羅格列酮對糖尿病模型兔體質量、FPG及FFA等指標的影響Δ

占日新，董 芳，來樂祥，張義林，華 銘（杭州市蕭山區第四人民醫院，杭州 311225）

羅格列酮（RH）是通過激活過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）來改善胰島素抵抗（IR）癥狀的，主要用于治療2 型糖尿病。PPARγ 改善機體胰島素敏感性的機制研究，近期也是醫藥界關注的熱點。美國有研究表明，敲除實驗鼠脂肪細胞內核受體共抑制因子（NCOR）可改善胰島素敏感性。NCOR 是轉錄因子輔助調節蛋白，是PPARγ的主要共抑制因子。敲除實驗鼠脂肪細胞內NCOR 后，PPARγ 磷酸化（p-PPARγ）受阻，最后導致肝臟、肌肉和脂肪胰島素敏感性增加[1]。PPARγ激動藥RH 能降低2 型糖尿病患者空腹和餐后血糖而不引起低血糖[2]，因此臨床應用廣泛。但隨著其廣泛應用，其不良反應也備受關注。RH 不良反應主要表現為水腫、心力衰竭、體質量增加、肝毒性。本研究以RH 的基本藥理作用為依據，進一步探索其體質量增加等不良反應的機制。

1 材料

1.1 儀器

TDZ5-WS 型多管架自動平衡離心機（湘儀離心機儀器有限公司）；680型酶標儀（美國Bio-Rad公司）；HX2001T型電子天平（慈溪市天東衡器廠）；安穩型三諾血糖儀（三諾生物傳感股份有限公司）。

1.2 藥品與試劑

RH鈉片（太極集團涪陵制藥廠，批號：14010007，規格：每片4 mg）；四氧嘧啶（美國Sigma 公司，批號：BCBK4716V）；一氧化氮（NO）試劑盒（南京建成生物工程公司，批號：20140810）；血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）酶聯免疫吸附（ELISA）試劑盒（上海拜沃生物公司，批號：14122603）；右旋糖酐40 葡萄糖注射液（四川科倫藥業股份有限公司，批號：L20141003，規格：每500 ml含25 g葡萄糖、30 g右旋糖酐40）。

1.3 動物

2 方法

2.1 分組與給藥

取18只兔適應性飼養3 d后，隨機均分為對照組、模型組、右旋糖酐組（n＝6），后2組兔iv四氧嘧啶70 mg/kg復制糖尿病模型，以空腹血糖（FPG）＞11.1 mmol/L為造模成功[3]。然后3組兔均ig RH 0.5 mg/kg[4]，其中右旋糖酐組同時尾iv右旋糖酐40葡萄糖注射液5 ml/kg[5]，每日1次，連續給藥3周。

2.2 指標檢測

給藥期間觀察兔體質量和生命體征狀況。末次給藥后禁食不禁水12 h，剪尾采血檢測FPG 水平；腹主動脈采血，以離心半徑19 cm、4 000 r/min 離心10 min，分離血清，－20 ℃保存，備用。按試劑盒說明書操作，檢測各組兔血清中游離脂肪酸（FFA）、NO、AngⅡ水平。

2.3 統計學方法

3 結果

3.1 兔血清中FPG、FFA水平變化

與給藥前比較，對照組兔給藥后血清中FFA水平降低，模型組兔給藥后血清中FPG、FFA 水平降低，右旋糖酐組兔給藥后血清中FFA 水平增加。與對照組比較，模型組和右旋糖酐組兔給藥前、后血清中FPG、FFA 水平增加；與模型組比較，右旋糖酐組兔給藥后血清中FPG、FFA水平增加。以上差異均有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。各組兔血清中FPG、FFA水平測定結果見表1。

表1 各組兔血清中FPG、FFA水平測定結果（，n＝6）Tab 1 The determination results of levels of FPG and FFA in all groups（，n＝6）

表1 各組兔血清中FPG、FFA水平測定結果（，n＝6）Tab 1 The determination results of levels of FPG and FFA in all groups（，n＝6）

注：與給藥前比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，ΔP＜0.01Note：vs.before medication，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.control group，#P＜0.01；vs.model group，ΔP＜0.01

由表1可知，給藥前模型組和右旋糖酐組兔的FFA水平均高于對照組，提示糖尿病模型兔已出現脂類代謝紊亂，可能是糖尿病模型兔出現氧化供能不足時，代償性引起脂肪分解導致FFA水平升高，以保證機體供能需求；也可能與糖尿病模型兔高血糖狀態有關，有研究發現高血糖癥能夠下調載脂蛋白M（Apom）的表達，而羅格列酮能夠增加Apom的表達[6]。這提示高血糖癥會通過下調Apom的表達引起脂類代謝紊亂，羅格列酮能夠通過增加Apom 的表達部分逆轉高血糖癥引起的脂類代謝紊亂。以上實驗發現羅格列酮能夠顯著降低糖尿病模型兔FPG、FFA水平，但經過3周治療后，糖尿病兔FPG、FFA水平并不能降低到正常水平；右旋糖酐聯合羅格列酮治療后，其FPG水平無變化，而FFA水平升高，提示右旋糖酐能夠抵抗羅格列酮作用。

3.2 兔體質量變化

對照組、模型組和右旋糖酐組兔給藥前的體質量分別為（2.07±0.05）、（2.12±0.04）、（2.05±0.05）kg，給藥后體質量分別為（3.03±0.16）、（1.98±0.29）、（1.78±0.12）kg。與給藥前比較，對照組兔體質量增加，右旋糖酐組兔體質量降低，差異有統計學意義（P＜0.01）；模型組兔給藥前后體質量差異無統計學意義（P＞0.05）。給藥前，3 組兔體質量比較差異無統計學意義（P＞0.05）；給藥后，與對照組比較，模型組與右旋糖酐組兔體質量降低（P＜0.01），表明羅格列酮可增加正常兔的體質量。Vieira EM等[5]研究表明，四氧嘧啶復制的糖尿病模型兔體質量會降低，但是本研究模型組兔體質量沒有明顯降低，可能是由于羅格列酮導致的體質量增加抵消了糖尿病導致的體質量降低。

3.3 兔血清中AngⅡ、NO水平變化

與給藥前比較，對照組兔給藥后血清中AngⅡ水平降低，差異有統計學意義（P＜0.05），NO 水平差異無統計學意義（P＞0.05）；模型組與右旋糖酐組兔給藥后血清中AngⅡ、NO水平差異均無統計學意義（P＞0.05）。與對照組給藥前比較，模型組與右旋糖酐組兔給藥前血清中AngⅡ水平降低，差異有統計學意義（P＜0.01），NO水平差異無統計學意義（P＞0.05）；其余差異均無統計學意義（P＞0.05）。各組兔血清中AngⅡ、NO水平測定結果見表2。

由表2可知，給藥前糖尿病模型兔AngⅡ水平低于給藥前正常兔，可能原因是糖尿病模型兔血液中高FPG 水平和FFA等血脂水平引起血漿滲透壓升高、血容量增加，機體通過反饋調節引起AngⅡ水平下降、血管舒張。本實驗發現，羅格列酮還能降低正常兔的AngⅡ水平，但不能降低糖尿病模型兔的AngⅡ水平，也可能是羅格列酮降低糖尿病兔FPG水平和FFA等血脂水平后，血漿滲透壓下降反饋調節引起AngⅡ水平升高，從而抵消了羅格列酮降低AngⅡ水平的作用。

表2 各組兔血清中AngⅡ、NO水平測定結果（，n＝6）Tab 2 The determination results of levels of AngⅡand NO in all groups（，n＝6）

表2 各組兔血清中AngⅡ、NO水平測定結果（，n＝6）Tab 2 The determination results of levels of AngⅡand NO in all groups（，n＝6）

注：與給藥前比較，＊P＜0.05；與對照組給藥前比較，#P＜0.01Note：vs.before medication，＊P＜0.05；vs.control group before medication，#P＜0.01

3.4 各組兔給藥前后FFA水平與體質量的相關性

給藥前對照組、模型組FFA 水平與體質量無相關性（P＞0.05）；給藥后模型組體質量與FFA水平呈負相關（r＝－0.903，P＜0.05）。給藥后對照組、右旋糖酐組FFA水平與體質量無相關性（P＞0.05）。

4 討論

羅格列酮的不良反應主要有水腫、心力衰竭、體質量增加、肝毒性等，其中水腫及體質量增加是羅格列酮常見的不良反應。Trobec K等[7]研究發現，羅格列酮可以減少惡性腫瘤小鼠每日的體質量減輕情況，是因為其使脂肪等得以保留。因此，羅格列酮致體質量增加的不良反應可能是其促進了脂肪生成、減少了脂類分解引起的，并且羅格列酮致水腫的不良反應也可引起體質量增加。本研究結果也表明，羅格列酮能抑制糖尿病模型兔的體質量降低。

糖尿病模型兔可使FPG、FFA 水平增加，從而導致血漿滲透壓升高，通過反饋調節使得血管舒張。本研究結果顯示，模型組兔的AngⅡ水平低于對照組，提示糖尿病模型兔表現出了血管舒張作用。羅格列酮激活PPARγ后可以降低糖尿病模型兔的FPG、FFA水平，Shi HB等[8]指出PPARγ對調節脂肪酸、總膽固醇（TG）的合成和分泌具有多方面的作用。李金艷等[9]研究發現，羅格列酮明顯降低甘油三酯（TC）、TG、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、FFA 水平及升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，改善高脂狀態。另有研究認為PPARγ 對糖代謝的調節主要是增加外周組織對胰島素的敏感性[10]。而羅格列酮水腫不良反應癥狀一般主要表現為外周水腫，提示羅格列酮致外周水腫不良反應與激活PPARγ 調節外周糖、脂代謝有關。所以筆者初步認為水腫可能是因為羅格列酮能使糖尿病兔較高的FPG、FFA 水平迅速下降，導致血漿滲透壓急劇下降。通過滲透壓作用，血漿中大量水分進入組織中引起水腫，使得血容量減少、腎血流量減少，機體通過反饋調節使腎臟加重對水和鈉離子的重吸收，導致水鈉潴留，與已報道文獻[11]一致。

心力衰竭也是羅格列酮的不良反應癥狀。由于羅格列酮能使血漿滲透壓下降，血漿中大量水分進入組織中，血容量減少，心輸出量降低。心輸出量降低可導致腎血流量減少、腎素-血管緊張素系統被激活，AngⅡ生成和醛固酮分泌增加。AngⅡ引起血管強烈收縮可加重心臟后負荷，促使心肌間質纖維化，還可使血管內皮細胞分泌NO 減少，最終導致心力衰竭并使得心衰患者病情惡化。AngⅡ與NO水平反映血管舒張與收縮的情況。本研究發現，羅格列酮能夠降低正常兔的AngⅡ水平，卻不能降低糖尿病模型兔的AngⅡ水平，分析其原因可能是羅格列酮降低FPG、FFA水平后，血漿滲透壓急劇下降，血漿水分進入組織，血容量減少，反饋調節使得AngⅡ水平升高，最終表現出AngⅡ水平并沒有下降趨勢，而羅格列酮降低AngⅡ水平作用可能被抵消了。如果長期使用羅格列酮可能會表現出AngⅡ水平升高，從而加重心力衰竭癥狀。因此，對于糖尿病合并心力衰竭患者，應該禁用羅格列酮。

右旋糖酐能提高血漿滲透壓、增加血容量、降低血黏稠度，也有滲透性利尿作用，可用于改善微循環障礙、防治急性腎功能衰竭等。通過其膠體滲透壓作用，將組織中細胞外液的水分吸入血管內，從而擴充血容量。本研究發現右旋糖酐組兔的FPG、FFA 水平均高于模型組，說明右旋糖酐能夠對抗羅格列酮作用。通過比較體質量發現，右旋糖酐組兔體質量低于給藥前，其原因可能有兩個，一是右旋糖酐能夠抵抗羅格列酮對糖尿病模型兔體質量降低的抑制作用；二是右旋糖酐可提高血漿滲透壓，緩解因為FPG、FFA 等水平急劇下降引起的輕微水腫，使得水鈉潴留作用減弱，最終表現出糖尿病模型兔的體質量減輕，但其具體機制有待進一步研究。

[1]高艷，占日新，劉麗麗，等.PPARγ基因靶向shRNA 真核表達載體的構建及表達[J].中國藥理學通報，2012，28（7）：1 023.

[2]李桂榮，李琳琳，王建華.治療2 型糖尿病藥物的研究進展[J].中國藥房，2008，19（5）：383.

[3]安智全，顧玉東，鐘高仁，等.低分子右旋糖酐在小血管外科的應用機制[J].中華手外科雜志，2002，18（3）：181.

[4]Luo G，Feng Y，Zhang J，et al.Rosiglitazone enhances apolipoprotein M（Apom）expression in rat’s liver[J].Int J Med Sci，2014，11（10）：1 015.

[5]Vieira EM，Ueno CS，Valva VN，et al.Bone regeneration in cranioplasty and clinical complications in rabbits with alloxan-induced diabetes[J].Braz Oral Res，2008，22（2）：184.

[6]郭文芬，李萬玲，賈軍正，等.羅格列酮對動脈粥樣硬化兔白介素-18、單核細胞趨化蛋白-1 及基質金屬蛋白酶-9表達的影響[J].中國藥學雜志，2012，47（20）：1 621.

[7]Trobec K，Palus S，Tschirner A，et al.Rosiglitazone reduces body wasting and improves survival in a rat model of cancer cachexia[J].Nutrition，2014，30（9）：1 069.

[8]Shi HB，Luo J，Zhu JJ，et al.PPARγ regulates genes involved in triacylglycerol synthesis and secretion in mammary gland epithelial cells of dairy goats[J].PPAR Res，2013，doi：10.1155/2013/310948.

[9]李金艷，于洪儒，王洪新.小牛血清去蛋白注射液對2 型糖尿病合并腦梗死模型大鼠胰島素抵抗的影響[J].中國藥房，2009，20（7）：503.

[10]環奕，申竹芳.選擇性PPARγ調節劑治療糖尿病的研究新進展[J].中國藥理學通報，2008，24（2）：149.

[11]Dias C，Volpini RA，Helou CM.Rosiglitazone did not induce acute kidney injury in normocholesterolemic rats despite reduction in glomerular filtration rate[J].Kidney Blood Press Res，2013，38（2/3）：186.