檢測目的是防止輸血傳播性疾病的發生，人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋體4項經血傳播病原體的感染標志物分別經過兩種不同廠家試劑篩查后[5]，任一反應性即對血液進行報廢，相應獻血者終身不能再次獻血。而酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)由于檢測結果影響因素較多，同時不同廠家試劑的性能存在差異,檢驗結果存在一定的假陽性率[6-8]，不僅造成寶貴的血液及血源浪費,也對告知獻血者準確的檢測結果造成障礙。為評詁本實驗室梅毒篩查實驗的可靠性及相應獻血者歸隊的風險，本研究對17 963 例獻血者標本進行了梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(Treponema pallidum particle agglutination test,TPPA)確證[9-11]。

1材料與方法

1.1標本來源選擇2013年12月至2014年3月北京市符合《獻血者健康檢查要求》(GB18467-2001)的無償獻血者年齡18～55歲的血液標本17 963 例。

1.2儀器與試劑 Microlab Star全自動加樣儀(瑞士HAMILTON)、FAME24/30全自動酶免分析系統(瑞士HAMILTON)、TP-ELISA試劑盒[北京金豪制藥股份有限公司(JH)，批號：2013071018；北京萬泰生物藥業股份有限公司(WT)，批號：N20131116]、TPPA試劑盒(日本富士瑞必歐株式會社，批號：VN30918)，試劑均在規定有效期內使用。

1.3方法用ELISA兩種試劑及TPPA試劑對17 963例無償獻血者標本進行梅毒抗體檢測，實驗步驟及結果判斷均嚴格按照試劑盒說明書操作。首先用ELISA兩種試劑進行檢測(初檢)，任一或兩種試劑檢測反應性的標本再進行相應試劑的雙孔復檢(復檢)，初復檢兩次檢測結果均為反應性的標本判定為試驗結果反應性。同時對17 963例標本進行TPPA確證。靈敏度=真陽性例數/(真陽性+假陽性)例數×100%；特異度=真陰性例數/(假陽性+真陰性)例數×100%。

2結果

2.1無償獻血者梅毒抗體ELISA、TPPA兩種方法檢測結果對比ELISA檢測梅毒抗體反應性的107例標本中，83例被TPPA確證為真陽性，靈敏度為100.0%(83/83)，特異度為99.9%(17856/17880)，見表1。

表1　無償獻血者梅毒抗體ELISA、TPPA

ELISA：酶聯免疫吸附測定；TPPA：梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗

2.2107例TP-ELISA反應性標本TPPA確認試驗結果17 963 例獻血者標本中，107例ELISA判斷為梅毒抗體反應性的標本，共有103例金豪ELISA試劑檢測反應性的標本，其中TPPA確認反應性數為82份，靈敏度為98.8%，特異度為100.0%，漏診率為1.2%；92例萬泰試劑檢測反應性的標本，確認反應性為83份，靈敏度為100.0%，特異度為99.9%，漏診率為0.0%。單一試劑陽性的樣本假陽性率分別達到0.2%(JH-/WT+)、0.1%(JH+/WT-)。見表2。

表2　不同情況下TP-ELISA反應性標本TPPA確認試驗靈敏度、特異度結果

ELISA：酶聯免疫吸附測定；TPPA：梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗

3討論

目前梅毒診斷的常用方法主要是梅毒血清學檢測,主要包括ELISA、TPPA、甲苯胺紅不加熱血清試驗等。采供血機構需要對血液進行大批量篩查，ELISA方法由于實驗操作及結果判讀的容易實現自動化,有利于大批量樣本的檢測和結果追溯，所以廣泛應用于血站。

本研究針對梅毒抗體，使用兩種雙抗原夾心法ELISA試劑篩查了17 963例無償獻血者標本，并同時進行了TPPA確認試驗。本血站實驗室結果判斷規則為一種試劑或兩種試劑重復兩次檢測均反應性的標本判斷為反應性標本。采供血機構的傳染病源篩查原則與醫療機構有所不同，采供血機構以防止供給臨床有輸血傳播疾病的血液為檢驗原則，所以試劑應用上優先選擇靈敏度高的試劑。本研究結果顯示，兩種ELISA試劑同時應用檢測靈敏度達100.0%，梅毒抗體ELISA檢測未出現漏檢現象。本研究中兩種ELISA試劑的靈敏度是符合血站梅毒抗體篩查要求的，提示選擇試劑時應嚴格評估試劑性能。血液篩查試劑的靈敏度高，而特異性相對較低會導致一些血液傳染病標志物假陽性的獻血者被永久屏蔽，無法再次獻血。制訂合理的獻血者歸隊的規則對防止這部分獻血人群的流失有積極意義。

綜上所述，單一試劑梅毒抗體呈反應性的標本有一定的假陽性率，允許單一ELISA試劑梅毒檢測反應性的獻血者歸隊[12-14]是比較合理的。目前大部分血站未對檢測結果進行確證，容易造成血源的浪費，本研究也提示加快血站的建設，引入確證試驗對獻血者結果的告之以及避免血液和血源的浪費具有重要意義。

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Evaluation and Application of Syphilis Antibody Enzyme-linked Immunosorbent Assay Reagents in Blood Station LaboratorySUILi-li,ZHANGWei,LILin-lin,LITian-jun.(CentralBloodStationofTongzhouinBeijing，Beijing101100,China)

Abstract:ObjectiveTo compare and evaluate two syphilis antibody screening enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits used in the blood station laboratory.MethodsTotal of 17 963 cases blood donors′ samples with the "donor health inspection requirements" (GB18467-2001) from Dec.2013 to Mar.2014 in Beijing were included，the syphilis antibody ELISA screening and Treponema pallidum particle agglutination(TPPA) test were done.ResultsAmong the 17 963 samples,107 blood samples showed ELISA syphilis antibody reaction,the reactive rate was 0.6%,TPPA confirmed 83 samples were reactive,the reactive rate was 0.5%,according to the rules of blood station laboratory,sensitivity of syphilis antibody ELISA was 100.0%,specificity was 99.9%.TPPA confirmed reaction number of 103 patients with Jinhao ELISA kit was 82,the sensitivity was 98.8%,the specificity was 100.0%,misdiagnosis rate was 1.2%; confirmed reaction number of 92 Wantai reagent tested sampleswas 83 cases,the sensitivity was 100%,specificity of 99.9%,misdiagnosis rate was 0.0%.ConclusionIt can be seen from the results of ELISA method of single reagent for syphilis antibody reactivity has high false positive rate,it′s suggested that the corresponding blood being scrapped,and the blood donors should be allowed to donate blood again.

Key words:Blood donors; Syphilis antibody; True positive rate

收稿日期：2015-02-11修回日期：2015-07-07編輯：伊姍

基金項目：北京市科技工作基礎專項(2013004)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.19.061

中圖分類號：R446.61

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)19-3621-02